Групповая принадлежность крови

с лабораторной диагностикой

антителами плазмы (агглютининами)

антигены,
антигены, определяющие тип гаптоглобина, белков крови, тканей, органов, систем

комплемента,
антигены, расположенные на мембране отдельных видов клеток и др.

Расположение антигенов на мембране эритроцита

(аквапорины, транспортеры глюкозы, нуклеозидов, мочевины и др.),
структурная (GPA, GPC),

регуляторная (адгезивные молекулы, ферменты),
активация комплемента (CD35, CD55, CD59 и др.),
трофическая, переносят на себе ферменты, гормоны и белки плазмы.

серии)
Часто встречающиеся антигены (901-е серии)
* По данным ISBT (международное

общество переливания крови)

генетическим локусом или двумя и более тесно связанными гомологичными генами

с небольшой или не выявляющейся рекомбинацией между ними. Для каждой системы показана четкая генетическая дискретность от другой системы группы крови.

которых не соответствуют критериям системы группы крови. Известно 5 коллекций,

содержащих 11 антигенов.

менее 1%. Антитела, направленные к этим антигенам, реагируют с настолько

малым числом образцов крови, что фактически не создают проблем при ее отборе для трансфузии.

Часто встречающиеся антигены, распространенность в популяции более 90%, насчитывают 14 антигенов. Эритроциты людей, вырабатывающих аллоантитела на специфический антиген групп крови, как правило, не несут этого антигена, антитела, направленные к часто встречающимся антигенам, определяются редко.

течение всей жизни.
В биохимической структуре антигены групп крови представляют

собой протеины, гликопротеины или гликолипиды, расположенные на внешней поверхности мембраны эритроцита.

первого триместра беременности – появление АВН-антигенов в секретах

из двух легких и двух тяжелых полипептидных цепей, соединенных дисульфидными

связями
Антитела к антигенам эритроцитов относятся к IgM (естественные антитела), IgG (иммунные антитела), IgA

и Штурли, 1902 год, 155 образцов крови, IV гр.крови

Dungem и Hirzfeld,
новое обозначение: агглютиногены А и В, появилось

название системы АВО

1930 г. вручение Нобелевской премии К. Ландштейнеру

Открытие групп крови

соответствующие друг другу агглютинины и агглютиногены не сосуществуют.

в эритроцитах людей, имеющих группу крови 0, но не является

продуктом гена 0.
количество вещества Н обратно пропорционально количеству вещества А и В, т.е. сумма А+Н и В+Н представляет собой постоянную величину.

а также свободную галактозу и инозитол.
Н-локус (=FUT1) расположен на

длинном плече хромосомы 19 в позиции 19q13.3,
представляет другую антигенную систему, не зависимую от АВО.

генами А и В, способны присоединять соответствующие остатки сахара к

галактозе, в том случае, если сердцевинная цепь уже преобразована в Н-антиген.

- q34.2. Наследственную передачу антигенов системы АВО установил F.Begustein (1924)

обладает наибольшей антигенной силой, вследствие чего выражено агглютинируется сывороткой людей

с группами крови 0 и В, т.е. а-изогемагглютининами.
Антиген А2 (12 %), агглютинируется сыворотками анти-0 и анти-Н, тогда как эритроциты A1 слабее реагируют на эти сыворотки.
В сыворотке крови с группой крови А2 (1-2 %) и А2В (26 %) содержатся антитела против А1.
Антигены Аз и А4 являются ещё более слабыми и при воздействии антисыворотки дают маловыраженную агглютинацию

в 1940 г.
встречается у 85 % людей белой расы,

был назван резус-фактором. (Rh+, Rh-).
Полиморфен, известно более 50 его разновидностей. Разновидности резус-фактора: D, С, E, с, е, имеющие наибольшее значение в медицинской практике. Антиген d, антитетичный партнер антигена D, не найден.
Антигены кодируются двумя генами, RND и RHCE, расположенными на коротком плече хромосомы 1, в положении 1p36.11.

D (при нормальном количестве 10 000 - 35 000 детерминант

на одном эритроците);

D вариантный - отсутствие некоторых эпитопов или мутации гена

агглютинации от 1+ до 3+). Резус-принадлежность крови беременных, имеющих антиген

D слабый, считается положительной

Диагностика D вариантного (D partial) антигена проводят при необходимости, при этом используют специальную тест-систему с применением гелевого метода. Если у беременной женщины выявлен D вариантный антиген, то резус-принадлежность считается отрицательной, так как у лиц, имеющих указанный антиген, при беременности плодом с резус-положительной принадлежностью эритроцитов могут выработаться анти-D антитела.

инструкций по иммуносерологии".
2. Приказ Минздрава РФ N 363 от 25 ноября

2002 г. "Об утверждении Инструкции по применению компонентов крови".
3. Приказ МЗ РФ N 50 от 10.02.2003 "О совершенствовании акушерско-гинекологической помощи в амбулаторно-поликлинических учреждениях".
4. Методические рекомендации МЗ РФ N 99/181. Утв. 17.05.2000 г. "Алгоритмы исследования антигенов эритроцитов и антиэритроцитарных антител в сложнодиагностируемых случаях".
5. Методические указания МЗ РФ N 2001/109, утв. 11.04.2002. "Требования к проведению иммуногематологических исследований доноров и реципиентов на СПК и в ЛПУ".

