Возбудители зоонозых инфекций. Бруцеллез, чума, сибирская язва, туляремия

в связи с патогенезом заболеваний. Принципы лечения, профилактики- электронное пособие

для СРСП и СРС

Б.А

эпидемическое заболевание, характеризующееся тяжелой интоксикацией, лихорадкой, поражением лимфатической и сосудистой

систем, тенденцией к септицемии и смертельной коме. Особоопасная карантинная инфекция. Передается от грызунов к человеку при посредстве эктапаразитов, грызунов.
Чума известна на востоке за 1000 лет до н.э.
1894 г.- в Гонконге во время чумы, ИЕРСЕН и КИТАЗАНТО независимо друг от друга обнаружили возбудителя чумы в гное бубонов у чумных больных и в органах чумных крыс.

приобретали характер пандемий. Первая достоверная пандемия 527-565 гг. («юстинианова чума»),

начавшаяся в Египте и Эфиопии, привела к огромным потерям среди населения Восточной Римской империи.
Самой опустошительной была вторая пандемия чумы в XIV-XV веках, вошедшая в историю под названием «великой» или «чёрной» смерти и унёсшая около 60 млн жизней. Только в Европе погибло более 25 млн человек.
По свидетельству Н.М. Карамзина, целиком вымерло население городов Глухов и Белозёрск, а в Смоленске уцелело лишь 5 человек.
Третья пандемия чумы началась в Гонконге в 1894 г. и за 20 лет унесла жизни 10 млн человек. В самом её начале были сделаны важные открытия (выделен возбудитель, доказана роль крыс в эпидемиологии чумы), что позволило организовать профилактику на научной основе.
Возбудитель чумы обнаружили Г.Н. Минх (1878) и независимо А. Иерсен и Ш. Китазато (1894). Большой вклад в изучение эпидемиологии чумы внесли исследования Д.С. Самойловича (первые в Европе), В.И. Исаева и Н.Н. Клодницкого, а также И.И. Мечникова, руководившего работой противочумных отрядов в Астраханской губернии (1911). В 40-х годах в Северной Африке была отмечена последняя эпидемическая вспышка; тем не менее с 1958 по 1979 г. в мире зарегистрировано 47 000 случаев чумы.
Последнюю вспышку чумы отметили в Индии (вторая половина 90-х годов).  

цитоплазма)

-ГРАМ (-)

-ЖГУТИКОВ НЕТ, СПОР НЕ ОБРАЗУЕТ

-НА СРЕДАХ С КРОВЬЮ И

В ОРГАНИЗМЕ БОЛЬНОГО – КАПСУЛА.
 

Хоттин­гера в течение 48 ч при тем­пературе 26-28 ос.
а

- штамм 1300; б - штамм КМ 872; в - штамм ЕV. Ок­раска по Граму
(а, б), крис­таллическим фиолетовым (в) х 1150.
Микробы располагаются без определенной закономерности и имеют форму овоидов, прямых или слегка искривленных пало­чек с закругленными полюсами. Возможно нитеобразование.
Ок­раска большинства клеток равно­мерная.

от чумы. Штаммы 1300 (а), К 872 (б). Окраска фуксином

Циля. x1l50.
Микробы имеют цилиндрическую либо овоидную и бочкообразную формы. Многие клетки окрашены бипо­лярно.

пораженной мор­ской свинки в предагональ­ном состоянии.
Аноптральный контраст. Иммобилизация кле­ток

желатиновым гелем. х1350. Форма микробов цилиндрическая, полюса сферические. Протоплазма обладает равномерной оптической плотностью. Полиморфизм микро­бов не выражен. Большинство со­ставляют живые клетки. Деление микробов изоморфное. Макрофаги отличаются наличием ядра и зна­чительно большими размерами.

бульо­ном Хоттингера в течение 24 ч при шуттелировании. Штамм 1300.

