Слайд 1СРО на тему : Определение спор сульфид редуцирующих клостридий методом
мембранной фильтрации
Подготовила: Мубаракова улжан 406 гр.Оз
Слайд 2Споры сульфитредуцирующих клостридий
Сульфитредуцирующие клостридии (СРК) – это крупные грамположительные спорообразующие
палочки, у которых диаметр спор превышает диаметр вегетативной клетки, облигатные
анаэробы. Данная группа клостридий обладает свойством восстанавливать сульфиты до сульфидов, что используется при их идентификации
Поскольку способностью редуцировать сульфиты обладают только споровые анаэробы кишечного происхождения, это позволило выделить данную группу микроорганизмов как санитарно-показательную. Доминирующим представителем СРК является Clostridium perfringens. Эта бактерия является постоянным консорбентом кишечного тракта, хотя ее численность значительно ниже, чем E. col
Слайд 3 Споры СРК имеют высокую устойчивость в окружающей среде, поэтому их
обнаружение в воде может свидетельствовать о давнем фекальном загрязнении. Однако,
учитывая, что СРК способны при благоприятных условиях размножаться в окружающей среде (особенно в почве), ценность спор СРК как показателя фекального загрязнения не высока. В то же время, высокая устойчивость спор к агрессивным воздействиям внешней среды и, в том числе, к дезинфицирующим и стерилизующим приемам, делает споры СРК важным индикатором оценки качества обеззараживания воды. При дефектах в технологии обеззараживания спорообразующие клостридии – первые из бактерий, преодолевающие этот барьер. Кроме того, СРК относятся к индикаторам биологического загрязнения воды: наличие их спор будет указывать на возможное присутствие сходных по устойчивости цист и ооцист простейших и жизнеспособных яиц гельминтов.
Слайд 4В настоящее время для выделения и учета спор СРК существуют
коммерческие высокочувствительные и высокоспецифичные среды, содержащие соли тиогликолевой кислоты и
добавки антибиотиков, например SPS-агар.
Соли тиогликолевой кислоты обеспечивают более высокую степень анаэробиоза, что повышает чувствительность метода, а добавка антибиотиков повышает его специфичность.
Слайд 5Определение спор сульфитредуцирующих клостридий
Определение проводят:
прямым глубинным посевом в
пробирках,
двухслойным чашечным методом,
методом мембранной фильтрации или методом НВЧ
Слайд 6Благодаря редукции сульфитов, на железосульфитном агаре и сходных средах СРК
образуют колонии в виде черных пушинок или комочков ваты
Слайд 7На сегодняшний день самый надёжный, удобный и экономичный метод для
проведения микробиологических анализов - метод мембранной фильтрации.
Принцип метода - пропускание
анализируемой пробы через мембранный фильтр с размером пор 0,45-0,65 мкм, при этом происходит концентрирование присутствующих в пробе микроорганизмов на поверхности фильтра. Фильтр с задержанными микроорганизмами помещают на питательную среду и инкубируют в соответствующих условиях.
Слайд 8Метод мембранной фильтрации имеет неоспоримые преимущества:
количественное определение микроорганизмов
высокая точность результата
возможность
анализа проб с низким содержанием микроорганизмов
исключение влияния на результат анализа
ингибиторов роста микроорганизмов, бактериостатиков
экономия питательных сред
экономия рабочего времени
возможность документирования результатов
Слайд 9Микробиологический анализ методом мембранной фильтрации
Установки вакуумной фильтрации
2. Мембранные фильтры для проведения
микробиологических анализов
3.Питательные картонные подложки
4. Счётчик колоний
5. Аксессуары для систем вакуумной фильтрации
Слайд 10Установки вакуумной фильтрации
Для проведения микробиологических исследований используют вакуумные фильтрационные системы
из различных материалов. Исследование нескольких проб одновременно возможно с помощью
многосекционных систем.
В зависимости от потребностей и особенностей Вашей лаборатории возможна поставка систем вакуумной фильтрации как отечественного, так и зарубежного производства.
Слайд 11типы фильтродержателей, используемые в вакуумной фильтрации:
Стерильные пластиковые воронки Biosart 250 мл
Слайд 12Воронка из нержавеющей стали 40, 100, 500 мл
Слайд 13Стеклянный фильтродержатель 250 мл
Слайд 14Поликарбонатный фильтродержатель 250 мл
Слайд 15Одноразовые пластиковые воронки исключают необходимость предварительной стерилизации оборудования; применяются для
мембранной фильтрации больших объемов образцов (до 250мл).
Воронки поставляются стерильными, конструкция
позволяет крепить их на одиночных фильтродержателях. Воронки изготовлены из полипропилена и надежно соединяются с фильтродержателем, имеют градуировку на уровне 50, 100, 150 и 200 мл. Большой внутренний диаметр обеспечивает высокую скорость потока. Коническая форма позволяет выполнить тщательное послефильтрационное ополаскивание.
Слайд 16Установки вакуумной фильтрации из нержавеющей стали
Установки из нержавеющей стали и могут
быть односекционными или многосекционными (3-х и 6-ти).
Стандартная комплектация
установок: фильтродержатель из нержавеющей стали (диаметр фильтра 47 (50) мм, объем 500 мл.),
вакуумная колба с пробкой,
вакуумный шланг,
гидрофобный фильтр для защиты насоса от капельной влаги,
вакуумный насос.
