ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ Полимеразная цепная реакция

Содержание

1. ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ Полимеразная цепная реакция
2. Генетика- наука о законах наследственности и из-
3. ДНК – двухцепочечная молекула ,состоящая из
4. Слайд 4
5. Принцип строения ДНК универсален для всего живого,
6. У бактерий и грибов 3 типа РНК:
7. У вирусов только геномная РНК в двух
8. Особенности генетики бактерий: - Отсутствие оформленного ядра1
9. Схема реализации генетического кода:Ген (ДНК) -транскрипция-РНК -трансляция--белок
10. Уникальные свойства ДНК, а именно
11. Основаны на обнаружении нуклеиновых кислот (ДНК, геномной
12. Основной и наиболее распространенный метод-ПЦР(Полимеразная цепная реакция)Основа
13. Метод ПЦР
14. 1) Пробоподготовка исследуемого материала:центрифугирование (кровь ,моча ,ликвор,фекалии)гомогенизация2) Экстракция нуклеиновых
15. - Термолизис (Экспресс-метод ,ведущий к потере части
16. Компоненты реакции ПЦР:1)Искомая ДНК образца(хромосомная ,плазмидная) ,или
17. 3) Термостабильная ДНК-зависимая ДНК-полимераза (TaqF)Данный фермент выдерживает
18. 7)Ревертаза (Обратная транскриптаза) –только для ПЦР-диагностики вирусных
19. Варианты ПЦР-смесей:- ПЦР-смеси ,которые неоходимо готовить из
20. ПЦР проводится с использованием тонкостенных или толстостенных
21. Амплификация- многократное увеличение числа копий специфического участка
22. Амплификатор роторного типа
23. Денатурация(«плавление»)ДНК( при 93⁰-95⁰С) 30 с.- 2 мин.
24. 1-й цикл-удлинение участка дочерней цепи,начиная от праймера,
25. Схема ПЦР- амплификации
26. Схема амплификации
27. По способу детекции выделяют
28. Принцип ПЦР в реальном времени
29. Результат ПЦР в реальном времени
30. Достоинства ПЦР-диагностики:Высокая чувствительность методаВозможность диагностики на ранних
31. Высокая стоимость оборудования.Одновременная амплификация ДНК как живого
32. Слайд 32
33. Комиссаров А.Г.СПб ГБУЗ «Городская поликлиника №75» бактериологическая лабораторияОсновные методы диагностики инфекционных заболеваний
34. Методы,основанные на выявлении возбудителей
35. 2. Иммунологические методы поиска антигенов
36. II. Методы ,основанные на выявлении иммунного
37. Комиссаров А.Г.УЧЕНИЕ ОБ ИНФЕКЦИИ
38. Инфекционный процесс – процесс взаимодействия микроорганизма
39. Фекально-оральный механизмПищевой путьВодный путьКонтактно-бытовойАэрозольный механизм- Воздушно-капельный и воздушно-пылевой путиТрансмиссивный механизмКонтактный -Гемоконтактный и половой путиМеханизмы передачи инфекции
40. Патогенность – потенциальная способность данного вида микроорганизмов
41. Вирулентность – мера (степень) патогенности. Количественное
42. Адгезия – прикрепление к поверхности клеток слизистых
43. Факторы вирулентности
44. Факторы вирулентности.Инвазивность.Инвазивность – способность проникать в организм
45. Ядовитость – способность к продукции экзотоксинов,
46. Скачать презентанцию

Генетика- наука о законах наследственности и из- менчивости организмов.Единица наследственности – ген1 ген кодирует структуру 1 белкаГен- функциональный участок нуклеиновой кисло- ты.У всех живых организмов 2 типа нуклеиновых кислот

Главная
Разное
ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ Полимеразная цепная реакция

Слайды и текст этой презентации

Слайд 1Комиссаров А.Г.
Врач-бактериолог
СПб ГБУЗ «Городская поликлиника №75»
Бактериологическая лаборатория
ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ Полимеразная цепная реакция

Комиссаров А.Г.Врач-бактериологСПб ГБУЗ «Городская поликлиника №75» Бактериологическая лабораторияГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ Полимеразная цепная реакция

Слайд 2Генетика- наука о законах наследственности и из-
менчивости организмов.
Единица

наследственности – ген
1 ген кодирует структуру 1 белка
Ген- функциональный участок

нуклеиновой кисло-
ты.
У всех живых организмов 2 типа нуклеиновых кислот : ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) и РНК (рибонуклеиновая кислота).

