Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального

МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ имени академика И.П. Павлова» МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ Российской федерАции
Кафедра

функционирования иммунной системы - иммунодефицитные состояния; аутоиммунная патология; аллергия».
Цикл 1

методы иммунного анализа вам известны?
Как происходила эволюция методов иммунного анализа?
Каковы

организме вырабатывается большое семейство антител, направленных к разным его эпитопам.

К одному и тому же эпитопу антигена также может образоваться целый спектр антител, отличающихся по структуре, степени специфичности и прочности связывания с эпитопом (это относится как к белковым, так и к полисахаридным антигенам).

в организме образуются многокомпонентные смеси антител к различным эпитопам антигена

Моноклональные антитела

Антитела, вырабатываемые одним клоном клеток
и направленные лишь к одной детерминанте антигена.
Именно моноклональные антитела используются в современные методах диагностики и терапии,
так как они обеспечивают абсолютную специфичность в распознавании данного антигена.

гибридомной технологии (Нобелевская премия 1984 года).
Моноклональные антитела
Иммуноглобулины, синтезируемые одним клоном

Гибридомная технология

Слияние с помощью полиэтиленгликоля лимфоцитов селезенки предварительно иммунизированных организмов определенным антигеном с раковыми клетками, способными к бесконечному делению. Отбирают клоны клеток, синтезирующие необходимые антитела.
Гибридомы - бессмертные клоны клеток, синтезирующие моноклональные антитела.

том, чтобы взять линию миеломных клеток, которые потеряли способность синтезировать

Гибридомная технология позволяет получить соматический гибрид нормальной антителообразующей и опухолевой клеток (гибридóма) дает потомство, обладающее бессмертием опухолевой клетки и способностью к синтезу антител, унаследованному от клетки нормальной. Гибридомы продуцируют огромное количество моноклональных антител, обладающих уникальной специфичностью.

в организме мыши активизируются продуцирующие антитела потомки В-лимфоцитов.
Эти клетки

человеку вызывало иммунную реакцию отторжения.
В 1988 году Грег Винтер разработал

антител (антицитокиновая терапия; анти - IgE –терапия и др.).
2. Диагностические

ядерный нуклеопротеин-1.
Однако, точно аутоантигены при псориазе не установлены.
Считается, что

мононоклональных антител:
инфликсимаб (препарат Ремикейд), блокада TNF-альфа;
адалимумаб (препарат Хумира), блокада TNF-альфа;
устекинумаб

поверхностях костей эрозий, что в дальнейшем становится причиной развития выраженных

Возможные этиологическаие факторы:
Вирус Эпштейна-Барр,
стрептококки группы В.
(антигенная мимикрия: компоненты микробных и вирусных тел имеют сродство к тканях суставов, способны длительное время накапливаться в них и вызывать развитие воспаления).

ЖКТ с поражением слизистой оболочки и подслизистого слоя и образованием

Современная терапия: Ведолизумаб -
- гуманизированное моноклональное антитело, связывающееся с интегрин-альфа4-бета7 - белком клеточной мембраны, ответственным за миграцию лейкоцитов в слизистую оболочку кишечника, и тем самым блокирующее чрезмерную воспалительную реакцию в этой области.

терапии хронического лимфолейкоза.
Вариабельный регион (Fab-фрагмент) алемтузумаба соединяется с антигеном

Кэмпас активирует систему комплемента, что приводит к образованию комплекса, разрушающего мембрану злокачественной клетки (комплемент-зависимая цитотоксичность).
Именно эти два механизма, а также индукция апоптоза считаются основными в действии данных антител,

любых молекул
(точные методы иммунного анализа).
(ранее для определения лимфоцитов использовали

антитела, созданные к определенным антигенам.

После образования иммунного комплекса
(АГ-АТ) с помощью

иммунного статуса, отражающая основные показатели тестов оценки иммунной системы человека.
Иммунный

Комплекс количественных и функциональных показателей,
отражающих конкретное состояние иммунной системы человека в данный момент времени, определяемое с помощью стандартизированных и разрешенных методов.