сыворотками и стандартными эритроцитами (перекрестный),
с помощью моноклональных антител (цоликлонов),
методом агглютинации

в геле (ScanGel).

стандартных сывороток и групповых агглютининов в сыворотке исследуемой крови при

помощи стандартных эритроцитов.

Определение группы крови перекрестным методом

для отделения сыворотки
Определение производят на белой пластинке, на верхнюю

часть которой наносят маркировку.
Наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартных изогемагглютинирующих сывороток
Наносят по одной маленькой (0,01 мл) капле стандартных эритроцитов в следующем порядке слева направо: О(I), А(II) и В(III).
Пипеткой накапывают сыворотку по одной большой (0,1 мл) капле на подготовленные стандартные эритроциты. После наносят эритроциты по маленькой (0,01 мл) капле рядом с подготовленной стандартной сывороткой
Перемешивают капли сухой стеклянной палочкой, пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают. Наблюдение за ходом реакции проводят не менее 5 минут.
По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 минуты, в те капли, в которых она наступила, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора NaCl и продолжают наблюдение при покачивании пластинки до истечения пяти минут.

помощи стандартных сывороток

обозначено наличие агглютинации, знаком (-) ее отсутствие.

для определения групп крови человека системы АВО в прямых

реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.

принадлежат к иммуноглобулинам класса М.

Изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А

и анти-В гибридом.

Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.

наличие агглютинации, знаком (0) ее отсутствие.

M анти-D или анти-D супер

Гелевый метод.


Моноклональные антитела:
анти-D, анти-С,

анти-Е, анти-с, анти-е.

в 1989 г.

Метод основан на агглютинации эритроцитов в агаровом

геле «сефадекс», помещенном в микропробирки.

Диапазон выполняемых тестов включает в себя:
определение фенотипа эритроцитов (включая слабые и вариантные антигены),
антиглобулиновый тест,
скрининг и идентификацию антител,
тесты на совместимость и некоторые другие.

специфических антител, – применяется для поиска и идентификации антител солевым

и ферментным методами, холодовой стадии пробы на совместимость крови донора и реципиента;
специфический, содержащий антитела (моноклональные или поликлональные) к антигенам эритроцитов крови человека, - применяется для типирования антигенов эритроцитов систем АВО, Резус, Келл и т.д.;
антиглобулиновый, содержащий антитела (полиспецифические или моноспецифические) к иммуноглобулинам человека и компонентам системы комплемента, - применяется для прямого и непрямого антиглобулинового теста (реакция Кумбса) при поиске и идентификации ауто- и аллоиммунных антител, пробе на совместимость крови донора и реципиента.

задержались на поверхности геля;
положительный (+++) – агглютинаты располагаются в верхней

трети столбика геля;
слабоположительный (++) – агглютинаты фиксированы в верхних двух третях геля;
очень слабоположительный (+) – агглютинаты располагаются в нижней трети геля;
отрицательный (-) – эритроциты формируют на дне микропробирки компактный осадок

составляет 1 на 25 000 трансфузий.

Фатальные гемолитические осложнения встречаются

с частотой 1 на 100 000 трансфузий.

Несовместимость по группе АВО составляет примерно 83 % от всех фатальных острых гемолитических осложнений.

При этом летальность в результате несовместимых по системе АВ0 трансфузий составляет
в Великобритании 1 на 10 случаев несовместимых трансфузий,
в США – 1 на 18,
в России – 1 на 3,9.



А.В. Колосков Пути повышения иммунологической безопасности гемотрансфузионной терапии в многопрофильном стационаре «Гематология и трансфузиология». - 2006. – т.51. - № 3. – с. 42 – 47.

1.            Технические ошибки:
неправильная маркировка пробирок с кровью, взятой на исследование
отсутствие

маркировки планшета и нарушение порядка нанесения стандартных сывороток, эритроцитов, цоликлонов, неправильная регистрация результатов исследования;
нарушение техники исследования:
нарушение пропорции реагент – кровь
использование реагентов с истекшим сроком годности
сокращение времени наблюдения за реакцией
неблагоприятный температурный режим (менее15°или более 25°С)
нанесение различных реагентов одной пипеткой или смешивание различных капель одной палочкой;

групп крови и резус-принадлежности.
низкая активность (авидность) типирующих реагентов;
нарушение условий хранения

реагентов (несоответствие температурного режима, нарушение герметичности, инфицирование);
изготовителем не обеспечены необходимые параметры (узкий спектр специфичности анти-А антител)

Основные причины ошибок при определении группы крови и резус-фактора:

А2В не агглютинируется образцами сывороток и моноклональных антител анти А.