Генетика микроорганизмов

Генетика- наука о законах наследственности и из- менчивости организмов.Единица наследственности – ген1 ген кодирует структуру 1

Слайд 3ДНК – двухцепочечная молекула ,состоящая из
из нуклеотидов.
ДНК обеспечивает

хранение генетической инфор-
мации , ее воспроизведение в виде

синтеза белка и
передачу потомству.
При делении материнской бактериальной клетки
ДНК удваивается , в результате чего образуются 2
дочерних клетки идентичные материнской.
ДНК обладает уникальным свойством к самовоспроизведению.

ДНК

Слайд 4

ДНК

Слайд 5Принцип строения ДНК универсален для всего живого, но у разных

видов ДНК отличается по длине , по составу и последовательности

оснований нуклеотидов.
Функция: Хранение ,воспроизведение и передача генетической информации.
Вся генетическая информация уникальна и не повторяется.
Реализация генетической информации в течение всей жизни клетки в виде синтеза белков.
Перед синтезом белка двойная спираль ДНК раскручивается и ее нити расходятся ,на одной из нитей ДНК(матричной) происходит синтез информационной РНК (транскрипция)

ДНК

Слайд 6У бактерий и грибов 3 типа РНК:
Информационная РНК -

«информационный посредник» между ДНК нуклеоида и рибосомой.
Транспортная РНК
В процессе

синтеза белка поставляет аминокислоты к рибосомам согласно информации ,записанной на информационной РНК.
Рибосомальная РНК.
Входит в состав рибосом-органоидов,на которых происходит синтез белка из отдельных аминокислот по заданной иРНК матрице.(программе)- трансляция.

РНК (рибонуклеиновая кислота)

У бактерий и грибов 3 типа РНК: Информационная РНК - «информационный посредник» между ДНК нуклеоида и рибосомой.

Слайд 7У вирусов только геномная РНК в двух вариантах геномная +РНК

и геномная - РНК
+РНК является информационной РНК и

напрямую участвует в синтезе белка.
- РНК не является информационной РНК , на ее
матрице синтезируется копия ДНК при помо
щи фермента обратной транскриптазы (ревер-
тазы) .
Для большинства вирусов РНК выполняет функцию хранения генетической информации взамен ДНК.

РНК (рибонуклеиновая кислота)

У вирусов только геномная РНК в двух вариантах геномная +РНК и геномная - РНК +РНК является

Слайд 8Особенности генетики бактерий:
- Отсутствие оформленного ядра
1 кольцевидно замкнутая ДНК

– нуклеоид.
Наличие внехромосомных ДНК – плазмид ,несущих
гены вирулентности

, антибиотикорезистентности.
Вся информация , записанная на ДНК уникальна и
не повторяется , 90% генов находится в активном
состоянии.
У бактерий содержится 2 типа нуклеиновых кислот
ДНК и РНК.

Особенности генетики микроорганизмов.

Особенности генетики бактерий: - Отсутствие оформленного ядра1 кольцевидно замкнутая ДНК – нуклеоид.Наличие внехромосомных ДНК – плазмид ,несущих

Слайд 9Схема реализации генетического кода:

Ген (ДНК) -транскрипция-РНК -трансляция--белок (фермент/структурный белок) ------признак

(пример.наличие жгутика ,токсина ,адгезинов)

Схема реализации генетической

информации.

Схема реализации генетического кода:Ген (ДНК) -транскрипция-РНК -трансляция--белок (фермент/структурный белок) ------признак (пример.наличие жгутика ,токсина ,адгезинов) Схема

Слайд 10
Уникальные свойства ДНК, а именно способность к репликации

, денатурации и восстановлению своей исходной структуры , транскрипции и

трансляции легли в основу разработок молекулярно-генетичес-ких методов диагностики заболеваний человека , в том числе инфекционного генеза.