Аноптраль­ный контраст. Иммобили­зация клеток желатиновым гелем. x1350.
а - выращивание при тем­пературе 37-39 ос,
б - 26-280с.
Чумные микробы имеют ци­линдрическую форму и сфери­ческие полюса, их оболочка на всем протяжении одинаковой толщины и светопреломляю­щей способности. Протоплаз­ма характеризуется равномер­ной светооптической плотно­стью и не содержит включений, которые могли быть матери­альной основой биполярности, выявляемой в окрашенных маз­ках. Микробы, выращенные при температуре 37-39 ос, отлича­ются большими длиной и диа­метром.

температуре 37-39 ос в пе­рева ре Хоттингера с добав­лением витаминов

и ионов кальция. Влажный тушевой метод. Фазовый контраст. х 1350.
а - штамм 1300; б штамм КМ 872.
Капсула наблюдается в виде светлых ореолов вокруг тем­ных клеток. Размеры капсулы у отдельных микробов могут существенно варьировать.

электронной микроскопии. Штамм 1300. Конт­растирование фосфорно-вольфра­мовой кислотой (б, в), напылени­ем

хрома (а). х 15 000 (а), х20 000 (б, в).
Независимо от способа приготовления препаратов и температуры выращива­ния у чумных микробов выявляются цилиндрическая форма, закругленные полюса и отсутствие в цитоплазме ка­ких-либо включений, которые могли бы быть основой для биполярной ок­раски. При оттенении хромом у кле­ток, выращенных при температуре 37- 39 ос, снаружи от клеточной стенки имеются остатки капсулы (а). Вслед­ствие высокого сродства биополиме­ров капсулы к фосфорно-вольфрамо­вой кислоте такие клетки отличаются высокой электрон но-оптической плот­ностью (б). Поверхность бескапсуль­ных микробов покрыта складками (в).

температуре 37-39 ос в течение 18 ч.
а-в - штамм

1300; г - штамм ЕУ. х40 000 (а-в); х80 000 (г).
Капсула имеет фибриллярное строение и окружает клетки в виде бахромы или короны без чет­кой границы. Вещество капсулы с клеточной стенкой связано непрочно. У одних клеток капсу­ла массивная (а-в), у друтих она менее выражена (г).

Штамм 1300. Контрастирование рутениевым красным х 80 000 (а); х40 000
(б-г).

Электронно - плотные продукты реакции окружают клетку в виде бахромы и не образуют сплошного слоя, что указывает на очаговую локализацию кислых мукополисахаридов в структуре капсулы. Внешняя мемб­рана имеет асимметричное строение (а-в). Нуклеоид массивный (в) или диффузный (б, г).

Штамм ЕV. х40000 (а, б); х80000 (б); х100 000 (г).

Частицы комплекса ферритин - иммуноглобулин располагаются на клеточной стенке и фиб­риллах капсулы (а-г). Фрагмент клеточной стенки с равномерным расположением ферро­глобулинов (г).

течение 24 ч при температуре 26-28 ос. Штамм 1300. х40

000 (а, г); х80 000 (б, Д); х60 000 (в).
Внешняя и цитоплазмагическая мембраны имеют трехслойное строение (а-в). Периплазма может быть электронно-прозрачной (д), заполняться материалом средней плотности к электронам (а) и со­держать пептидогликановый слой (б). В цитоплазме находятся рибосомы и полисомы (а-в), вакуо­ли (г) и нуклеоид в различной степени обособленности (а, г). На поверхности клеток могут быть ве­зикулы (а, б, д).

рис. 1.10. Штамм 1300. хзо 000 (а, б); х80 000

(в).
Закладка перетяжки (а), углубление перетяжки с образованием равновеликих клеток (б), формирование полюсов клеток в зоне перетяжки (в). Внутриклеточные включения отличаются высокой плотностью по отношению к электронам (б).

при температуре 26-28 ос в жидких питательных средах из солянокислотного

гидролизата казеи­на, не оптимизированных по минераль­ному составу. Штамм 1300. Аноптраль­ный контраст. Иммобилизация клеток желатиновым гелем. х 1350.
Нарушения качественного состава сред при­водят к усилению гетерогенности микробов по размерам и увеличению содержания мерт­вых (светлых в препарате) клеток. Одни ните­видные микробы жизнеспособны (а, б), дру­гие - нет (в).