Слайд 17Суть метода:
Мембранный фильтр с соответствующими размерами пор устанавливают в фильтрационную
систему и фильтруют пробу. При этом микроорганизмы, имеющиеся в исследуемой
пробе, осаждаются на поверхности мембранного фильтра. Ингибиторы роста могут быть устранены при помощи ополаскивания стерильной водой. Сразу же после этого мембранный фильтр помещают на питательную среду и инкубируют. Диффузия питательных веществ и продуктов обмена проходит через пористую систему нитроцеллюлозного мембранного фильтра. Колонии, появляющиеся на поверхности мембранного фильтра подсчитывают и пересчитывают их количество на общий объем пробы. Для селективного определения на мембранном фильтре рекомендуется использовать питательные картонные подложки (ПКП), обеспечивающие высокое качество анализов.
Слайд 18Мембранные фильтры для проведения микробиологических анализов
Фильтры представляют собой стерильные, индивидуально
упакованные диски диаметром 47 или 50 мм. Каждый фильтр полностью
готов к применению.
Материал мембранных фильтров – нитрат целлюлозы. Как показала многолетняя практика, этот материал обеспечивает оптимальные условия роста задержанных микроорганизмов, исключая таким образом получение ложного отрицательного результата.
Для упрощения подсчета результатов сетка, нанесенная на поверхность фильтров, делит зону фильтрации на 130 квадратов размером 3,1*3,1 мм.
Слайд 19Питательные картонные подложки
Питательные картонные подложки (ПКП) - это диск из
сорбирующего материала, пропитанный селективной питательной средой, а затем высушенный в
специальных условиях и стерильно упакованный в чашку Петри. Активация питательной среды проводится непосредственно перед использованием путём смачивания подложки стерильной водой.
Использование ПКП не требует приготовления и стерилизации питательных сред.
Слайд 20ПКП стоит применять, потому что они:
Экономичны. Исключают затраты времени и
труда на приготовление жидких культуральных сред (стерилизацию, очистку и т.д.)
Очень
удобны в использовании.
Просты в хранении. ПКП имеют срок годности от 9 до 24 месяцев при комнатной температуре
Универсальны. ПКП могут быть модифицированы в зависимости от того, чем они смачиваются. Например, если смочить ПКП Wort или Orange Serum 5% этанолом, то на ней вырастут уксуснокислые бактерии. А если смочить ПКП Caso 10% раствором сыворотки крови, то на ней растёт ряд патогенных микроорганизмов: пневмококки, стрептококки и др.
Демонстрируют постоянное качество. Процесс производства ПКП стандартизован и проходит тщательный контроль, отвечающий требованиям международных стандартов ISO и GMP. Каждая новая партия также проходит контроль качества. Ростовые свойства ПКП проверяются на ряде тестовых штаммов, специфичных для данной среды (эта информация приведена на обороте сертификата качества, который вкладывается в каждую упаковку). Таким образом, Вы можете быть уверены в стабильности состава питательных сред, а также надежности и воспроизводимости полученных результатов
Слайд 21Счетчик колоний
Конструкция этого компактного счётчика колоний выполнена в виде ручки. Ручка-счётчик
имеет 4-х разрядный жидкокристаллический дисплей,общий выключатель и чувствительный маркер. При
прикосновении к поверхности чашки Петри происходит звуковой сигнал, электронная регистрация касания и вокруг колонии возникает цветовой след.
Маркер одинаково хорошо пишет как на пластиковой, так и на стеклянной чашке Петри. Счетчик имеет аккумуляторную батарею емкостью на 1 миллион касаний.
Подсчёт колоний с помощью ручки не только исключает ошибки, но становится исключительно лёгкой процедурой
Слайд 22Аксессуары для систем вакуумной фильтрации
Вакуумный насос
Колба Инкубатор
Гидрофобный фильтр
Слайд 23Анаэробный инкубатор
Ручной вакуумный насос
Устройство для распаковки фильтров
Приставка для предфильтрации
Слайд 24Заключение:
Таким образом, определение спор сульфитредуцирующих клостридий методом мембранной фильтрации является
наиболее эффективным и экономичным медодом
Споры клостридий способны существовать в воде
значительно дольше, чем колиформные организмы и они более устойчивы к обеззараживанию. Их присутствие в прошедшей дезинфекцию воде может указывать на ее недостаточную очистку и, следовательно, на то, что устойчивые к обеззараживанию патогенные микроорганизмы могли не погибнуть.
Из-за своей способность к длительному присутствию в воде сульфитредуцирующие клостридии лучше всего подходят для обнаружения периодического или давнего загрязнения.
С другой стороны, именно в силу того, что клостридии имеют тенденцию к выживанию и накапливанию в воде, они могут обнаруживаться намного позднее и дальше от места загрязнения, что может усложнить интерпретацию результатов биологического исследования качества воды.
Именно поэтому, не смотря на свое особое значение, тест на сульфитредуцирующие клостридии не включен Всемирной Организацией Здравоохранения в обязательный перечень для рутинного контроля распределительных систем
Слайд 25Список использованной литературы:
http://www.septech.ru/items/154
http://mibio.ru/contents.php?id=2536
Http://www.chem.msu.su/
http://medvuz.info/load/mikrobiologija/mikrobiologija_uchebnik_vorobev_a_v_bykov_a_s_pashkov_e_p/64-1-0-975