Лабораторная диагностика туберкулёза

Mycobacteriaceae
РОД

Mycobacterium
ВИДЫ M. tuberculosis
M. bovis
M. avium
M. аfricanum
M. leprae

учет через 48 – 72 ч



БИОЛОГИЧЕСКИЙ
морские свинки –
M.

tuberculosis
кролики – M. bovis

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА

БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ

АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ

БИОЛОГИЧЕСКИЙ

фуксин Циля
подогреть 2-3 раза
дать остыть, промыть
серная кислота 5%
промыть водой
метиленовая

синька 3-5 мин.

ДИАГНОЗ ТУБЕРКУЛЕЗА.
Чтобы обнаружить микобактерии туберкулеза

методами микроскопии, в 1 мл исследуемого материала должно содержаться не менее 10000 микробных клеток.

Не позволяет дифференцировать возбудителей туберкулеза от нетуберкулезных микобактерий - возбудителей микобактериозов.

Кислотоустойчивость окраски можно наблюдать у:
Rhodococcux, Nocardia, Legionella, а также цисты Cryptosporidium и Isospora.

НА ОСНОВАНИИ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ВОЗМОЖНО СДЕЛАТЬ ЗАКЛЮЧЕНИЕ ТОЛЬКО
О НАЛИЧИИ ИЛИ ОТСУТСТВИИ В ПРЕПАРАТЕ
КИСЛОУСТОЙЧИВЫХ БАКТЕРИЙ.

НЕДОСТАТКИ БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКОГО МЕТОДА

морфология
культуральные свойства
биохимические свойства

Определение антибиотикорезистентности
(В отличие от бактериоскопического позволяет

на 30 - 50% увеличить число выявляемых бактериовыделителей )

Калий однозамещенный фосфорнокислый

Магний сернокислый Магний лимоннокислый L-аспарагин Глицерин
Малахитовый зеленый
Яичная масса. Вода дистиллированная

Калий однозамещенный
фосфорнокислый
Магний сернокислый
Натрий лимоннокислый
Квасцы железоаммонийные
Аммоний лимоннокислый
однозамещенный
Натрий глутаминовокислый
однозамещенный
Глицерин
Малахитовый зеленый
Яичная масса.
Вода дистиллированная
pH = 6,3 - 6,8

бусами и 18-20 час 37° С, нейтрализация - кислота соляная

(HCl) концентрированная, промывка дистиллированной водой.

Посев по 0,5 - 0,6 мл в 2 пробирки с разными плотными средами;
переместить в горизонтальные штативы - "диваны" , в термостат при температуре 37° С.

Инкубация 12 недель при обязательном еженедельном просмотре.

----------------------------T------------------------------------¬
¦ Культуральные признаки ¦

Комплекс М.tuberculosis ¦
+---------------------------+------------------------------------+
¦Скорость роста ¦Медленнорастущие > 3 недель ¦
+---------------------------+------------------------------------+
¦Пигментообразование ¦Цвет слоновой кости ¦
+---------------------------+------------------------------------+
¦Морфология колоний ¦R или S формы ¦
+---------------------------+------------------------------------+
¦Наличие кислотоустойчивости¦Выраженная кислотоустойчивая окраска¦
+---------------------------+------------------------------------+
¦Температура роста ¦Оптимальный рост при 35 - 37° C ¦
L---------------------------+-------------------------------------

ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ МИКОБАКТЕРИЙ

КОМПЛЕКСА М.TUBERCULOSIS

-------------------------------T---------------------------------¬
¦ Дифференциальные тесты ¦ Микобактерии ¦
¦ +---------------T-----------------+
¦ ¦М.tuberculosis ¦ нетуберкулезные ¦
¦ ¦ ¦медленнорастущие ¦
+------------------------------+---------------+-----------------+
¦ Основные биохимические тесты на наличие: ¦
+------------------------------T---------------T-----------------+
¦Никотиновой кислоты ¦ + ¦ - <*> ¦
+------------------------------+---------------+-----------------+
¦Нитратредуктазы ¦ + ¦ +/- ¦
+------------------------------+---------------+-----------------+
¦Термостабильной каталазы ¦ - ¦ + ¦
+------------------------------+---------------+-----------------+
¦Рост на среде с натрием ¦ - ¦ +/+/- ¦
¦салициловокислым (1000 мкг/мл)¦ ¦ ¦
+------------------------------+---------------+-----------------+
¦ Дополнительные тесты: рост на средах, содержащих: ¦
+------------------------------T---------------T-----------------+
¦Паранитробензойную кислоту ¦ - ¦ + <**> ¦
¦(500 мкг/мл) ¦ ¦ ¦
+------------------------------+---------------+-----------------+
¦Натрия хлорид 5% ¦ - ¦ + <***> ¦
L------------------------------+---------------+------------------

<*> За исключением М.simae.
<**> За исключением М.gastri.
<***> За исключением М.marinum, M.terrae.