см. рис. 1.12. Штамм 1300. х60 000 (а, б, г,

д, е); х80 000 (в).
Почки образуются в результате боковых выпячиваний тела кле­ток (а, б), неравномерного деле­ния (в, г), через дефекты в кле­точной стенке (д, е). От внешней среды они ограничены цитоплаз­матической мембраной (г, д, е) или клеточной стенкой и могут иметь элементы нуклеоида (а-в).

при 200-кратном увеличении. Изображение с сайта wikimedia.org
На окрашенных электронных микрофотографиях

различного масштаба представлены отдельные микробы и их колонии.

с сайта webs.wichita.edu

С ДОБАВЛЕНИЕМ КРОВИ
- ТЕМПЕРАТУРА выращивания - 28-30оС
- рН - 7,2-7,4
-

молодые вирулентные колонии (R-КОЛОНИИ С ПЛОТНЫМ ЦЕНТРОМ, ВОКРУГ КРУЖЕВНАЯ КАЙМА)
-старые колонии, невирулентные (S-форма)
- в бульоне (ПЛЕНКА И СПУСКАЮЩИЕСЯ НИТИ В ВИДЕ СТАЛАКТИТОВ И ХЛОПЬЕВИДНЫЙ ОСАДОК).

нетребовательны к питательным средам. На бульоне через 48 ч образуют

нежную плёнку на поверхности со спускающимися вниз нитями и хлопьевидный осадок (среда остаётся прозрачной). Также хорошо растут в желатине, не вызывая её разжижения.
На плотных средах возбудитель чумы при 37 С образуют сероватые слизистые (за счёт капсулообразования) S- или R-колонии. Вирулентные штаммы чумы образуют R-колонии.
Стадии роста чумы. Микроскопическое изучение колоний Y. pestis выявляет три стадии роста. Через 10-12 ч культивирования вырастают «молодые» бесцветные микроколонии с неровными краями («битое стекло»). Через 18-24 ч они сливаются, формируя нежные плоские образования с фестончатыми краями и приподнятым центром («кружевные платочки»). Через 40-48 ч наблюдают «зрелые» колонии — крупные, с бурым зернистым центром и неровными краями («ромашки»).
Пигментообразование чумы. Многие, особенно вирулентные штаммы Y. pestis способны образовывать тёмный пигмент и обесцвечивать красители (например, метиленовый синий).

26-28 ос.

Штамм 300. Микрофотосъемка в падающем свете. х56.
а

- 10-12 ч выращивания, образуются плоские нежные микроколонии с неровными краями, на­поминающие кружевные платочки; б - 20-24 ч выращивания,
у микроколоний формируется выпуклый желтый, бурый или темно-коричневый центр и тонкая, почти прозрачная фестончатая периферическая зона.
 

проходящем свете. Условия выращивания - см. рис. 1.14. Штамм 1300.

х13. Центр колоний выпуклый или запавший, коричневый или желтый (а). Периферическая зона полу­прозрачная и кружевная. Колонии по внешнему виду напоминают цветок ромашки (а, б).

падающем свете. Условия выращивания - см. рис. 1.14.
а -

штамм 1300; б - штамм ЕУ. х13.
Колонии серо-желтые, по форме близки к полусфере с мелкозернистой поверхностью и ровными или слегка фестончатыми краями.

падающем свете. Ус­ловия выращивания - см. рис. 1.14. Штамм 1300.

ЮЗ.
При увеличении продолжитель­ности культивирования центр колоний западает, перифери­ческая зона становится плот­ной (а) либо узкой или исчеза­ет (б).
Поверхность может при­обретать исчерченность (в).
 

агаре Хот­тингера с добавлением генцианвиолета.
Штамм КМ 872. Микрофотосъемка в

падающем свете. хз (6).
Колонии темно-сиреневые с белым ободком, не имеют «кружевной каемки» (а, б).

течение 120 ч при температуре 26-28 ос на среде Джек­сона-

Барроуза.
а - штамм 1300; б - смесь штаммов 1300 и ЕУ.
Микрофотосъемка в падающем (а) и проходящем (б) свете. х13 (б).
Бактерии вирулентных штаммов возбудителя чумы обладают способностью сорбировать гемин из питательной среды и образуют черно-бурые колонии (а).
При увеличении в про­ходящем свете они черно-коричневые, а у вакцинного штамма ЕУ - светлые (б).

