Современные биохимические и иммунологические методы исследования в медицине

прямой
Витамин В12
Гликозилированный гемоглобин A1c
γ-Глутамилтранспептидаза (ГГТП)
Глюкоза крови

Глюкозотолерантный тест (ГТТ)
Гомоцистеин
Железо    
Исследование газового состава

крови
Калий
Кальций
Кальций ионизированный
Кальций мочи
Кислая фосфатаза (КФ)
Кислотно-основной состав крови (КОС)
Клиренс эндогенного креатинина

катехоламинов и их метаболитов в моче
Определение кортикостероидов в моче
Определение наркотических

веществ в моче
Реакция Бенс-Джонса

Креатинин
Креатинфосфатаза
Креатинфосфокиназа МВ-фракция (КФК - МВ)
Креатинфосфатаза (КФК)
Лактатдегидрогеназа
Лептин
Магний
Миоглобин
Мочевая кислота
Мочевина
Натрий 

плотности (бета-липопротеиды) (ХЛНП)
Холестерин липопротеидов очень низкой плотности (пре-бета-липопротеиды)
Холинэстераза
Церулоплазмин (медная оксидаза)
Щелочная

фосфатаза (ЩФ)

С-пептид
Тимоловая проба
Трансферрин
Триглицериды
Тропонин (количественное исследование)
Ферритин
Фолиевая кислота
Фосфор
Хлориды

корректными, перед сдачей необходимо полностью отказаться от пищи начиная с

предшествующего вечера (максимум - очень легкий ужин), от приема лекарственных препаратов, воздержаться от интенсивной физической нагрузки и выяснения отношений с окружающими. Стресс способен исказить результаты биохимии крови.
Для определения уровня сахара крови «после нагрузки», что по-иному называется глюкозотолерантным тестом (ГТТ), исследуемый пациент в течение нескольких дней придерживается своей обычной диеты, но без избытка углеводов и жиров, а за три дня до взятия пробы ему отменяются инъекции глюкозы, кофеина и адреналина.

развитии сахарного диабета);

Повышение в крови уровней ХС, липопротеидов, ТГД (

нарушение жирового обмена );

Изменение концентрации фосфора, кальция (нарушение минерального обмена, что встречается при заболеваниях почек, рахите, некоторых гормональных нарушениях);

Изменение концентрации калия, натрия и хлора неблагоприятно сказывается на работе внутренних органов, особенно сердца;

почек, голодании;

Повышение таких показателей, как: билирубин, АЛТ, АСТ, ГГТ, щелочная

фосфатаза, свидетельствует о нарушение функции печени;
изменение уровня амилазы - патология поджелудочной железы;
Повышение уровня креатинина характерно для почечной недостаточности;
Повышение концентрации КФК-МВ, ЛДГ, АСТ указывает на инфаркт миокарда;
Острофазовые реакции: повышение титра серомукоида, гаптоглобина, церулопапзмина, сиаловых кислот, СРБ свидетельствует о воспалении в организме.

в крови и моче, является важным показателем, но не специфическим

для острого панкреатита Кроме поджелудочной железы, источником амилазы могут быть слюнные железы, легкие, слизистая оболочка кишечника. К заболеваниям, приводящим к повышению активности амилазы в крови, могут относиться, перфорация пептической язвы, холецистит и аппендицит. Показано, что только у 1/3 пациентов с острой болью в животе повышение амилазы обусловлено патологией поджелудочной железы.

в лабораторной диагностике острого панкреатита является определение активности эластазы в

сыворотке крови и кале. Данный показатель увеличен на протяжении нескольких дней даже после единичного приступа острого панкреатита. При обострении хронического панкреатита у ряда больных наблюдаются гипербилирубинемия, увеличение в сыворотке крови активности щелочной фосфатазы и ГГТФ вследствие развития частичной или полной непроходимости желчных путей

новообразование выделяет свой, специфический белок - антиген рака.
Выявить раковые

антигены на ранних стадиях можно, сделав анализы крови на онкомаркеры .
Онкомаркеры также дают реальную возможность предотвратить развитие онкологии, определив наличие опухоли в стадии «ноль».

АФП

ХГЧ

ПСА (онкомаркер простаты)
РЭА

СА — 125 (онкомаркер яичников)

СА 15—3 (онкомаркер молочной железы)

СА 19—9 (онкомаркер поджелудочной железы)

широко применяются в диагностике инфекционных заболеваний, вирусных инфекций, различных мутаций позволяя

обнаруживать даже единичные микроорганизмы в организме человека.
ДНК-диагностика объединяет несколько методов исследования, самый распространенный из них — метод ПЦР (полимеразной цепной реакции).

