Разделы презентаций


Трансгенез. Животные

Содержание

СловарьЗигота – тотипотентная диплоидная клетка, образующаяся в результате оплодотворения (слияния яйцеклетки и сперматозоида) Бластоциста – зародышевый пузырек, ранняя (преимплантационная) стадия развития зародыша млекопитающих (в том числе человека

Слайды и текст этой презентации

Слайд 1ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ
ТРАНСГЕНЕЗ. ЖИВОТНЫЕ.
Лекция 7

ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ ТРАНСГЕНЕЗ. ЖИВОТНЫЕ. Лекция 7

Слайд 2Словарь
Зигота – тотипотентная диплоидная клетка, образующаяся в результате оплодотворения (слияния яйцеклетки

и сперматозоида)

Бластоциста – зародышевый пузырек, ранняя (преимплантационная) стадия развития

зародыша млекопитающих (в том числе человека
СловарьЗигота – тотипотентная диплоидная клетка, образующаяся в результате оплодотворения (слияния яйцеклетки и сперматозоида) Бластоциста – зародышевый пузырек, ранняя

Слайд 3Что означает термин «трансгенные животные»?

Что означает термин «трансгенные животные»?

Слайд 4humbio.ru
Трофобласт –
наружный клеточный слой бластоцисты млекопитающих, принимает участие в

имплантации и формировании плаценты
Синцитиотрафобласт – выполняет функцию всасывания питательных веществ

из крови матери, вырабатывает ферменты, способствующие внедрению ворсин хориона в ткани матки
humbio.ruТрофобласт – наружный клеточный слой бластоцисты млекопитающих, принимает участие в имплантации и формировании плацентыСинцитиотрафобласт – выполняет функцию

Слайд 51. Оплодотворенная яйцеклетка (зигота)  2. Зигота делится надвое  3-4. Митотическое деление продолжается  5. Через 5-6 дней образуется

бластоциста 6. Внутреннюю часть бластоцисты (ВКМ) помещают на питательную среду для получения стволовых

клеток

http://www.vokrugsveta.ru

1. Оплодотворенная яйцеклетка (зигота)  2. Зигота делится надвое  3-4. Митотическое деление продолжается  5. Через 5-6 дней образуется бластоциста 6. Внутреннюю часть бластоцисты

Слайд 6Этапы получения трансгенных животных (до принятия решения об интродукции)
Создание и амплификация

rДНК (кассета экспрессии+вектор)
Выбор и подготовка клеток-реципиентов для трансформации
Встраивание трансгена в

геном клетки-реципиента
Отбор трансгенных организмов
Отбор трансгенных организмов, образующих трансгенные гаметы
Получение чистых линий
Оценка экспрессии гена
Этапы получения трансгенных животных (до принятия решения об интродукции)Создание и амплификация rДНК (кассета экспрессии+вектор)Выбор и подготовка клеток-реципиентов

Слайд 7В 1982 году Р.Д.Пальмитер с коллегами опубликовали фотографию, на которой

рядом сидели две мыши. Одна из них была трансгенной, в

ее ДНК встроили ген гормона роста крысы, другая была обычной мышкой. 

Металлотионеин - белок, способный связывать двухвалентные металлы. Регулирует концентрацию в клетке микроэлементов (цинк и медь).

В 1982 году Р.Д.Пальмитер с коллегами опубликовали фотографию, на которой рядом сидели две мыши. Одна из них

Слайд 8Схемы получения трансгенных животных
Микроинъекция в зиготу
микроинъекция чужеродной ДНК в оплодотворенную

яйцеклетку (зиготу)
1. Создание и клонирование кассеты экспрессии составе вектора клонируется

в E. Coli
2. Получение одноклеточных зигот
3. Выделяние rДНК, переведение в линеарную форму, инъецирование в пронуклеус зиготы.
4. пересадка эмбрионов самкам-реципиентам
5. отбор трансгенных животных, продуцирующих трансгенные
гаметы

http://www.transgen.ru

Схемы получения трансгенных животныхМикроинъекция в зиготумикроинъекция чужеродной ДНК в оплодотворенную яйцеклетку (зиготу)1. Создание и клонирование кассеты экспрессии

Слайд 91. встроился ли трансген в геном?
2. несут ли трансген гаметы?
3.

экспрессируется ли трансген?
Основные проблемы

1. встроился ли трансген в геном?2. несут ли трансген гаметы?3. экспрессируется ли трансген?Основные проблемы

Слайд 10Схема введения генов и установления гомозиготной линии мышей с помощью

микроинъекций
MDR1- ген множественной лекарственной устойчивости

Схема введения генов и установления гомозиготной линии мышей с помощью микроинъекций MDR1- ген множественной лекарственной устойчивости

Слайд 11Схемы получения трансгенных животных
Реконструкция эмбрионов с использованием
ЭСК (эмбриональных стволовых

