Занятие №3

вирусов: их положении в системе живых организмов, особенностях организации, строении

вириона; изучить принципы современной классификации вирусов; этапы взаимодействия вирусов с чувствительными клетками; методы культивирования вирусов, признаки размножения вирусов в клетке. Познакомиться с методами лабораторной диагностики вирусных инфекций.

ш и е микробы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы,

содержащие только ДНК или РНК. Относятся к царству Vira.
Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы размножаются в цитоплазме или ядре клетки.
Они - автономные генетические структуры. Отличаются особым - разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке отдельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем происходит их сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется вирионом.

вид)
Род Mimoreovirus — Мимореовирусы(1 вид)
Род Orbivirus — Орбивирусы(22 вида)
Род Phytoreovirus (3 вида)
Род Rotavirus — Ротавирусы (9 видов)
Род Seadornavirus (3 вида)

Вирусы, содержащие одноцепочечную (+)РНК
семейства Astroviridae, Caliciviridae, Coronaviridae, Flaviviridae, Picornaviridae, Arteriviridae и Togaviridae.
Вирусы, содержащие

одноцепочечную (−)РНК

 Bunyavirales, Arenaviridae, Orthomyxoviridae, Paramyxoviridae, Filoviridae, Rhabdoviridae и Deltavirus.

вирусы, содержащие одноцепочечную (+)РНК, реплицирующиеся через стадию ДНК

Ретровирусы,
ВИЧ

ДНК, реплицирующиеся через стадию одноцепочечной РНК
Hepadnaviridae

проникновение вируса в клетку;
3) “раздевание” и высвобождение вирусного генома

(депротеинизация вируса);
4) синтез вирусных компонентов;
5) формирование вирусов;
6) выход вирионов из клетки.

развивающихся куриных эмбрионах и культурах клеток (тканей).

внутриклеточных включений, образования “бляшек”,
реакции гемагглютинации, гемадсорбции или “цветной” реакции

инфекция)
Микроскопия препаратов с чистой культурой ткани и с культурой ткани

с цитопатическим действием вируса полиомиелита (вакцинный штамм).

ЦПД

Нормальные клетки

(РГА)
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
Метод иммунофлюорисценци (РИФ)
Биологические модели для индикации

и идентификации вирусов (мыши, крысы, кролики, морские свинки)

среды сложного состава, включающие большой набор различных факторов роста- среда

199, Игла, раствор Хэнкса, гидролизат лактальбумина.
В среды добавляют стабилизаторы рН (Hepes), различные в видовом отношении сыворотки крови (наиболее эффективной считают эмбриональную телячью сыворотку), L-цистеин и L-глютамин.
В зависимости от функционального использования среды могут быть ростовые (с большим содержанием сыворотки крови) — их используют для выращивания клеточных культур до внесения вирусных проб,
и поддерживающие (с меньшим содержанием сыворотки или ее отсутствием)- для содержания инфицированных вирусом клеточных культур.

вирусов методом флюоресцирующих антител (МФА), электронной микроскопией, авторадиографией.
4.Цветная проба. Обычный

цвет  используемых культуральных сред, содержащих в качестве индикатора рН феноловый красный, при оптимальных для клеток условиях культивирования (рН около 7,2)- красный. Размножение клеток меняет рН и соответственно- цвет среды с красного на желтый за счет смещения рН в кислую сторону. При размножении в клеточных культурах вирусов происходит лизис клеток, изменения рН и цвета среды не происходит.
5.Выявление гемагглютинина вирусов- гемадсорбция, гемагглютинация.
6.Метод бляшек (бляшкообразования). В результате цитолитического действия многих вирусов на клеточные культуры образуются зоны массовой гибели клеток. Выявляют бляшки- вирусные “ клеточно- негативные” колонии.

их отторжения от стекла), возникающие в результате внутриклеточной репродукции вирусов

Культура клеток

ЦПД вируса

или ядре клеток, выявляемые под микроскопом при специальном окрашивании. Вирус

натуральной оспы образует цитоплазматические включения - тельца Гварниери; вирусы герпеса и аденовирусы - внутриядерные включения

культивируемых на питательной среде под агаровым покрытием, видимые как светлые

пятна на фоне окрашенных живых клеток. Один вирион образует потомство в виде одной бляшки. “Негативные” колонии разных вирусов отличаются по размеру, форме, поэтому метод бляшек используют для дифференциации вирусов, а также для определения их концентрации.

Образование бляшек

(склеивание) эритроцитов за счет вирусных гликопротеиновых шипов – гемагглютининов.
РГА

своей поверхности эритроциты.