Подходы к анализу производных барбитуровой кислоты

1021 от 25 декабря 1973г
«О введении нового

перечня токсикологических веществ, подлежащих судебно – химическому исследованию в лабораториях бюро судебно – медицинской экспертизы»
1. Группы веществ, на которые должны производиться исследования при общем анализе
1.3. Органические вещества, изолируемые подкисленной водой или подкисленным
спиртом, другими органическими растворителями:
Барбитал, фенобарбитал, барбамил, этаминал, циклобарбитал, гексобарбитал, бензонал.
2. Вещества, на которые расширяют общий анализ в зависимости от клинической и секционной картины, результатов гистологического, гистохимического исследования, особенностей течения химических реакций и т. д.
производные барбитуровой и тиобарбитуровой кислот, не указанные в п. 1.3;

может метилироваться, (метилфенобарбитала), а замещение кислорода серой в положении 2 приводит к

образованию тиобарбитуратов, (тиопентала).

Низкий терапевтический индекс

Широкое применение

Синергизм с алкоголем и др. психоактивными средствами.
Быстро всасываются после орального введения
(биодоступность 90—100 %)

эфире, в водных растворах щелочей.
УФ-спектры большинства производных барбитуровой кислоты схожи,

они не имеют заметного поглощения в области 200 — 330 нм при кислых инейтральных значениях рН, но имеют два максимума поглощения при щелочных значениях рН, которые характеризуют поглощение ионизированных форм первой (238 — 240 нм) и второй (254 — 256 нм) ступени диссоциации.

кето - енольная и 2) лактим – лактамная

(валентные) 1712–1725;
–CONH–(валентные) 1744–1770;
=C–N– (валентные) 1300–1320;
C=O(деформационные) 1210–1245;
=C–H

(деформационные) 830–875.

фенольного фрагмента в пара-положении и его конъюгация с глюкуроновой кислотой.
Этаминал

натрия –
1. гидроксилирование: азота в положении 1;
2.в радикале в положении 3 и его окисление через кетон до карбоновой кислоты

1.
2. Окисление в радикале по 3 положению до карбоновой кислоты.

Циклобарбитал

– окисление до кетоциклобарбитала в мета- положении радикала.

(подщелоченой водой)
Метод Швайковой (подкисленной водой, с очисткой переэкстраккцией)
Метод Попова (водой

подкисленной серной кислотой)

спектроскопия
Иммунно-ферментный анализ
ВЭЖХ и ГЖХ
Масс-спектрометрия

с пиридином и солями меди. (аморфный осадок)
Мурексидная проба (розовая окраска)
Реакция

с родамином (комплексы светло-оранжевые или оранжево-красные в четыреххлористом углероде)

Микрокристаллические реакции

Выделение кислотной формы барбитуратов.
Реакция с хлорцинкиодом
Реакция со смесью растворов хлорида железа и иодида калия.
Реакция с дииодокупратом калия в растворе иода.
Реакция с подкисленным спиртовым раствором иодида калия.

хлороформ:н-бутанол:25% раствор аммиака (70:40:5)
Обнаружение – дифенилкарбазоном (ДФК) – 0,1% раствор

в хлороформе и раствором сульфата ртути – 5% раствор в концентрированной серной кислоте.
Rf фенобарбитала = 0,4

безводном растворителе (пиридине):


Внутрений стандарт.

Japan).
Колонка: метилсилоксановая капиллярная колонка DB-1, 15 м , 0.53 мм
Температура

колонки: 60 °C → 8 °C/мин → 250 °C; температура инжектора: 250 °C ;
Газ носитель: He (15 мл/мин); осушающий газ: He (30 мл/мин);
детектор: ПИД и азотно-фосфорный детектор

пустой плазмы (C) используя азотно-фосфорный детектор. 1: метобарбитал; 2: аллобарбитал;

3: амобарбитал;4: пентобарбитал; 5: секобарбитал; 6: гексобарбитал; 7: фенобарбитал.

размер частиц 2мкм, Toso, Tokyo, Japan).
Подвижная фаза: 8 мM фосфорной

кислоты раствор/ацетонитрил (3:7, v/v).
Детектирование: 215 нм;
Скорость потока: 0.4 мл/мин;
Температура: 20 С.

фосфата аммония
Количественное определение – метод добавок

1021 от 25 декабря 1973г
«О введении нового

перечня токсикологических веществ, подлежащих судебно – химическому исследованию в лабораториях бюро судебно – медицинской экспертизы»
2. Вещества, на которые расширяют общий анализ в зависимости от клинической и секционной картины, результатов гистологического, гистохимического исследования, особенностей течения химических реакций и т. д.
элениум, нитразепам, седуксен;

случаев отравления феназепамом.

и являются производными 5-фенил-3Н-1,4-бензодиазепина (хлозепид) и 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-она (сибазон, нитра­зепам, нозепам,

феназепам и др.):

в воде, растворимы в воде соли 1,4-бенздиазепинов, содержащих амино- (как

у хлордиазепоксида) или карбоксильную группу в качестве заместителей. В органических растворителях растворимость зависит от структуры. Наиболее высокая растворимость наблюдается в апротонных растворителях (диметилформамиде, диметилсульфоксиде).