клеток)
микроинъекция чужеродной ДНК в ЭСК
1. Получение культуры ЭСК
2. Введение

в ЭСК rДНК с селективных маркером (с помощью ретровирусов, электропорации, липосом)
3. Получение бластоцист для микроинъекции
4. Конструирование химерных эмбрионов
5. Пересадка эмбрионов самкам-реципиентам
6. отбор трансгенных животных, продуцирующих трансгенные
гаметы

http://rudocs.exdat.com

Схемы получения трансгенных животныхРеконструкция эмбрионов с использованием ЭСК (эмбриональных стволовых клеток)микроинъекция чужеродной ДНК в ЭСК1. Получение культуры

Слайд 12http://www.stemcells.ox.ac.uk
Инъекция в бластоцисту
http://www.tankonyvtar.hu/

http://www.stemcells.ox.ac.ukИнъекция в бластоцистуhttp://www.tankonyvtar.hu/

Слайд 13Способы введения днк в культивируемые клетки животных
Рекомбинантные РНК-вирусы
Клетка с

помощью рецепторов опознает вирусную оболочку.
Вирус внедряет в клетку РНК.

В клетке РНК с помощью ревертазы переписывается в ДНК
ДНК проникает в ядро соматической клетки.
ДНК встраивается в ДНК клетки.
Клетка синтезирует копии обновленного генома и мРНК.
Белки транслируются
РНК вируса одеваются вирусной оболочкой
выходят из клетки, заражая новые поколения клеток.

moikompas.ru

Перенос генов с помощью вирусов
(Эффективные векторы созданы на основе ретровирусов, вирусов SV40, аденовирусов, аденоассоциированных вирусов, вируса осповакцины, вируса герпеса и др.)

Способы введения днк в культивируемые клетки животныхРекомбинантные РНК-вирусы Клетка с помощью рецепторов опознает вирусную оболочку. Вирус внедряет

Слайд 14Структура экспрессирующего вектора pKSV-10 для трансгенеза животных

рисунок из книги

Л.И. Патрушева Экспрессия генов, 2004

Структура экспрессирующего вектора pKSV-10 для трансгенеза животных рисунок из книги Л.И. Патрушева Экспрессия генов, 2004

Слайд 15Способы введения днк в культивируемые клетки животных
Перенос генов, опосредованный клеточными

рецепторами
основан на интернализации рецепторов в процессе эндоцитоза

Способы введения днк в культивируемые клетки животныхПеренос генов, опосредованный клеточными рецепторамиоснован на интернализации рецепторов в процессе эндоцитоза

Слайд 16Способы введения днк в культивируемые клетки животных
Электропорация.
Кратковременное (10

мксек-100 мсек) воздействие электрическим полем высокой напряженности (50-1500 V/см), вызывает

локальное нарушение целостности мембран с образованием микропор (диаметр 20-120 нм), через которые заряженные молекулы, в том числе и ДНК, как линейная, так и суперскрученная, проникают внутрь клеток
Способы введения днк в культивируемые клетки животныхЭлектропорация.  Кратковременное (10 мксек-100 мсек) воздействие электрическим полем высокой напряженности

Слайд 17Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.
Создание новых животных,

с улучшенными качественными и количественными характеристиками
(лосось с

трансгеном гормона роста)
Основные стратегии в трансгенезе животных.  Внедрение в практику.Создание новых животных, с улучшенными качественными и количественными характеристиками

Слайд 18Создание новых животноводческих пород, дающих продукты с повышенным содержанием некоторых

компонентов
(например, в Великобритании существует стадо коров, молоко

которых подходит для приготовления сыра чеддер).

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.

Создание новых животноводческих пород, дающих продукты с повышенным содержанием некоторых компонентов  (например, в Великобритании существует стадо

Слайд 19Создание животных, способных продуцировать несвойственные их виду белки
(например,

сообщалось о получении свиней, способных продуцировать интерферон человека).
Основные стратегии

в трансгенезе животных. Внедрение в практику.
Создание животных, способных продуцировать несвойственные их виду белки  (например, сообщалось о получении свиней, способных продуцировать интерферон

Слайд 20Создание трансгенных животных, являющихся донорами при трансплантациях органов.
(например,

из стволовых эмбриональных клеток животных вырастили глаза и уши лягушки).


Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.

Создание трансгенных животных, являющихся донорами при трансплантациях органов.  (например, из стволовых эмбриональных клеток животных вырастили глаза

Слайд 21Получение геномных библиотек – полное собрание генома человека, распределенное по

отдельным «томам» рекомбинантных молекул плазмид или фаговых частиц «в суперобложке»

бактерии E.coli.

Основные стратегии в трансгенезе животных. Внедрение в практику.