Практическое применение

Уникальные свойства ДНК, а именно способность к репликации , денатурации и восстановлению своей исходной структуры

Слайд 11Основаны на обнаружении нуклеиновых кислот (ДНК, геномной РНК , рибосомальной

РНК) возбудителя (бактерий , вирусов ,грибов ,простей-ших) в пробе.
Генетические методы:
1) Гибридизационные
2) Амплификационные

методы:
- ПЦР (полимеразная цепная реакция)
- Лигазная реакция
- Методы транскрипционно-опосредован-
ной амплификации (NASBA ПЦР)

Молекулярно-генетические методы диагностики инфекционных

Основаны на обнаружении нуклеиновых кислот (ДНК, геномной РНК , рибосомальной РНК) возбудителя (бактерий , вирусов ,грибов ,простей-ших)

Слайд 12Основной и наиболее распространенный метод-ПЦР(Полимеразная цепная реакция)
Основа реакции- способность ДНК

к самопроизведению.
Позволяет увеличить число копий искомого специфического участка ДНК бактерий

и вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы , нуклеотидов , праймеров , буфера и специального оборудования(амплификатора , тер-
моциклера)

Молекулярно-генетические методы диагностики

Слайд 13

Метод ПЦР

Слайд 14
1) Пробоподготовка исследуемого материала:
центрифугирование (кровь ,моча ,ликвор,фекалии)
гомогенизация
2) Экстракция нуклеиновых кислот (Нуклеовыделение) ДНК

, РНК ,рибосомальной РНК:
Разрушение оболочек эпителиальных клеток ,оболочек бактерий и

вирусов ,удаление белков ,ингибиторов ПЦР (белки , ДНК-аза) с последующим осаждениеми элюцией нуклеиновых кислот в раствор.

Этапы ПЦР-анализа

1) Пробоподготовка исследуемого материала:центрифугирование (кровь ,моча ,ликвор,фекалии)гомогенизация2) Экстракция нуклеиновых кислот (Нуклеовыделение) ДНК , РНК ,рибосомальной РНК:Разрушение оболочек эпителиальных клеток

Слайд 15- Термолизис (Экспресс-метод ,ведущий к потере части ДНК ,не подходит

для выделения РНК)
-Осаждение
-Осаждение с магнитным штативом.
При любом способе нуклеовыделение

проводится в присутствии ВКО-внутреннего контрольного образца (ген глобина человека ,который добавляется в пробирку)
Нуклеовыделение проводится в пробирках с применением хаотропных агентов , осадителей , отмывочных растворов и элюирующих растворов.
Нуклеовыделение от 15 мин до 2 часов ,в зависимости от количества образцов и способа экстракции. Проводится вручную или автоматически (пр «EasyMaq»)

Методы нуклеовыделения

- Термолизис (Экспресс-метод ,ведущий к потере части ДНК ,не подходит для выделения РНК)-Осаждение-Осаждение с магнитным штативом.При

Слайд 16Компоненты реакции ПЦР:
1)Искомая ДНК образца(хромосомная ,плазмидная) ,или РНК (геномная ,рибосомальная),

2)Праймеры-олигонуклеотиды

(10-30 азотистых оснований),содержащие комплементарную последовательность ДНК к границе специфического участка

искомой ДНК.
При отсутсвии такого участка праймер не прикрепится и ПЦР не начнется.

ПЦР-анализ. Компоненты ПЦР-смеси

Компоненты реакции ПЦР:1)Искомая ДНК образца(хромосомная ,плазмидная) ,или РНК (геномная ,рибосомальная),2)Праймеры-олигонуклеотиды (10-30 азотистых оснований),содержащие комплементарную последовательность ДНК к

Слайд 173) Термостабильная ДНК-зависимая ДНК-полимераза (TaqF)
Данный фермент выдерживает колебания высоких температур

на всех этапах амплификации.Активный синтез копий ДНК при температуре 70-72⁰С4) Cмесь

нуклеотидов с различными азотистыми основаниями.(А,Г,Ц,Т)
4) Нуклеотиды
Из нуклеотидов фермент ДНК-полимераза синтезирует копию ДНК.
5)Олигоуклеотиды-зонды,меченыефлуорофорами (FAM , HEXи пр.) и гасителем .Только для варианта ПЦР в реальном времени (Real-TimePCR)
6) Cолевой буферный раствор.Cодержит соли магния для работы полимеразы.

ПЦР-анализ.Компоненты ПЦР-смеси.