Для дифференциации микобактерий комплекса М.tuberculosis, к
которому относятся следующие виды микобактерий: M.tuberculosis,
М.bovis, М.africanum, М.microti, от медленнорастущих
нетуберкулезных кислотоустойчивых

МИКОБАКТЕРИЙ КОМПЛЕКСА М.TUBERCULOSIS

-------------------------------T---------------------------------¬

¦ Дифференциальные тесты ¦ Виды микобактерий комплекса ¦
¦ ¦ М.tuberculosis ¦
¦ +--------T--------T-------T-------+
¦ ¦М.tuber-¦М.bovis ¦М.af- ¦М.mic- ¦
¦ ¦culosis ¦ ¦ricanum¦roti ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦ Основные биохимические тес ты на наличие: ¦
+------------------------------T--------T--------T-------T-------+
¦Никотиновой кислоты ¦ + ¦ - ¦ +/- ¦ +/- ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦Нитратредуктазы ¦ + ¦ - ¦ - ¦ - ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦Термостабильной каталазы ¦ - ¦ - ¦ - ¦ -/+ ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦Рост на среде с натрием ¦ - ¦ - ¦ - ¦ - ¦
¦салициловокислым (1000 мкг/мл)¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦ Дополнительные тесты: рост на средах, содержащих: ¦
+------------------------------T--------T--------T-------T-------+
¦Пиразинамид ¦ + ¦ - ¦ + ¦ + ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦Мочевина ¦ +/- ¦ +/- ¦ + ¦ +/- ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦Гидролиз твина в течение 10 ¦ -/+ ¦ -/+ ¦ - ¦ -/+ ¦
¦дней ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+------------------------------+--------+--------+-------+-------+
¦ТСН (2 мкг/мл)
гидразидом
тиофен-2-карбоксиловой кислоты ¦ + ¦ - ¦ +/- ¦ +/- ¦
L------------------------------+--------+--------+-------+--------

распространение определение лекарственной устойчивости методом

абсолютных концентраций на среде Левенштейна-Йенсена.

Уровень устойчивости данного штамма в целом выражается той максимальной концентрацией препарата (количество мкг в 1 мл питательной среды), при которой еще наблюдается размножение микобактерий (по числу колоний на плотных средах).

КРИТЕРИЕМ УСТОЙЧИВОСТИ МИКОБАКТЕРИАЛЬНОЙ ПОПУЛЯЦИИ НАЗЫВАЮТ ПОКАЗАТЕЛЬ РОСТА МИКОБАКТЕРИАЛЬНОГО ПУЛА, ВЫРАЖЕННЫЙ В АБСОЛЮТНЫХ (ЧИСЛО КОЕ) ИЛИ ОТНОСИТЕЛЬНЫХ ЕДИНИЦАХ (ПРОПОРЦИЯ КОЕ), НА ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЕ, СОДЕРЖАЩЕЙ ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫЙ ПРЕПАРАТ В КРИТИЧЕСКОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ, ПРЕВЫШЕНИЕ КОТОРОГО СЧИТАЕТСЯ НАЛИЧИЕМ ПРИЗНАКА УСТОЙЧИВОСТИ МИКОБАКТЕРИЙ.

Для метода абсолютных концентраций появление более 20 КОЕ микобактерий на питательной среде, содержащей лекарственный препарат в критической концентрации, свидетельствует о том, что данный штамм микобактерий обладает лекарственной устойчивостью. При этом необходимо иметь в виду, что объем засеваемой суспензии клеток стандартизован и соответствует 1 x 107 микробных тел.

КОНЦЕНТРАЦИЙ НА СРЕДЕ ЛЕВЕНШТЕЙНА-ЙЕНСЕНА

аттенуированная, (тип bovis).
Однократно, подкожно новорожденным
3-7 дневного возраста.
Ревакцинация

7лет, 14 лет.