фибринолизин, коагулазу
-не свертывают молоко
3 типа:
1ТИП - НЕ ФЕРМЕНТИРУЮЩИЙ ГЛИЦЕРИН (Индия,

Индокитай, Южная Корея )

2ТИП - ФЕРМЕНТИРУЕТ ГЛИЦЕРИН (Африка, Сибирь Монголия)

3ТИП - ФЕРМЕНТИРУЕТ ГЛИЦЕРИН И НИТРОЗОООТРИЦПТЕЛЬНЫЕ (Юго-восток СНГ).

АНТИГЕНЫ возбудителя чумы:
Около 20 Аг
О-соматический Аг-термостабильный

Хорошо изучены капсульные Аг, особенно Д,F-1,T,W,V-термолабильные

F-1 –поверхностный, белковый Аг –используется для серологической диагностики (РНГА)

W- обладает антифагацитарной активностью

ТРУПАХ-50 СУТ
В МОКРОТЕ-10 СУТ
ФРУКТАХ-11 СУТ
ХЛЕБЕ - 4 СУТ
-ЧУВСТВИТЕЛЕН К ВЫСЫХАНИЮ

И ВЫСОКОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ,УФО, А/Б
КИПЯЧЕНИЕ- 1 МИН
5% РАСТВОР ФЕНОЛА-10 МИН
5% ЛИЗОЛ-10 МИН.

крысы заражают домашних крыс и мышей); С потеплением климата популяция

крыс стремительно растет, а это грозит эпидемией чумы. Особо опасная карантинная инфекция, способная к эпидемическому распространению

ИСТОЧНИК ИНФЕКЦИИ:

В начале вспышки чумы - грызуны,
затем люди, болеющие преимущественно легочной формой

сайта en.wikipedia.ru

зайцеобразные

Большой тушканчик

ли не самым старым заразных недугом. Возбудитель чумы переносят блохи,

которые побывали на больных крысах

Азиатская крысиная блоха Xenopsylla cheopis передает чумную палочку от крыс к людям

ВШИ) – может протекать в хр. Форме. Имеется 99 видов

блох, которые переносят чуму. Они могут быть носителями чумы в течении 1 года.
-ЧУМА БУБОННАЯ У ЧЕЛОВЕКА
-ЧУМА ЛЕГОЧНАЯ У ЧЕЛОВЕКА

ПУТИ ЗАРАЖЕНИЯ ЧЕЛОВЕКА:

-КОНТАКТНЫЙ
-ТРАНСМИССИВНЫЙ (УКУС БЛОХ)

-реже АЛИМЕНТАРНЫЙ

-МЕХАНИЗМ ЗАРАЖЕНИЯ ЧУМОЙ ЧЕЛОВЕКА ОТ ЧЕЛОВЕКА - аэрогенный

АГРЕССИИ (гиалуронидаза, фибринолизин, коагулаза)

- БАКТЕРИОЦИНЫ (пестицины)

- W,V антигены с антифагоцитарной

активностью
 

КОЖУ И СЛИСИЗТЫЕ КОНТАКТНЫМ ПУТЕМ (бубонная форма) , ВОЗДУШНО КАПЕЛЬНО

(легочная форма), если укус в кровеносный капилляр, то развивается первичная септицемия.
Бубонная форма может перейти во вторичную легочную или во вторичную септическую формы.
Инкубационный период от нескольких часов до 2-6 дней, у привитых – до 10 дней.
Проникшие бактерии активно поглощаются фагоцитами, однако фагоцитоз носит незавершенный характер ( в л/у развивается серозно - геморрагическое воспаление , с развитием бубона) и способствует дальнейшему распространению возбудителя. Одновременно чумная палочка распространяется лимфогенно, вызывая множественный лимфаденит. Затем возбудитель проникает в кровоток и диссеминирует в различные органы и ткани (септико-пиемические очаги).