это метод лабораторной диагностики инфекционных заболеваний, в частности, этот метод широко

применяется и для диагностики ЗППП — заболеваний, передающихся половым путем.

ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач. «Небольшой фрагмент ДНК» — это несколько сотен пар оснований ДНК — кирпичиков, расположенных в строго определенной последовательности, и потому образующих неповторимый узор.

того, чтобы найденный фрагмент размножить, клонировать: чтобы однозначно «увидеть» эти

фрагменты ДНК, к окончанию реакции их должно быть не менее 1012 штук.

При проведении ПЦР-анализа ведется поиск такого фрагмента ДНК инфекции, который специфичен только для данного микроорганизма. Это значит, что этот фрагмент ДНК «особенный» — он встречается только у этого микроба (или группы родственных микробов), но не встречается ни у одного другого микроба.

цепной реакции (ПЦР) был разработан Кэрри Мюллисом в 1983г. и за разработку ПЦР-анализа

Кэрри Мюллис уже в 1993 г. был удостоен Нобелевской премии в области химии.

Появлению метода проведения полимеразной цепной реакции предшествовали определенные достижения молекулярной генетики: к тому времени уже были расшифрованы нуклеотидной последовательности геномов ряда микроорганизмов и выделены специфические.

уникального фермента ДНК-полимеразы (или taq-полимеразы). Именно этот фермент катализирует и «контролирует»

все процессы во время проведения анализа методом ПЦР. Особенность этого фермента — он термостабилен, исключительно термостоек: он выдерживает нагревание до температуры кипения без потери активности, а «любимый» его температурный режим во время работы — 72оС. Многие реакции при проведении ПЦР идут почти исключительно при повышенной температуре.

и у женщин, соскоб из цервикального канала)
кровь, плазма, сыворотка крови
биологические жидкости

(сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкости, слюна)
моча (используется первая порция утренней мочи)
мокрота
биопаты желудка и ДПК
слизь и другие биологические выделения

Необходим образец генетического материала с места преступления — кровь, слюна, сперма,

волосы и т. п. Его сравнивают с генетическим материалом подозреваемого. Достаточно совсем малого количества ДНК, теоретически — одной копии. ДНК расщепляют на фрагменты, затем амплифицируют с помощью ПЦР. Фрагменты разделяют с помощью электрофореза ДНК. Полученную картину и называют генетическим отпечатком пальцев (англ. genetic fingerprint).

однояйцевых близнецов), родственные связи все же можно установить, сделав несколько

таких отпечатков (рис. 3). Тот же метод можно применить, слегка модифицировав его, для установления эволюционного родства среди организмов.

Результаты электрофореза ДНК-фрагментов, амплифицированных с помощью ПЦР.
(1) Отец. (2) Ребенок. (3) Мать. Ребенок унаследовал некоторые особенности генетического отпечатка обоих родителей, что дало новый, уникальный отпечаток

Эти различия детерминируются на генетическом уровне. Например, у одного пациента

определенный цитохром (белок печени, отвечающий за метаболизм чужеродных веществ) может быть более активен, у другого — менее. Для того, чтобы определить, какой разновидностью цитохрома обладает данный пациент, предложено проводить ПЦР-анализ перед применением лекарства. Такой анализ называют предварительным генотипированием (англ. prospective genotyping).

результате генноинженерных манипуляций, получения большого количества продукта данного гена. ПЦР

используется для того, чтобы амплифицировать ген, который затем вставляется в вектор — фрагмент ДНК, переносящий чужеродный ген в тот же самый или другой, удобный для выращивания, организм.
В качестве векторов используют, например, плазмиды или вирусную ДНК. Вставку генов в чужеродный организм обычно используют для получения продукта этого гена — РНК или, чаще всего, белка. Таким образом в промышленных количествах получают многие белки для использования в сельском хозяйстве, медицине и др.

другие методы.

Высокая специфичность и чувствительность. В материале, направленном на

исследование, определяется уникальная последовательность нуклеотидов, характерная только для конкретного возбудителя. Таким образом, можно говорить, что специфичность метода достигает 100 процентов

диагностика - от момента сдачи материала на анализ до получения

результата - отнимает всего один день.

При помощи ПЦР определяют возбудителя, а не реакцию на его внедрение со стороны организма.

Оборудование, используемое для ПЦР, стандартно, оно не зависит от того, что именно и где именно мы ищем.

биологической очистки со степенью 99,9 процента(образец может быть загрязнен -

возможно "ложное срабатывание").

Может быть отрицательный результат ПЦР при наличии даже явной клинической картины. Одна из наиболее возможных причин - материал для исследования был взят "не оттуда".

