ИФА и ИХА тест-системы для диагностики инфекционных и паразитарных заболеваний

в ветеринарии. Современные методы, их особенности и различия.
Островский М.В.
к.в.н. начальник

отдела ветеринарии ЗАО «Биоград».

один из основных инструментов постановки диагноза при инфекционных и паразитарных

заболеваниях

дала толчок появлению быстрых тестов,
Современные быстрые тесты позволяют

Поставить анализ

без дорогостоящего оборудования
Получить результат анализа сразу на приеме либо в течение часа
Не требуют обязательной отправки в лабораторию
Применяются врачами как на приеме так и на выездах и в полевых условиях

и соответствующим ему антителом (реакция антиген – антитело)
Антиген - это вещество,

которое чужеродное для организма животного и которое может запустить иммунную систему (защитную реакцию).
Антитела - это белки, которые выделяются клетками организма животного при внедрении в него антигена

заболевания подразделяются на:

Иммунохроматографические (ИХА) : много производителей

Иммуноферментные (ИФА): Idexx

SNAP, Biogal ImmunoComb

(ИХА). В результате теста происходит классическая реакция "антиген-антитело" с образованием

иммунных комплексов, которые можно визуально обнаружить на тест-полоске.
Принцип действия состоит в том, что при погружении тест-полоски в биологическую жидкость (или другой жидкий образец), она начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Вместе с ней движутся нанесенные на нижнюю часть тест-полоски меченые специфические антитела, которые аффинно (прочно и родственно) связываются с анализируемым веществом.

с получением результата обычно в течение 10-15-20 минут.

Удобство: - Простой в

использовании и легкий в прочтении результатов

первую очередь, надежности и чувствительности тестов.
Надежность и чувствительность зависит,

во-первых, от качества используемых в тесте реагентов и, во-вторых, от концентрации антигена в биоматериале.
Качество используемых реагентов зависит от способов их получения, очистки и фиксации на полоске.
Концентрация антигена – от стадии заболевания и количества биоматериала.
Количество биоматериала особенно важно при использовании цельной крови.
Cущественную роль играет гематокрит, т.е. соотношение плазмы и форменных элементов. При высоком гематокрите снижается доля элементов антигена из плазмы по сравнению с форменными элементами

концентрации невозможно. При некоторых заболеваниях, они могут быть малоинформативными (например

FIP).
Экспресс-тесты (антигенные) «работают» только в течение ~ 3-7 дней после заражения (только при первоначальном воздействии антигена на организм животного) ( вирусные заболевания).
Минимальная определяемая ИХА концентрация антигена или антител сильно выше, чем у ИФА, что может давать «ложноотрицательный» результат на ранней стадии, поскольку уровень антигена/антител может быть слишком низким, чтобы обнаружить заболевание на ранней стадии.
Большой процент «ложноположительных» результатов, что мешает при исследовании животных на вирусоносительство.

анализа является то, что комплекс «антиген-антитело» выявляется с помощью субстрата,

который расщепляется ферментом с появлением окрашивания (ферментативное окрашивание).
При ферментативном окрашивании для достижения окраски требуется меньшее количество комплексов антиген-антитело, так как каталитические свойства ферментов позволяют действовать им в качестве усилителей: одна молекула фермента может способствовать образованию более 1•105 молекул продукта каталитической реакции в минуту, что обуславливает высокую чувствительность ИФА.

надежный и  чувствительный  метод  для поиска антител  и  антигенов и

оценки их концентрации. 
Обеспечивает не только качественный, но и количественный результат.
Определяет относительный уровень титра - диагностирует болезнь, на гораздо более низком уровне титра, чем положительное пороговое значение в ИХА - тестах.
Позволяет подтверждать подозрительные случаи заболевания, за которыми в дальнейшем может быть изменение титра.
ИФА – анализ более точный в определении, он позволяет не только диагностировать заболевание , но и определить его стадию и отследить динамику развития болезни.

недостатки:

Длительность и сложность постановки по сравнению с ИХА – методом

и невозможность количественного учета результатов без специального оборудования.
Необходимо большое количество образцов (8-96) для постановки анализа.
Требуется специальная подготовка специалистов
Высокая стоимость оборудования для оснащения лаборатории.

клинических признаков, которые могут изменяться от легких до тяжелых. При

необходимости, в дополнении к ним, делаются анализы крови. А так же кала, мочи и др. в зависимости от предполагаемого заболевания.
Иммунологические исследования помогут ветеринарному врачу получить информацию об иммунном статусе животного. Они либо подтвердят либо опровергнут предполагаемый диагноз, а так же могут помочь различить (отдифференцировать) одно заболевание от другого заболевания, инфекционного или неинфекционного характера.
Не бывает правильных или неправильных тестов.
Всё зависит от того, какой случай рассматривается у животного (больно оно или же здорово) и то, какой ответ (для каких целей ставился тест) необходимо получить при его постановке.