Слайд 1МЕТОДЫ ХРОМАТОГРАФИИ. ИОНООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ.
Подготовила: Кудаш Екатерина
Слайд 2МИХАИЛ СЕМЕНОВИЧ ЦВЕТ (1872 -1919)
Разделение
хлорофилла (1903)
Здесь была открыта хроматография
Аппаратура Цвета
Слайд 3ИСТОРИЯ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
1903 – первый доклад М.С.Цвета о разделении хлорофилла;
1931
– признание приоритета Цвета как создателя хроматографии в целом и
адсорбционно-хроматографического анализа в частности;
1937 - ионообменная хроматография ( Г.Шваб, США);
1938 - тонкослойная хроматография (Н.А.Измайлов, М.С.Шрайбер, СССР);
1941 - жидкостная распределительная хроматография как метод анализа смесей аминокислот (А.Мартин, Р.Синдж, Англия);
1944 - бумажная хроматография (А.Мартин, Р.Синдж, Англия);
1945 - первые публикации по газоадсорбционной хроматографии;
1952 - А.Джеймс и А.Мартин создали газожидкостную хроматографию и предложили первую теорию разделения («теорию тарелок»);
1953 - построен и применен в анализе первый газовый хроматограф.
Слайд 4ИСТОРИЯ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
(ПРОДОЛЖЕНИЕ)
1956 - теория размывания хроматографических пиков ( Я.
Ван Деемтер, А.Клинкенберг, Голландия);
1956 - капиллярная газовая хроматография (М.Голэй, Франция);
1960-е годы - массовый выпуск газовых хроматографов, препаративная хроматография, хромато-масс-спектрометрия;
1966-1971 - первые жидкостные хроматографы высокого давления (Ш.Хорват, США, Г.Киркланд, Англия). Развитие метода ВЭЖХ;
1975 - ионная хроматография (Х.Смолл, Т.Стивенс и В.Бауман, США);
1980–е годы - флюидная (сверхкритическая) хроматография;
1990-е годы – базы данных и системы компьютерной идентификации для хроматографического анализа.
Слайд 5ПРОЦЕСС РАЗДЕЛЕНИЯ
Сорбент
Элюент
Элюат
Слайд 6Хроматографическое разделение основано на различии скоростей перемещения разных компонентов пробы
через слой сорбента.
Скорости движения компонентов в хроматографии теоретически не должны
зависеть ни от концентрации сорбата, ни от состава пробы (природы и концентрации других компонентов).
На практике эти положения иногда не выполняются, особенно при высокой концентрации компонентов
и при вводе в колонку большой массы пробы.
Это ведет к ошибочным результатам анализа.
Слайд 7Хроматография – это метод разделения и анализа смесей, основанный на
многократном перераспределении компонентов смеси между двумя фазами при прохождении подвижной
фазы (ПФ) через неподвижную (НФ).
Хроматография является не только методом анализа, но и лежит в основе многих природных явлений и промышленных технологий, она позволяет вести глубокую очистку веществ (препаративные методы) и исследовать их свойства (например, измерять характеристики поверхности).
Слайд 8ОСНОВНЫЕ ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
* нефтехимия и химическая промышленность;
* контроль
состояния окружающей среды;
* анализ пищевых продуктов и лекарственных
препаратов;
* клинический анализ;
* научные исследования.
Слайд 9ОСНОВНЫЕ ПРЕИМУЩЕСТВА ХРОМАТОГРАФИИ КАК АНАЛИТИЧЕСКОГО МЕТОДА
Высочайшая селективность
Воспроизводимость результатов
Многокомпонентность анализа
Низкие
пределы обнаружения (0.1 мкг/л)
Широкий диапазон линейности (1-1000 мкг/л)
Малый расход пробы
( < 1 мл)
Экспрессность анализа
Простота эксплуатации и возможность полной автоматизации
Слайд 10КЛАССИФИКАЦИЯ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ МЕТОДОВ
Слайд 11ИОНООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Ионообменная хроматография основана на способности компонентов анализируемой смеси вступать
в обменные реакции с подвижными ионами адсорбента. В этом случае
анализируемый раствор пропускают через хроматографическую колонку, заполненную мелкими зернами ионообменного вещества (ионитом) - катионитом или анионитом. Иониты представляют собой нерастворимые неорганические и органические высокомолекулярные соединения, содержащие активные группы. Подвижные ионы этих групп способны при контакте с растворами электролитов обмениваться на катионы или анионы растворенного вещества. В качестве ионитов применяют оксид алюминия (для хроматографии), сульфоуголь и разнообразные синтетические органические, ионообменные смолы.
Слайд 12СХЕМА ИОННОГО ХРОМАТОГРАФА
Предколонка
Разделяющая (аналитическая) колонка
Система подавления фонового сигнала
Детектор
Слайд 13ТИПИЧНАЯ УСТАНОВКА ИОНООБМЕННОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ДЛЯ ОЧИСТКИ БЕЛКОВ. ПОСЛЕ ЗАГРУЗКИ
ОБРАЗЦА НАСОС СОЗДАЕТ СОЛЕВОЙ ГРАДИЕНТ ДЛЯ ЭЛЮЦИИ ОБРАЗЦА.
Слайд 14ИОНИТЫ ДЕЛЯТ НА:
* катиониты, способные к катионному обмену;
* аниониты
способные к анионному обмену;
*ионообменные вещества, обладающие амфотерными свойствами, т.
е. способные и к анионному, и к катионному обмену.
Слайд 15ИОНООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Весьма эффективный метод определения любых ионов.
Лучший метод
определения неорганических анионов.
Чувствительность - 1-10 нг/мл (без дополнительного концентрирования.
Анионообменник
Силасорб-S с нанесенным 6,10-ионеном.
Колонка: 50x3 мм.
Элюент: 0.3 мМ гидрофталат
калия. Расход 1.0 мл/мин.
УФ-детектор (λ=254 нм).
Слайд 16ПРИМЕНЕНИЕ ИОНООБМЕННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Ионообменную хроматографию широко применяют в медицине, биологии, биохимии,
для контроля окружающей среды, при анализе содержания лекарств и их
метаболитов в крови и моче, ядохимикатов в пищевом сырье, а также для разделения неорганических соединений, в том числе радиоизотопов, лантаноидов, актиноидов и др. Анализ биополимеров (белков, нуклеиновых кислот и др.), на который обычно затрачивали часы или дни, с помощью ионообменной хроматографии проводят за 20-40 мин с лучшим разделением. Применение ионообменной хроматографии в биологии позволило наблюдать за образцами непосредственно в биосредах, уменьшая возможность ᴨȇрегруппировки или изомеризации, что может привести к неправильной интерпретации конечного результата. Интересно использование данного метода для контроля изменений, происходящих с биологическими жидкостями.