3) Термостабильная ДНК-зависимая ДНК-полимераза (TaqF)Данный фермент выдерживает колебания высоких температур на всех этапах амплификации.Активный синтез копий ДНК

Слайд 187)Ревертаза (Обратная транскриптаза) –только для ПЦР-диагностики вирусных инфекций ,вызванных РНК-содержащими

вирусами.
РНК не амплифицируется. Для ее обнаружения необходимо провести

процесс обратной транскрипции : на матрице РНК синтезируется копия ДНК (кДНК) , которая потом используется для амплификации.
Обратная транскрипция проводится либо предварительно в пробирке после этапа нуклеовыделения , либо непосредст- венно в амплификаторе при 50⁰С после нуклеовыделения и сборки ПЦР-смеси.
Такая ПЦР называется – ОТ-ПЦР (ПЦР с обратной транскрип цией)
8) Минеральное масло-используется для предотвращения испарения ПЦР-смеси во время амплификации.

ПЦР-анализ.Компоненты ПЦР-смеси

7)Ревертаза (Обратная транскриптаза) –только для ПЦР-диагностики вирусных инфекций ,вызванных РНК-содержащими вирусами. РНК не амплифицируется. Для ее

Слайд 19Варианты ПЦР-смесей:
- ПЦР-смеси ,которые неоходимо готовить из ,как правило,замороженных компонентов

при
в отдельной стерильной микропробирке объемом 1,5-2 мл при каждой

постановке ПЦР.
- Полуготовые ПЦР-смеси в отдельных микропробирках объемом 0,2 ,0,5 мл.,раскапанные
под воск ,которые требуют добавления смеси нуклеотидов на поверхность воска.
- Готовые лиофильно высушенные реакционные смеси (ГРС) в стрипованных или отдель
ныхмикропробирках – вся продукция ЗАО «ВекторБест» серии «РеалБест»

ПЦР-анализ.Компоненты ПЦР-смеси

Варианты ПЦР-смесей:- ПЦР-смеси ,которые неоходимо готовить из ,как правило,замороженных компонентов при в отдельной стерильной микропробирке объемом 1,5-2

Слайд 20ПЦР проводится с использованием тонкостенных или толстостенных микропробирок с выпуклыми/плоскими

крышками ,изготовленных из ДНК-аза /РНК-аза fre пластика.
Смесь раскапывется в определенном

объеме или отбирается необходимое количество микропробирок с готовой смесью и вносятся образцы с выделенной ДНК(РНК).
Объём реакционной смеси составляет от 0,25 до 0,5 мкл.
Обязательна постановка контрольных реакций ОКО и ПКО.

Проведение амплификации (собственно ПЦР)

ПЦР проводится с использованием тонкостенных или толстостенных микропробирок с выпуклыми/плоскими крышками ,изготовленных из ДНК-аза /РНК-аза fre пластика.Смесь

Слайд 21Амплификация- многократное увеличение числа копий специфического участка ДНК.
Амплификация проводится на

специальных приборах-амплификаторах(термоциклерах) и амплификаторах с детекцией флуоресцентного сигнала.
Данные приборы позволяют

резко изменять температуру согласно протоколу исследования.
2 типа приборов:
а) Планшетного типа (СFX-96 , ICyqler5)
б) Роторного типа (RottorGen)

Этапы ПЦР-анализа

Амплификация- многократное увеличение числа копий специфического участка ДНК.Амплификация проводится на специальных приборах-амплификаторах(термоциклерах) и амплификаторах с детекцией флуоресцентного

Слайд 22Амплификатор роторного типа

Слайд 23Денатурация(«плавление»)ДНК( при 93⁰-95⁰С) 30 с.- 2 мин.
Расплетение двойной

спирали и расхождение цепей.
Присоединение специфических праймеров(отжиг)(62⁰С) 30 с. – 2

мин.
Праймеры должны быть комплементарны специфическому
участку искомой ДНК. С места прикрепления праймера
начнется синтез копии нити ДНК ферментом полимеразой.
Синтез ДНК ДНК-полимеразой(72⁰С) – элонгация -1 мин.
Достраивание дочерней нити ДНК по принципу комплементарности из присутствующих в реакционной смеси нуклеотидов с различными азотистыми основаниями.