проникновения до лимфатических барьеров
Распространение бактерий из л/у в кровоток

(бактериемия)
Распространение микробов до забарьерных клеточных систем (генерализованная септицемия)
Заболевание начинается остро: Температура повышается до 39С и выше, озноб, явления интоксикации (резкая головная боль, разбитость, мышечные боли, помрачения сознания), больной возбужден.
Летальность при диссеминированных формах до 100%, при локализованных до 70%, при а/б терапии до 10%.

ПРОЦЕССА

среднем 3-6 сут.
При септической и первично-легочной чуме инкубация обычно

сокращается до 1-2 сут и может удлиняться у людей, ранее вакцинированных.

- и вторичносептическая
Внешне - диссеминированные формы:
-первично - и вторично -

легочная; вторично-кишечная
Характерный клинический признак чумы, появляющийся в месте входных ворот инфекции бубон ( л/у , увеличенный до размера лесного ореха, куриного яйца).
Для всех форм чумы характерны внезапность заболевания, озноб и быстрый подъем температуры до 39-40С, которая без лечения стойко держится на высоких уровнях

лица Земли почти треть Европы - поразила 59-летнего американца. Пол

Гейлрод подхватил заразу, когда пытался вытащить мышь из пасти своего задыхающегося кота по кличке Чарли. Как видно из фотографии, чума уничтожила пальцы мужчины на руках и ногах.

показаниям (живая вакцина штаммом EV- иммунитет 1 год; химическая чумная

вакцина)
- Экстренная специфическая профилактика и терапия чумы (противочумный иммуноглобулин)
-Химиотерапия чумы (стрептомицин и др)
-В природных очагах (дератизация , дезинсекция)

плазмид pPst, pCas, pFa чумного микроба)

-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ

-БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ (ориентировочный) . Необходимо дифференцировать

от возбудителя псевдотуберкулеза (сходны по морфологии).

-БИОПРОБА ( на белых мышах, морских свинках, кроликах)

кожной форме;
содержимое бубона при бубонной форме;
мокрота, слизь из

зева и мазок с миндалин при легочной форме;
испражнения при кишечной форме;
кровь - при всех формах;
в зависимости от поражений отдельных органов и систем исследуют мочу (при наличии в ней крови) и цереброспинальную жидкость (при менингеальных явлениях);
при вскрытии (аутопсии) берут кусочек бубона и материал кожных поражений, лимфатические узлы, кусочки органов трупа, кровь из по­лости сердца, костный мозг (при наличии загнивания);
при исследовании КРОВОСОСУШИХ членистоногих (блохи и др.) - содержимое их кишечника;
лимфатические узлы, органы и кровь синантропных (крысы, мыши) и других погибших (и болеющих) грызунов.

мокрота, испражнения, кровь и др.) готовят мазки, высушивают их на

воздухе, фиксируют в смеси Никифорова 20-30 мин. Мазок окрашивают по Граму и метиленовым синим.
Для обнаружения в нативном материале фракции 1 чумного микроба ста­вят РПГА с иммуноглобулиновым и реакцию нейтрализации антител (РНАт) с антигенным диагностикумами или окрашивают чумной люминесцирую­щей сывороткой (МФА),
а в более поздние сроки ставят РПГ А с антигенным и реакцию нейтрализации антигена (PНAт) с иммуноглобулиновым диагно­стикумами для поиска антител к FI чумного микроба в крови больного.
 

жидкие питательные среды: агар и бульон Хотгингера или Мартена с

до­бавлением к ним стимуляторов роста: кровь , сульфит натрия и др.
Стимуляция необходима, так как посевная доза может быть недостаточной.
Материал (мокрота, слизь зева, содержимое вскрывшегося бубона, язвы, органы трупа человека без признаков разложения), содержащий постороннюю микрофлору, засевают на среду Туманского , содержащую генциановый фиолетовый в концентрации 1:200- 1:800 тысяч в зависимости от результатов специального контроля его инги­бирующего действия на соответствующие тест-штаммы. Посевы инкубируют в термостате при температуре 28 ос, а для обнаружения фракции 1 чум­ного микроба - при 37 Ос.
В 1-й день исследования может быть поставлена проба с фагом - ускоренный метод.
Исследуемый материал наносят на 3 чашки со средой Туманского:
в одну чашку вносят одну каплю исследуемого материала и одну каплю чумного фага, растирают их шпателем;
в другую чашку засевают материал, а затем у края чашки наносят каплю фага и дают ей стечь в виде «дорожки»;
В третью чашку (контрольная) вносят только материал и делают его рассев.

