Слайд 1ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЖИДКИХ ЦОЛИКЛОНОВ (МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ)
АНТИ -
А, АНТИ - В И АНТИ - АВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
ГРУПП КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ПО СИСТЕМЕ АВО.
Слайд 21. Назначение
Цоликлоны Анти-А, Анти-В и Анти-АВ предназначены для определения групп
крови человека в системе АB0 в прямых реакциях гемагглютинации и
применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.
Слайд 32. Характеристика и основные свойства цоликлоов Анти-А, Анти-В и Анти-АВ
Моноклональные
Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат
к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом, Цоликлон Анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.
Слайд 4Форма выпуска
Цоликлоны выпускаются в жидкой форме в пластиковых флаконах
объемом 10 мл с капельницей или в стеклянных флаконах объемом
5 мл. Цоликлон Анти-А - красного цвета, Анти-В - синего и Анти-АВ - бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%.
Хранение
Срок хранения - 2 года при температуре 2-8°С. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2-8°С в течение месяца в закрытом виде.
Слайд 6Рекламация
Основаниями для рекламации являются: отсутствие активности, неспецифичность, нарушение целостности флакона,
наличие хлопьев, получение реагента с истекшим сроком годности или недостаточными
сведениями.
При составлении рекламации необходимо указать дату получения, номер серии, причины, по которым реагент признан негодным. Необходимо также приложить протокол с результатами проверки реагента. Вместе с рекламацией направляют 2-3 невскрытых флакона с Цоликлоном данной серии.
Слайд 7Техника определения групп крови человека системы АВО с помощью Цоликпонов
Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови,
взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на плоскости: на пластине или планшете. Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С.
Слайд 8Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны Анти-А, Анти-В
и Анти-АВ по одной большой капле (0.1 мл) под соответствующими
надписями.
3 2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл).
3.3. Смешайте кровь с реагентом,
Слайд 9 Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при легком
покачивании пластины или планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов
с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В
Слайд 10Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным.
Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным
глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.
Слайд 11Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлена в
таблице:
* Знаком «+» обозначено наличие агглютинации, знаком «-» -
отсутствие агглютинации
** Окончательно АВО принадлежность устанавливается по результатам перекрестного определения: антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютининов в сыворотке.
Слайд 12Контроль специфичности реакции агглютинации
В составе Цоликлонов нет высокомолекулярных добавок, способных
вызвать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов, поэтому не требуется проведения контроля с
растворителем. При положительном результате реакции агглютинации со всеми тремя Цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешайте на плоскости 1 каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей физиологического раствора; Кровь можно отнести к группе- АВ (IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.
Слайд 13 Исследуемая кровь принадлежит к группе О(I), если со всеми цоликлонами
получены отрицательные результаты
Слайд 14Исследуемая кровь принадлежит к группе А(II), если в реакции с
цоликлонами анти-А и анти-АВ получен положительный результат, а с цоликлоном
анти-В получен отрицательный результат
Слайд 15Исследуемая кровь принадлежит к группе B(III), если в реакции с
цоликлонами анти-В и анти-АВ получен положительный результат, а с цоликлоном
анти-А получен отрицательный результат
Слайд 16В тех случаях, когда положительный результат получен со всеми цоликлонами,
для исключения неспецифической агглютинации произвести дополнительное контрольное исследование с раствором
натрия хлорида, 0,9%. Для этого на планшет нанести большую каплю (100 мкл) раствора натрия хлорида, 0,9%, рядом добавить 10-30 мкл исследуемых эритроцитов. Капли перемешать стеклянной палочкой. Наблюдать за реакцией 3 минуты, покачивая планшет.