Образец должен брать квалифицированный врач, строго следуя инструкции, которую ему дает лаборатория

Оценивать результаты ПЦР должен практический врач, который лечит конкретного больного.
Не всегда положительный ответ ПЦР означает наличие заболевания. Например, человек пролечился от какого-либо заболевания, но погибший и уже не опасный возбудитель будет еще некоторое время "разбираться на запчасти" защитной системой организма. Если в этот момент сделать ПЦР - результат окажется положительным.

.

определении комплекса антиген-антитело за счет введения в один из компонентов

реакции ферментативной метки с последующей ее детекцией с помощью соответствующего субстрата, изменяющего свою окраску.
Для проведения любого варианта ИФА основой служит определение продуктов ферментативных реакций при исследовании тестируемых образцов в сравнении с негативными и позитивными контролями.

Благодаря тому, что иммуноглобулины разных классов вырабатываются в определенной последовательности

(М, G, А), с помощью ИФА можно диагностировать инфекцию на разных стадиях и отслеживать динамику развития процесса.
обнаружение иммуноглобулинов указывает только на наличие антител, а не на наличие возбудителя, поэтому при диагностике ряда инфекций наиболее информативно сочетание двух и более методов: выявление возбудителя (ПЦР или другие методы) и антител к ним (ИФА).   С помощью ИФА оценивают наличие первичных (IgM)  и вторичных (IgG) антител к микробному или вирусному антигену. Можно диагностировать такие инфекции, как герпес, цитомегаловирус, гепатиты В и С, токсоплазмоз, хламидиоз, краснуха.

выявлять концентрацию до 0,05 нг/мл. Такая чувствительность метода определяется способностью

одной молекулы фермента катализировать превращение большого числа молекул субстрата;
стабильность при хранении всех ингредиентов, необходимых для проведения ИФА (до года и более);
простотой проведения реакции;
наличие как инструментального (в качественном и количественном варианте), так и визуального учета;
возможность автоматизации всех этапов реакции
относительно низкой стоимостью диагностических наборов.

иммунологический планшет – пластина из прозрачного пластика с многочисленными лунками

фиксируют антигены гепатита. Обычно это делает сам производитель планшетов.
Затем в лунки добавляют фракцию крови, содержащую иммуноглобулины – среди которых могут оказаться и антитела к гепатиту. Спустя определенное время лунки промывают.

Если в крови присутствуют антитела к гепатиту, они прочно присоединятся к поверхности лунок. Теперь осталось лишь определить количество связавшихся с антигеном антител.

Для этого проводят еще одну иммунную реакцию – с другими антителами, для которых антитела человека к гепатиту уже являются антигеном. Обычно это антитела кролика, которые вырабатываются в ответ на введение иммуноглобулина человека, больного гепатитом.

соответствующую среду с выделением возбудителя в бактериальной культуре или культуре

тканей • прямая иммунофлюоресценция - ПИФ с помощью моноклональных антител • иммуноферментный анализ (ИФА) для выявления возбудителя • полимеразная цепная реакция - ПЦР с обнаружением ДНК или РНК возбудителя.

(антител) различных классов к возбудителю в серологических реакциях: • Различные варианты

реакции агглютинации (РГА и т.п.) • Реакция связывания комплемента (РСК) • Иммуноферментный анализ - ИФА с определением IgM, IgA, IgG.
Несмотря на то, что лабораторная диагностика в своем арсенале имеет множество методов выявления инфекционных заболеваний, ни один тест не является универсальным !!!

"золотой стандарт" лабораторной диагностики. Это метод длительный (до 7 дней)

и весьма трудоёмкий.
Цитологическое исследование окрашенных мазков отличается низкой чувствительностью и субъективностью оценки результатов (например, диагностировать хламидиоз этим методом удаётся лишь в 10-15% случаев).
Иммуноцитологическое исследование - выявление антигенов возбудителя в мазках с помощью специфических антител (реакция прямой иммунофлюоресценции РИФ). Метод значительно более точный, однако возможно получение так называемых ложно-положительных или ложно-отрицательных результатов.

ДНК/РНК в геноме возбудителя (полимеразная цепная реакция - ПЦР и

лигазная цепная реакция - ЛЦР). Метод обладает высочайшей чувствительностью, приравниваясь к "золотому стандарту".
Серологическое исследование - определение антигенов возбудителя ИФА. Преимущество этого метода - возможность идентифицировать не только микроорганизмы, но и их растворённые антигены (в крови, моче, отделяемом урогенитального тракта). ИФА - точный, автоматизированный метод. Время проведения анализа - 4-6 часов.