материала зависит от его характера.
Мокроту, слизь из зева, гной

из открытого абсцесса вводят путем втирания в кожу брюшной стенки (предварительно кожу эпилируют, обрабатывают стерильным изотоническим раствором натрия хлорида и скарифицируют).
На скарифицированный участок наносят исследуемый материал, втирая его плоской частью скальпеля, под прикрытие м специальной воронки или стерильной крышки от чашки Петри. Незагрязненный материал (кровь, содержимое закрытого бубона и т. д.) вводят животным подкожно или внутрибрюшинно.
В зависимости от метода введения животное погибает на 3-9-й день. Для ускоренной диагностики поэтапно вскрывают животных
на l-e сутки (одну белую мышь, обработанную гидрокортизоном),
3-и сутки (морскую свинку, обработанную гидрокортизоном),
а остальных - на 6-е сутки.

и жидкой питательной среде. Из бульонной культуры при типичном росте

делают мазки, окрашивают их по Граму и метиленовым синим и микроскопируют. С плотной питательной среды отбирают типичные колонии с целью выделения чистой культуры и ее идентификации.
На две-три подозрительные в отношении возбудителя чумы колонии наносят чумной бактериофаг. После инкубации в термостате через 10-12 ч про водят анализ результатов пробы с чумным бактериофагом. Лизис колоний под действием чумного бактериофага имеет диагностическое значение.
Анализируют результат ускоренной пробы с чумным бактериофагом.
При наличии в исследуемом материале возбудителя чумы отмечают:
на 1-й чашке - стерильные пятна,
на 2-й - стерильную «дорожку» на месте нанесения фага,
на 3-й - типичные колонии чумного микроба

на основании следующих признаков:
-характерной морфологии микроба (микропрепараты из нативного

материа­ла и чистых культур), колоний на агаре и роста в бульоне Хотrингера;
-чувствительности к чумному бактериофагу;
-специфического свечения при люминесцентной микроскопии (МФА) чистой культуры;
-наличия специфического для чумного микроба АГ фракции FI, выяв­ленной в РПГ А и РНАт;
-ферментативной активности - расщепление глицерина, мочевины, рамнозы, сахарозы, глюкозы и др.
-Одновременно с идентификацией проводят определение чувствительности к антибиотикам методом серийных разведений или методом дисков.

по следующим тестам:
- на чувствительность к чумному бактериофагу и

антибиотикам;
- на наличие фракции 1, выявленной методом МФА, в РПГА или РНАт;
на определение ферментативной активности
Учитывают пробу с чумным бактериофагом - лизис колоний чумного
микроба.
-Проводят дифференциацию чумных бактерий от бактерий псевдотуберкулеза
-Продолжают наблюдение за биопробными животными, зараженными в l-й день исследования.

неподвижность (палочки псевдотуберкулеза подвижны)

3) чувствительность к чумному фагу

4) отсутствие ферментации

рамнозы
 

кой (МФА), посев на специальные элективные среды. Дальнейшее иссле­дование проводят описанным выше способом.

не только хромосомными, но и плазмидными генами.
У них обнаружены

плазмиды, очень сходные с плазмидами У. pestis, которые кодируют синтез антигенов V—W и наружных белков (Yop), таких же, как у У. pestis, и других факторов вирулентности.
Они имеют общий с У. pestis кластер генов, связанных с системой транспорта железа.
Установлено, что У. pseudotuberculosis синтезирует термостабильный токсин, вызывающий гибель морских свинок при внутрибрюшинном заражении. Важную роль в патогенезе псевдотуберкулеза играет способность возбудителя к адгезии и колонизации слизистой кишечника.