Теоретическое и экспериментальное обоснование состава конъюгата коллоидного

для разработки иммунохроматографической тест-системы, предназначенной для идентификации H. pylori
Вятский государственный

университет
Биологический факультет
Кафедра микробиологии

Дипломная работа на тему:

Работу выполнила: Лежнина К. Е.
Руководитель: д.м.н., доцент Богачева Н. В.

используется для диагностики возбудителей инфекционных заболеваний благодаря своей высокой специфичности,

чувствительности и простоте манипуляций при проведении анализа.

размером частиц, обоснование выбора концентрации МкАт для дальнейшего приготовления конъюгата

с сериями КЗ.

с диаметром 30 нм;
с использованием метода электронной микроскопии и спектрофотометрии

провести оценку полученных серий КЗ и выбрать наиболее кондиционные по данному этапу исследования серии КЗ;
с помощью постановки реакции по определению «золотого числа» провести оценку адсорбционной способности серий КЗ с МкАт ;
теоретически и экспериментально обосновать состав конъюгата коллоидного золота с антителами для разработки иммунохроматографической тест-системы, предназначенной для идентификации H.pylori.

1 М (HAuCl4) = 339,967 г/моль.
1 М (HAuCl4) / 1 М (HAuCl4·3H2O)

= 0,863.
1 мл (HAuCl4) / 0,863 = 1,159 мл.
Для получения 10 мл 1% золотохлористоводородной кислоты – в 10 раз меньше – 0,1159 мл.
Использовали по 0,058 мл 10% раствора золотохлористоводородной кислоты.

График светопоглощения раствора КЗ серии № 8 и 8/1.
Рис. 1

– Визуальная оценка раствора КЗ серии №8 и 8/1.

12/1
Рис. 3 – Визуальная оценка раствора КЗ серии №

10, 10/1, 12, 12/1.

Рис. 4 – График светопоглощения раствора КЗ серии № 10, 10/1, 12, 12/1.

(цитрата натрия) - 6 мин
режим перемешивания - 500 об/мин
объем 10%

золотохлористоводородной кислоты – 58 мкл
объем 1% цитрата натрия - 720 мкл

количество гидрофильного полимера, способного адсорбироваться на поверхности 10 мл золя

золота и предотвращать его коагуляцию при добавлении к нему 1 мл 10% раствора NaCl.

10/1, 12, 12/1
МкАт 1811 и 387 («Биалекса», Россия) с

концентрацией белка 4,5 мгсм-3 и 8,0 мгсм-3

сериями КЗ № 10, 10/1, 12, 12/1

серией КЗ № 10/1 при постановке реакции на 0,005 М

КББ

нм при титровании антител в диапазоне от 25 мкг•см-3 до

12,5 мкг•см-3 с интервалом 2 мкг•см-3

на плато) для МкАТ 387 и серии КЗ № 10/1

соответствует 17 мкг·см-3
для МкАТ 387 и серии КЗ № 12/1 соответствует 19 мкг·см-3
рекомендуемая концентрация антител для конъюгации с сериями КЗ № 10/1 и 12/1 составляет, соответственно, 19,5 мкг·см-3 и 23,0 мкг·см-3

диаметром 30 нм;
при отработке методики приготовления наночастиц КЗ с заданным

размером экспериментально получено 12 серий препарата;
с использованием метода электронной микроскопии и спектрофотометрии проведена оценка полученных серий КЗ и выбраны наиболее кондиционные по данному этапу исследования серии КЗ № 10, № 10/1, № 12, № 12/1 с размером частиц от 15 до 30 нм;
с помощью постановки реакции по определению «золотого числа» проведена оценка адсорбционной способности четырех серий КЗ с выбранными для разработки ИХ тест-системы МкАт к Сag белку H.pylori – МкАт 1811 и МкАт 387;
теоретически и экспериментально обоснован состав конъюгата КЗ с антителами для разработки ИХ тест-системы, предназначенной для идентификации H.pylori: серии коллоидного золота 10/1 и 12/1 и МкАт к Сag белку H.pylori клон 387 с концентрацией, соответственно, 17 мкг•см-3 и 19 мкг•см-3.

из в составе конъюгата с антителами для разработки ИХ тест-системы,

предназначенной для идентификации H. pylori.
Подготовить статью для публикации в научно-практическом журнале.

конференции «Наука – производство – технологии – экология» в апреле

2015 г.

Богачевой Наталье Викторовне,

магистранту кафедры микробиологии Мокрецовой Ирине Михайловне