наличии основных заместителей. Так, хлордиазепоксид дает устойчивые соли с сильными

кислотами, выступая в качестве днокислотного
основания.
При введении в ядро 1,4-бенздиазепинов нитро-, окси- и других групп основность соединений снижается.
1,2-дигидропроизводные 1,4-бенздиазепина (оксазепам, нитразепам) проявляют также слабокислые свойства за счет наличия в молекуле амидной группы.

с λmax в областях:
1. 200-215 нм
2. 220-240 нм
3. 290-330 нм
Две

первые полосы соответствуют возбуждению ароматических хромофоров.
Третью длинноволновую полосу относят к азометиновой связи, сопряженной с
бензогруппой.
По характеру поглощения в УФ-области 1,4-бенздиазепины относятся к
соединениям, абсорбция которых изменяется от величины значений рН:
- в кислой среде – за счет протонирования атома азота;
- в щелочной среде в молекуле 1,2-дигидропроизводных 1,4-бенздиазепина
наблюдается изменение хромофорной системы (увеличение сопряжения за счет лактим-лактамной таутомерии азометиновой связи в положения 1,2 - нитразепам, оксазепам).
Это свойство положено в основу идентификации соединений данной группы по
электронным спектрам поглощения.

связываются с белками плазмы, поэтому скорость абсорбции достаточно высокая (градиент

концентрации направлен в кровь).
Максимальная концентрация в крови при введении через рот достигается через 2-5 часов после введения терапевтических доз и через 4-8 часов – токсических доз препаратов. Далее концентрация их в крови сохраняется в течение 2-х часов на одном уровне, после чего начинает медленно снижаться.
Наибольшее содержание 1,4-бенздиазепинов в ЖКТ, тканях печени, почек.

Наибольшей активностью обладают метаболиты, полученные в процессе деалкилирования.
Разрыв азепинового

кольца при гидролизе 1,4- бенздиазепинов и образование глюкуронидов приводит к потере фармакологической активности.
Наряду с основными соединениями продукты метаболизма обнаруживаются во всех тканях организма.
Выводятся, в основном, почками в виде основных соединений и метаболитов.
Время полувыведения (Т ½) при введении соединений через рот
хлордиазепоксид - 8-28 часов
диазепам - 20-42 часа
оксазепам - 10-14 часов
нитразепам - 7-10 часов
Интервал Т 1/2 зависит от принятой дозы
LD > 500 мг

их метаболитов
Отрицательное судебно-химическое значение
По нативным соединениям
Установление структуры токсиканта и его

метаболитов

120 С, 20мин)
2. Экстракция 2-аминобензофенонов хлороформом (1:1 Х3)
3. ТСХ (элюент

– бензол, декция – собственная окраска, УФ, азокраситель)
4. Элюирование пятна с пластины
5 УФ- спектрофотометрия при 2-х рН менее 5 и более 7
6. Количественное определение ФЭК по реакции образования азокрасителя.

камеры парами растворителя – не менее 10 мин.
Высота поднятия фронта

растворителя – 10 см.


Первая точка (Зона А) – АХБ; АНБ
Вторая точка (Зона Б)- объект исследования (экстракт из гидролизата)
Третья точка (Зона В)- МХБ

в УФ-области света (254-360 нм)
- по реакции образования азокрасителя с

солью дназония аминобезофенонов с щелочным раствором β-нафтола (или N-α-нафтилэтилендиамин дихлоридом).
Предел обнаружения составляет 1 — 5 мкг

– извлечение из биологического объекта
2а – экстракция в органический растворитель
2.

Этап – разделение и очистка с помощью ТСХ (элюирование пятна) или ТФЭ
3. Этап – Идентификация по спектрам или хроматографическим параметрам.

кровь, плазма, сыворотка, моча (не менее 10мл), ткани печени, почек

(не менее 200 г), желудок и тонкий кишечник с содержимым (не менее 200 г).
Изъятые объекты должны быть быстро направлены на исследование в замороженном состоянии.
Консервирование этанолом не рекомендуется.

& W Scientifi c, Folsom, CA, USA).
Хроматографическая система: GC-17A газоввый

хроматограф (Shimadzu Corp., Kyoto, Japan);
Температура колонки: 150 °C (1 мин) → 20 °C/мин → 300 °C (6.5 мин);
Температура инжектора: 250 °C; газ носитель: He; скорость потока: 0.9 мл/мин;
Ввод пробы: сброс пробы 1 мин.
MS условия: QP-5050A масс-спектрометр (Shimadzu Corp.); ионизация: Электронный удар; энерги электрона 70 eV; температура интерфейса: 250 °C.

хлоразепам, 5: хлордиазепоксид, 6:оксазолам, 7: мидазолам, 8: флунитрозепам, 9:флутопразепам, 10:

бромазепам, 11: празепам,12: ниметразепам, 13: мексазолам, 14: флуразепам, 15: нитразепам, 16: клоназепам, 17: эстазолам, 18: алпрозалам, 19: тофизопам, 20: этизолам, 21: триазолам, 22: бротизолам.

Industries, Ltd.,Osaka, Japan)
Хроматографическая система: LC 1100 Series ВЭЖХ (Agilent

Technologies,Palo Alto, PA, USA);
Подвижная фаза: ацетатный буфер/ацетонитрил (75:25, v/v)
Скорость ПФ: 0.3 мл/мин.
МС условия: Масс-спектрометр с йонной ловушкой (Th ermoFinnigan Corp., San Jose, CA,USA);
ионизация: электроспрей (ESI); температура капилляра: 230 °C; осушающий газ: N2