Получение геномных библиотек – полное собрание генома человека, распределенное по отдельным «томам» рекомбинантных молекул плазмид или фаговых

Слайд 22Схема получения геномной библиотеки. Метод дробовика

Схема получения геномной библиотеки. Метод дробовика

Слайд 23Схема получения библиотеки кДНК

Схема получения библиотеки кДНК

Слайд 24ДНК-зонды
alko-mir.ru
ДНК-зонд (англ. DNA probe) – фрагмент ДНК, меченный

тем или иным образом и использующийся для гибридизации со специфическим

участком молекулы ДНК. Позволяет идентифицировать комплементарные ему нуклеотидные последовательности.
ДНК-зонды alko-mir.ru ДНК-зонд (англ. DNA probe) – фрагмент ДНК, меченный тем или иным образом и использующийся для

Слайд 25ДНК-зонды.
Зонды с комплементарными концевыми последовательностями (molecular beacons)
Зонды с резонансным

переносом энергии (LightCycler assay)
Концевые последовательности зонда комплементарны и образуют шпильки,

что гасит свечение. Зонды, которые отжигаются на матрицу, разворачиваются, и флуоресцентная метка и гаситель расходятся в разные стороны - увеличивается свечение.

Принцип метода в переносе энергии от одного флуорофора (на 3` конце первого зонда), ко второму флуорофору (на 5` конце второго зонда). При связывании зондов с ДНК матрицей испускаемое первым флуорофором излучение передается на второй флуорофор, а его излучение детектируется прибором.

http://www.interlabservice.ru/

ДНК-зонды. Зонды с комплементарными концевыми последовательностями (molecular beacons)Зонды с резонансным переносом энергии (LightCycler assay)Концевые последовательности зонда комплементарны

Слайд 26Схема получения кДНК.
http://bannikov.narod.ru/

Схема получения кДНК. http://bannikov.narod.ru/

Слайд 27Генная терапия
в генной терапии наследственных болезней применяют векторные системы на

основе:
лентивирусов
аденовирусов
аденоассоциированных вирусов
ортопоксвирусов
герпесвирусов
РНК-вирусов, не относящихся к ретровирусам
http://supotnitskiy.webspecialist.ru/

Генная терапияв генной терапии наследственных болезней применяют векторные системы на основе:лентивирусоваденовирусоваденоассоциированных вирусовортопоксвирусовгерпесвирусовРНК-вирусов, не относящихся к ретровирусамhttp://supotnitskiy.webspecialist.ru/

Слайд 28Сравнение свойств генотерапевтических векторных систем
http://supotnitskiy.webspecialist.ru/

Сравнение свойств генотерапевтических векторных системhttp://supotnitskiy.webspecialist.ru/

Слайд 29Словарь
Таргетинг (target - мишень) – изменение генов за счет

гомологичной рекомбинации последовательностей, находящихся в хромосоме, с искусственно введенными в

клетку последовательностями ДНК

Упаковывающая клетка – линия клеток, созданная для продуцирования (упаковки) вирусных частиц, не содержащих инфекционных нуклеиновых кислот.


Словарь Таргетинг (target - мишень) – изменение генов за счет гомологичной рекомбинации последовательностей, находящихся в хромосоме, с

Слайд 30Схема переноса генов с использованием ретровирусных векторов
1. Клонирование гена в ДНК

ретровирусного вектора в клетках E.coli. 
2. Перенос ДНК ретровирусного вектора в упаковывающие

клетки. 
3.Формирование ретровирусных частиц и их выход в культу ральную среду.
4. Трансдукция гена в составе ретровирусного вектора в клетки-мишени.

http://supotnitskiy.webspecialist.ru/

Схема переноса генов с использованием ретровирусных векторов1. Клонирование гена в ДНК ретровирусного вектора в клетках E.coli. 2. Перенос ДНК ретровирусного

Слайд 31Методы модификации вирусов
физический таргетинг – покрытие вирусной частицы специальной оболочкой,

изменяющей ее природный тропизм и делающей ее неузнаваемой для иммунной

системы человека
генетическая модификация вируса – модификация белков оболочки вектора
транскрипциональный таргетинг – введение в трансген-экспрессирующую кассету специфических для данных тканей промоторных последовательностей.
Методы модификации вирусовфизический таргетинг – покрытие вирусной частицы специальной оболочкой, изменяющей ее природный тропизм и делающей ее

Слайд 32http://www.mun.ca

http://www.mun.ca

Слайд 33Успехи и неудачи генной терапии
17 сентября 2000 г. в Университете

Пенсильвании умер 17 летний Джесси Гелзингер, которого пытались вылечить от

наследственного заболевания печени недостаточность орнитинтранскарбомилазы (OTCD).
Он умер из-за гиперреакции имунной системы на ввод в печень генно-инженерного аденовируса.
Смерть наступила вследствие острого респираторного синдрома и выхода из строя множества органов.

http://humbio.ru

Первая успешная попытка лечения тяжелого обычно несовместимого с жизнью наследственного иммунологического заболевания, вызванного дефектом в гене, кодирующем фермент аденозиндезаминазу, была осуществлена в 1990 г. В. Андерсеном с соавт. 

David Phillip Vetter
21.09.1971, - 22.02.1984

Джесси Гелзингер

Успехи и неудачи генной терапии17 сентября 2000 г. в Университете Пенсильвании умер 17 летний Джесси Гелзингер, которого

Обратная связь

Если не удалось найти и скачать доклад-презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое TheSlide.ru?

Это сайт презентации, докладов, проектов в PowerPoint. Здесь удобно  хранить и делиться своими презентациями с другими пользователями.


Для правообладателей

Яндекс.Метрика