в лечебных учреждениях общего профиля, не требуют дорогостоящего оборудования и

Тесты второго уровня

Более углубленное исследование состояния иммунной системы в специализированных иммунологических лабораториях,
требующие дорогостоящей аппататуры,
реактивов,
обученного персонала.

звена врожденного и адаптивного иммунитета:
Определение абсолютного и относительного числа лейкоцитов

2.Определение абсолютного и относительного числа:
Т лимфоцитов (CD 3+);
В лимфоцитов
(CD 19 +);
NK (натуральных киллеров)
(CD 16/ CD 56 +).

CD 8+Т цитотоксический; отношение
CD 4+/ CD 8+ -

5.Оценка фагоцитарной активности моноцитов и нейтрофилов.
6. Оценка бактерицидной активности фагоцитов (выработка кислородных радикалов).
7. Оценка активности системы комплемента.

лечащим врачом, тесты второго уровня могут варьировать.
Цель выполнения тестов

числа Т регуляторных лимфоцитов (естественных и индуцибельных).
Определение числа γδ

4. В онкогематологии: определение фенотипа клеток на разных стадиях иммунопоэза (для уточнения стадии малигнизации).
5. Определение маркеров активации клеток:CD25;
CD 69; CD 71; HLA-DR.

В-лимфоцитов на митогены (поликлональные активаторы) или на конкретные антигены.
8.

9. Определение цитокинов.
10.Различные этапы фагоцитоза и рецепторный аппарат фагоцитов.
11. Содержание различных компонентов системы комплемента.

цитотоксических Т лимфоцитов) с определением гназимов/ перфоринов и осуществлением апоптоза

14. Определение классов и подклассов иммуноглобулинов.
15. Определение цитокинов в различных биологических жидкостях.

статуса.

2. С недостаточностью иммунного ответа (иммунодефицитные состояния).

3. С повышенной активацией

иммунологическая недостаточность (ПИН)
Наследственно - обусловленные дефекты иммунной системы.

Вторичная иммунологическая

Нарушения иммунной системы как у детей, так и у взрослых, не связанные с генетическими дефектами в иммунной системе.

активацией иммунного ответа (аутоиммунные заболевания, аллергия, воспаление).
Аутоиммунные заболевания –
Заболевания, в

Аутоантигены

Антигены собственного организма,
не стимулирующие запуск иммунного ответа в норме

оценки иммунного статуса в соответствии с этиологией
Вирусная инфекция
Система интерферонов.
Активность цитотоксических

Бактериальная инфекция

Фагоцитарная и оксидативная активность фагоцитов.
Число В-лимфоцитов.
Уровни иммуноглобулинов.
Активность системы комплемента.

установить те или иные нарушения функционировании иммунной системы.
Уточняющие
Позволяют объяснить механизмы

число –
% фагоцитирующих клеток, Фагоцитарный индекс – среднее число частиц,

адгезионной способности нейтрофилов к пластику, либо исследование интенсивности экспрессии адгезионных

абсолютного числа зрелых Т-лимфоцитов (CD3+ клеток)
и двух основных популяций

Исследование ответа Т-лимфоцитов в реакции бласттрансформации (РБТЛ) , либо определение маркеров пролиферации -
то есть оценка способности Т клеток к делению
(клональной экспансии).

CD25 (рецептор к интерлейкину 2)
и молекул HLA II класса

Исследование продукции цитокинов.
Изучение пролиферативного ответа Т лимфоцитов в реакции бласттрансформации на специфические антигены.

4+, CD4+/CD8+, CD25+


Активация клеток :
CD25+ ,  HLA II

Аутоиммунный

(CD 19+ клеток).
Определение уровней «неспецифических» иммуноглобулинов классов А,M, G,E
Определение циркулирующих

антиген) иммуноглобулинов классов А,M, G и субклассов G 1-4
Определение продукции

антиген-антитело и используется для регистрации либо антигенов, либо антител –

Для регистрации комплексов АГ-АТ используются флуоресцентные методы, хемилюминесцентные электрохимические и другие способы визуализации иммунных комплексов.

