Разделы презентаций


Western Blotting

Содержание

Иммунологические методы анализа

Слайды и текст этой презентации

Слайд 1Western Blotting
ФГБОУ ВО СПХФУ Елизавета Сарсенова биолог НОЦ Молекулярных к клеточных технологий

Western BlottingФГБОУ ВО СПХФУ  Елизавета Сарсенова  биолог НОЦ Молекулярных к клеточных технологий

Слайд 2Иммунологические методы анализа

Иммунологические методы анализа

Слайд 3
Вестерн блот - аналитический метод, используемый для определения в образце

специфичных белков, основанный на технике «блоттинга»


Блоттинг - перенос НК, белков и

липидов на твердую подложку, например, мембрану и их иммобилизация

Что такое блоттинг?

Вестерн блот - аналитический метод, используемый для определения в образце специфичных белков, основанный на технике «блоттинга»Блоттинг - перенос

Слайд 5Применение
Оценка изменений концентрации целевого белка
Распознавание модификаций целевого белка
Выявление взаимодействия целевого

белка с другими белками

ПрименениеОценка изменений концентрации целевого белкаРаспознавание модификаций целевого белкаВыявление взаимодействия целевого белка с другими белками

Слайд 6Этап №1 Пробоподготовка

Этап №1 Пробоподготовка

Слайд 7Выделение белков
Из органов и тканей
Из клеточной культуры
Из физиологических жидкостей
Из культуральной

жидкости
Готовые белковые растворы
Оценка качества препаратов

Выделение белковИз органов и тканейИз клеточной культурыИз физиологических жидкостейИз культуральной жидкостиГотовые белковые растворыОценка качества препаратов

Слайд 8Выделение белков из клеток
Химические методы
Химический лизис (детергенты)

Физические методы
Соникация
Гомогенизирование

Выделение белков из клетокХимические методыХимический лизис (детергенты)Физические методыСоникацияГомогенизирование

Слайд 9Центрифугирование

Центрифугирование

Слайд 11Общая схема анализа

Общая схема анализа

Слайд 12Этап №2 Электрофорез

Этап №2 Электрофорез

Слайд 13Электрофорез
Разделение белков в клеточном лизате по размеру
Полиакриламидный гель – разделяющий

гель, по которому белки способны двигаться под действием электрического тока

с различной скоростью (в зависимости от их величины, заряда и некоторых других факторов);
SDS (натрия додецилсульфат) – детергент, обеспечивающий денатурацию белков и придающий всем полипептидам отрицательный заряд


ЭлектрофорезРазделение белков в клеточном лизате по размеруПолиакриламидный гель – разделяющий гель, по которому белки способны двигаться под

Слайд 14Чем меньше белок, тем быстрее они проходит через полиакриламидный гель

Чем меньше белок, тем быстрее они проходит через полиакриламидный гель

Слайд 15Гель-электрофорез

Гель-электрофорез

Слайд 17Этап №3 Перенос

Этап №3 Перенос

Слайд 18Перенос
Под действием электрического тока белки мигрируют из геля на мембрану
Мембраны

с высокой способностью связывания белков (обычно это нитроцеллюлоза или PVDF)

ПереносПод действием электрического тока белки мигрируют из геля на мембрануМембраны с высокой способностью связывания белков (обычно это

Слайд 19перенос

перенос

Слайд 22Этап №4 Блокирование

Этап №4 Блокирование

Слайд 23Блокирование
Процесс, используемый для исключения неспецифического связывания мембраной антител, используемых для

детекции белка
Обычно с этой целью мембрану помещают в разбавленный раствор

БСА (бычий сывороточный альбумин)
БлокированиеПроцесс, используемый для исключения неспецифического связывания мембраной антител, используемых для детекции белкаОбычно с этой целью мембрану помещают

Слайд 24Общая схема анализа

Общая схема анализа

Слайд 25Этап №5 Обработка антителами

Этап №5 Обработка антителами

Слайд 26Антитела
Моноклональные – к одному конкретному антигену патогена
Поликлональные

– ко всем антигенам патогена

Антитела Моноклональные – к одному конкретному антигену патогена Поликлональные – ко всем антигенам патогена

Слайд 27Инкубация с первичными антителами
Инкубация мембраны с раствором

первичных антител к искомому белку
Промывка

Инкубация с первичными антителамиИнкубация мембраны с раствором    первичных антител к искомому белкуПромывка

Слайд 28Инкубация со вторичными антителами
Инкубация мембраны с раствором

вторичных антител
Промывка

Инкубация со вторичными антителамиИнкубация мембраны с раствором    вторичных антител Промывка

Слайд 29Зачем использовать вторичные антитела?
Усиление сигнала

Зачем использовать вторичные антитела?Усиление сигнала

Слайд 30Детекция
Хемилюминисцентная детекция
Флуоресцентная детекция
Колориметрическая детекция

Детекция Хемилюминисцентная детекция Флуоресцентная детекция Колориметрическая детекция

Слайд 31Контроль загрузки
Ponceau S
Housekeeping gene proteins
Белки генов «домашнего хозяйства»

Контроль загрузкиPonceau SHousekeeping gene proteinsБелки генов «домашнего хозяйства»

Слайд 32https://www.youtube.com/watch?v=CEEekahiqMo

https://www.youtube.com/watch?v=CEEekahiqMo

Слайд 33Спасибо за внимание! До встречи!

Спасибо за внимание! До встречи!

Обратная связь

Если не удалось найти и скачать доклад-презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое TheSlide.ru?

Это сайт презентации, докладов, проектов в PowerPoint. Здесь удобно  хранить и делиться своими презентациями с другими пользователями.


Для правообладателей

Яндекс.Метрика