Этапы ПЦР-амплификации

Денатурация(«плавление»)ДНК( при 93⁰-95⁰С) 30 с.- 2 мин. Расплетение двойной спирали и расхождение цепей.Присоединение специфических праймеров(отжиг)(62⁰С) 30

Слайд 241-й цикл-удлинение участка дочерней цепи,начиная от праймера, происходит произвольно ,

т.к. используемая полимераза не способна синтезировать продолжительный участок. Образование побочных

продуктов.
2-й цикл - в растворе образуются ограниченные участки-ампликоны
Ампликон-специфический участок ДНК ,ограниченный двумя праймерами.
С 3-го цикла начинается копирование ампликонов , до тех пор пока не израсходуются компоненты реакции ,в первую очередь нуклеотиды ,полимераза и т.д.
Увеличение ампликонов происходит в геометрической прогрессии: 2 ,4 ,8,16 и т.д.

Этапы ПЦР-амплификации

1-й цикл-удлинение участка дочерней цепи,начиная от праймера, происходит произвольно , т.к. используемая полимераза не способна синтезировать продолжительный

Слайд 25Схема ПЦР- амплификации

Слайд 26Схема амплификации

Слайд 27 По способу детекции выделяют следующие варианты ПЦР:
1.

ПЦР с детекцией методом электрофореза в агарозном или полиакриламидном геле

с применением интеркалирующих красите- лей (этиленбромид). Классический вариант ПЦР-анализа.

2. ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в реальном времени / по конечной точке.
- метод основан на количественной флуоресцентно-гибридизацион- ной детекции специфических продуктов амплификации ,в которых специальные красители используются для наблюдения за развитием амплификации в реальном времени.
Используются термоциклеры (амплификаторы) ,совмещенные с детектором флуоресценции.

Детекция продуктов ПЦР

По способу детекции выделяют следующие варианты ПЦР:1. ПЦР с детекцией методом электрофореза в агарозном

Слайд 28Принцип ПЦР в реальном времени

Слайд 29Результат ПЦР в реальном времени

Слайд 30Достоинства ПЦР-диагностики:
Высокая чувствительность метода
Возможность диагностики на ранних стадиях заболевания
Исследование различного

материала от больных
(плазма/сыворотка крови;соскобы со слизистых

оболочек,ликвор,мокрота ,моча ,эякулят
,пунктаты)
Выявление широкого спектра возбудителей ,включая труднокультивируемые и некультивируемые бактерии,вирусы,простейшие.

Достоинства ПЦР-диагностики

Слайд 31Высокая стоимость оборудования.
Одновременная амплификация ДНК как живого , так и

погибшего микроорганизма , элиминация возбудителя не ранее 4-8 недель.
Возможность перекрестной

реакции .
Получение ложноотрицательных результатов при наличии ингибиторов ПЦР.
Определенная техническая подготовка персонала.
Вероятность контаминации:
А) Перекрестной контаминации от пробы к пробе , возникающая в процессе обработки образцов или при раскапывании реакционной смеси.
Б) Контаминация продуктами амплификации (ампликонами)

Недостатки ПЦР-диагностики

Высокая стоимость оборудования.Одновременная амплификация ДНК как живого , так и погибшего микроорганизма , элиминация возбудителя не ранее

Слайд 32

Слайд 33

Комиссаров А.Г.
СПб ГБУЗ «Городская поликлиника №75» бактериологическая лаборатория

Основные методы диагностики

инфекционных заболеваний

Слайд 34Методы,основанные на выявлении возбудителей
инфекционных заболеваний (бактерий

,вирусов,
грибов) в исследуемом материале.
Культуральные методы –

методы лабораторной
диагностики инфекционных заболеваний , основанный
на выделении чистой культуры возбудителя на
поверхности питательных сред или в культуре тканей.
Культуральные методы – «золотой» стандарт лаборатор
ной диагностики инфекционных заболеваний.
Выделяют бактериологический , микологический и
вирусологический методы.
Вирусы и хламидии не растут на питательных средах.
Для их выделения используют культуру тканей.

Методы диагностики инфекционных заболеваний

Методы,основанные на выявлении возбудителей инфекционных заболеваний (бактерий ,вирусов, грибов) в исследуемом

Слайд 35 2. Иммунологические методы поиска антигенов
возбудителей в

исследуемом материале.
а. Твердофазный иммуноферментный анализ(ИФА)
б. Иммунохроматография-бесприборный метод

экспресс-диагностики (для диагностики ОКИ ,
легионеллеза ,лямблиоза)
3. Молекулярно-генетические методы (Молекулярно-
биологические ,генетические)
ПЦР и ПЦР в «реальном времени».