более 50-ти лет используется для
определения различных соединений
(как в

В то же время метод имеет ряд ограничений:
Требуется довольно большое количество образца.
Неспецифическое взаимодействие.
В подавляющем большинстве случаев
используется фермент-опосредованное
усиление сигнала.
4. Ограниченная производительность – 96 луночный планшет.

антигена),
с которыми могут связаться антитела.
Это приводит к уменьшению

поглощаются печенью, затем высвобождаются вновь и откладываются в таких тканях,

Иммунные комплексы, связанные с эритроцитами, реже оказывают повреждающее действие, эффективно элиминируются макрофагами в селезенке и печени. При недостаточности системы комплемента клиренс из организма иммунных комплексов нарушается.

почечных клубочках, в легочной ткани, вызывая воспалительные реакции.
Длительное отложение

крови
плазма крови (ЭДТА)


Биологические жидкости
цереброспинальная жидкость
секреты
смывы
моча
лаважная жидкость
Экстракты тканей

на плоскости

Проточная система и кювета
Двухлазерная компоновка
Детекция флюоресцентного

Карта микросфер (регионы)

Каждый класс микросфер картируется
100 регионов

с пришитыми к ним первичными антителами

3. Детекция: стрептавидин-ФЭ
Инкубация 30 мин
2.

Инкубация 10 мин

4. Считывание результатов
в приборе Био-Плекс 200

Анализ цитокинов – за 3,5 часа

Между каждым
этапом - промывка
Bio-Plex Pro Wash Station

Инкубация 30 мин

показателей)
Белки сигнальной трансдукции (50 показателей)



Специализированные панели на патологические состояния

Острая фаза

класса Е:
Определение специфических IgE к разнообразным аллергенам (пищевым, пыльцевым, бытовым,

Определение иммуноглобулинов класса Е к лекарственным препаратам.
Определение иммуноглобулинов класса Е к зубопротезным материалам.

мл, 1 МЕ/мл = 2.4 нг (1968 г., ВОЗ)

реагенты к нему играют основную роль для получения качественных результатов.

твёрдой фазой является трёхмерная активированная целлюлозная губка, которая связывается с

оценить различные звенья иммунной системы.
2. Сравнительная характеристика изменений показателей
всех

сопоставление полученных показателей у больного с величиной нормальных значений, полученных

4. Изучение иммунологических показателей в динамике заболевания и в сопоставлении с данными других исследований (микробиологичес
ких, вирусологических).

клинических симптомов (анализировать иммунограмму должны совместно - лечащий врач и

6. Постановку диагноза «иммунодефицитное состояние» и назначение адекватной иммунотерапии после проведения иммунологического обследования проводит только лечащий врач, а не врач –лаборант, который может лишь фиксировать изменения в отдельных звеньях иммунной системы.

иного звена иммунитета (иммунодефици
тные состояния).

Нарушения в распознавании антигена иммунной системой

Гиперреактивный или измененный тип иммунного ответа (аллергические заболевания)

анализа вам известны?
Как происходила эволюция методов иммунного анализа?
Каковы основные принципы

тесты иммунного анализа подразделяются на:
тесты I уровня
тесты I I

анализ
Методы розеткообразования

Моноклональные антитела получают:
При иммунизации лабораторных животных разными антигенами
Путем

звена?
В возрасте 2 недель
В возрасте 1 месяц
В возрасте 2 месяца
В

синдром (гипопротеинемия)
Применение иммунодепрессантов
Дефекты генов, кодирующих адгезионные молекулы
Хрониостресс 
Какой тип гиперчувствительности лежит

астма
Аллергический конъюктивит
Неиммунологическая крапивница
 
В развитии каких аутоиммунных заболеваний преимущественное участие не

тем занятий 1-4, 6-11 цикла « Иммунология».
В зачетном билете будут

пройденных тем курса иммунология (занятия 1-4, 6-11).
В зачетном билете будут