Методы диагностики инфекционных заболеваний

2. Иммунологические методы поиска антигенов возбудителей в исследуемом материале. а. Твердофазный иммуноферментный анализ(ИФА) б.

Слайд 36 II. Методы ,основанные на выявлении иммунного
ответа

(серодиагностика ,инфекционная имму-
нодиагностика)
- метод

диагностики инфекционных заболеваний,
основанный на выявлении антител в крови к то-
му или иному возбудителю.

Лабораторная диагностика любых инфекционных
заболеваний должна быть комплексной!

Методы диагностики инфекционных заболеваний.

II. Методы ,основанные на выявлении иммунного ответа (серодиагностика ,инфекционная имму- нодиагностика)

Слайд 37Комиссаров А.Г.
УЧЕНИЕ ОБ ИНФЕКЦИИ

Слайд 38Инфекционный процесс – процесс взаимодействия
микроорганизма и макроорганизма в

определенных
условиях окружающей среды , крайней степенью
выраженности

которого является инфекционное
заболевание.
По источнику инфекции подразделяются:
Антропонозы-источник заболевания только человек.
Зоонозы – источник заболевания животные.
Сапронозы – источник заболевания внешняя среда.

Учение об инфекции

Инфекционный процесс – процесс взаимодействия микроорганизма и макроорганизма в определенных условиях окружающей среды , крайней

Слайд 39Фекально-оральный механизм
Пищевой путь
Водный путь
Контактно-бытовой
Аэрозольный механизм
- Воздушно-капельный и воздушно-пылевой пути
Трансмиссивный механизм
Контактный

-Гемоконтактный и половой пути
Механизмы передачи инфекции

Фекально-оральный механизмПищевой путьВодный путьКонтактно-бытовойАэрозольный механизм- Воздушно-капельный и воздушно-пылевой путиТрансмиссивный механизмКонтактный -Гемоконтактный и половой путиМеханизмы передачи инфекции

Слайд 40Патогенность – потенциальная способность данного вида микроорганизмов вызвать инфекционный процесс

у определенного вида хозяев. Качественное понятие. Определяется генетически. Свойство вида.
По

способности вызывать заболевания бактерии
подразделяются на:
Патогенные виды.
Условно-патогенные виды.
Непатогенные виды.

Понятие о патогенности.

Патогенность – потенциальная способность данного вида микроорганизмов вызвать инфекционный процесс у определенного вида хозяев. Качественное понятие. Определяется

Слайд 41Вирулентность – мера (степень) патогенности.
Количественное понятие. Свойство не

вида , а дан-
ного штамма микроорганизма.
По степени вирулентности

различают:
Высоковирулентные штаммы
Низковирулентные штаммы
Авирулентные штаммы

Понятие о вирулентности.

Вирулентность – мера (степень) патогенности. Количественное понятие. Свойство не вида , а дан- ного штамма

Слайд 42Адгезия – прикрепление к поверхности клеток слизистых оболочек.
Колонизация – активное

деление клеток с образова-
нием биопленок.
Инвазия – проникновение в

подслизистую оболочку.
Пенетрация и внутриклеточная инвазия для внутриклеточных бактерий.

Стадии инфекционного процесса

Адгезия – прикрепление к поверхности клеток слизистых оболочек.Колонизация – активное деление клеток с образова- нием биопленок.Инвазия

Слайд 43Факторы вирулентности

Слайд 44Факторы вирулентности.Инвазивность.
Инвазивность – способность проникать в организм
и распространяться

в нем.
Определяется:
Адгезией –прикрепление к слизистой оболочке за
счет пилей

общего типа , тейхоевых кислот , ЛПС.
Колонизацией (за счет жгутиков и различных фер-
ментов
Факторами защиты от иммунитета
Ферментами вирулентности
Внутриклеточной локализацией некоторых бактерий (хламидии , риккетсии ,анаплазмы).

Факторы вирулентности.Инвазивность.Инвазивность – способность проникать в организм и распространяться в нем.Определяется:Адгезией –прикрепление к слизистой оболочке за

Слайд 45Ядовитость – способность к продукции экзотоксинов,
либо наличие эндотоксина

(липополисахарид кле-
точной стенки грамотрицательных бактерий).
Ядовитость определяется:
Токсигенностью – способностью

к продукции экзо-
токсинов (дифтериная палочка , холерный вибрион,
,столбнячная палочка) Каждый токсин имеет мишень
в организме хозяина , синтезируется при жизни.
Токсичностью – наличием эндотоксина у всех Грамот-
рицательных бактерий ,высвобождается при гибели.

Ядовитость

Скачать презентацию

Разделы презентаций

ГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ Полимеразная цепная реакция

Содержание

Слайды и текст этой презентации

Слайд 1Комиссаров А.Г.Врач-бактериологСПб ГБУЗ «Городская поликлиника №75» Бактериологическая лабораторияГЕНЕТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ Полимеразная цепная реакция

Слайд 2Генетика- наука о законах наследственности и из- менчивости организмов.Единица

наследственности – ген1 ген кодирует структуру 1 белкаГен- функциональный участок

Слайд 3ДНК – двухцепочечная молекула ,состоящая из из нуклеотидов.ДНК обеспечивает

хранение генетической инфор- мации , ее воспроизведение в виде

Слайд 4

ДНК

Слайд 5Принцип строения ДНК универсален для всего живого, но у разных

видов ДНК отличается по длине , по составу и последовательности

Слайд 6У бактерий и грибов 3 типа РНК: Информационная РНК -

«информационный посредник» между ДНК нуклеоида и рибосомой. Транспортная РНКВ процессе

Слайд 7У вирусов только геномная РНК в двух вариантах геномная +РНК

и геномная - РНК +РНК является информационной РНК и

Слайд 8Особенности генетики бактерий: - Отсутствие оформленного ядра1 кольцевидно замкнутая ДНК

– нуклеоид.Наличие внехромосомных ДНК – плазмид ,несущих гены вирулентности

Слайд 9Схема реализации генетического кода:Ген (ДНК) -транскрипция-РНК -трансляция--белок (фермент/структурный белок) ------признак

(пример.наличие жгутика ,токсина ,адгезинов) Схема реализации генетической

Слайд 10 Уникальные свойства ДНК, а именно способность к репликации

, денатурации и восстановлению своей исходной структуры , транскрипции и

Слайд 11Основаны на обнаружении нуклеиновых кислот (ДНК, геномной РНК , рибосомальной

РНК) возбудителя (бактерий , вирусов ,грибов ,простей-ших) в пробе.Генетические методы:1) Гибридизационные2) Амплификационные

Слайд 12Основной и наиболее распространенный метод-ПЦР(Полимеразная цепная реакция)Основа реакции- способность ДНК

к самопроизведению.Позволяет увеличить число копий искомого специфического участка ДНК бактерий

Слайд 13

Метод ПЦР

, РНК ,рибосомальной РНК:Разрушение оболочек эпителиальных клеток ,оболочек бактерий и

Слайд 15- Термолизис (Экспресс-метод ,ведущий к потере части ДНК ,не подходит

для выделения РНК)-Осаждение-Осаждение с магнитным штативом.При любом способе нуклеовыделение

Слайд 16Компоненты реакции ПЦР:1)Искомая ДНК образца(хромосомная ,плазмидная) ,или РНК (геномная ,рибосомальная),2)Праймеры-олигонуклеотиды

(10-30 азотистых оснований),содержащие комплементарную последовательность ДНК к границе специфического участка

Слайд 173) Термостабильная ДНК-зависимая ДНК-полимераза (TaqF)Данный фермент выдерживает колебания высоких температур

на всех этапах амплификации.Активный синтез копий ДНК при температуре 70-72⁰С4) Cмесь

Слайд 187)Ревертаза (Обратная транскриптаза) –только для ПЦР-диагностики вирусных инфекций ,вызванных РНК-содержащими

вирусами. РНК не амплифицируется. Для ее обнаружения необходимо провести

Слайд 19Варианты ПЦР-смесей:- ПЦР-смеси ,которые неоходимо готовить из ,как правило,замороженных компонентов

при в отдельной стерильной микропробирке объемом 1,5-2 мл при каждой