Если исследование группы проводится по стандартным сывороткам (или цоликлонам) без использования перекрестного метода, то группа крови может быть неправильно определена как 0 или В.
Анти А1 реактив, приготовленный из семян бобовых агглютинирует эритроциты А1 и не агглютинирует эритроциты А2 и А2В.

Пациент ошибочно может быть отнесен к группе AB(IV)
При аутоиммунной гемолитической

анемии (адсорбция аутоантител на эритроцитах)
При гемолитической болезни новорожденных (эритроциты нагружены аллоантителами матери)
При наличии агглютинации эритроцитов с реагентами анти-А, анти-В, анти-АВ, анти-Д необходимо провести пробу со стандартной сывороткой АВ(IV)

Трудноопределимые группы крови

отличающихся по группе крови и другим антигенам
Трансфузионные химеры – в

результате многократного переливания эритроцитарной массы или взвеси группы 0(I) реципиентам другой группы
Истинные химеры – у гетерозиготных близнецов, после пересадки аллогенного мозга
Установление группы крови затруднено
При переливании учитывают присутствующие антигены и антитела

Трудноопределимые группы крови

использовании перекрестного способа - агглютинация исследуемых сывороток с эритроцитами 0
Присутствие

на исследуемых эритроцитах холодовых аутоантител, вызывающих аутоагглютинацию эритроцитов собственной сывороткой больного
Реакция выражена при температуре ниже, чем температура тела
Холодовые антитела обнаруживаются у больных гематологическими и онкологическими заболеваниями, аутоиммунными гемолитическими анемиями, тромбоцитопениями, гипрегаммаглобулинемии.
Проводят: предварительное отмывание эритроцитов исследуемой крови, проведение методики при t 38-40 С.

Трудноопределимые группы крови

Холодовых антител
1. Взять кровь у больного в теплую пробирку, которую

поместить в термоконтейнер до исследования.
2. Поместить исследуемый образец крови в термостат при +37 град. C до окончания исследования.
3. Предварительно нагреть раствор натрия хлорида 0,9%; станд.сыворотки; эритроциты и плоскость, поместив их в термостат.
4. Провести исследование группы крови на теплой плоскости, подогретыми реактивами перекрестным способом со стандартными эритроцитами.
5. При необходимости произвести отмывание исследуемых эритроцитов теплым раствором натрия хлорида (наличие аутоантител на эритроцитах).

сыворотки со станд.эритроцитами O отсутствует и изогемагглютинирующая сыворотка группы AB

не агглютинирует исследуемые эритроциты, то группа крови определена правильно.

7. Если результаты исследования станд.сыворотками и станд.эритроцитами совпадают, агглютинация исследуемых эритроцитов с сывороткой AB отсутствует, но исследуемая сыворотка взаимодействует с некоторыми образцами эритроцитов O - это свидетельствует о присутствии в сыворотке специфических Холодовых аллоантител. Для установления специфичности указанных антител необходимо провести исследования сыворотки с панелью эритроцитов, типированных по антигенам систем MNS, P.

8. Если результаты исследования станд.сыворотками и станд.эритроцитами не совпадают, исследуемая сыворотка все еще агглютинирует все образцы эритроцитов O (иногда включая собственные), это означает присутствие в исследуемом образце Холодовых аутоантител. Правильное исследование группы крови возможно после адсобции аутоантител.

Проведение исследования групповой принадлежности крови при наличии в исследуемой сыворотке Холодовых антител

у больных циррозом печени, при ожогах, сепсисе
Пониженная агглютинабельность эритроцитов при

лейкозах (ложная кровяная химера), у пожилых и новорожденных

Трудноопределимые группы крови

предыдущего
Повторное исследование показывает такое же отличие. Результаты исследования со стандартными

эритроцитами и стандартными сыворотками не совпадают

Отрицательный результат по сравнению с ожидаемым (отсутствие ожидаемой агглютинации)

Положительный результат по сравнению с ожидаемым (наличие неожиданной агглютинации)

Повторить исследование с модификациями:
Увеличить соотношение сыворотки к эритроцитам до 1:20
Уменьшить Т град. реакции, увеличить время инкубации до 30-60 минут при 8 град. C
- Исследовать результат под микроскопом
- Использовать разные типы реактивов
Причины слабой агглютинации:
Ослабление экспрессии антигенов при
заболевании, беременности, из-за возрастных изменений, прием лекарственных средств.

Результат исследования отличается от предыдущего

Повторное исследование показывает такое же отличие. Результаты исследования со стандартными эритроцитами и стандартными сыворотками не совпадают

Результат исследования отличается от предыдущего

Повторить исследование на свежевзятом образце крови

эритроциты теплым физ. раствором и повторить исследование
Исследовать сыворотку с

различными образцами эритроцитов (или скрининг антител) включая проведение аутоконтроля

Расхождения были вызваны холо-довыми агглюти-нинами или моне-тными столбиками

Исследуйте с реакти-вами различных видов
Изучите трансфузион-ный анамнез
Узнайте диагноз больного
Исследуйте наличие аутосенсибилизации (прямой АГ тест)

Причины расхождений:
Химеризм групп крови
Недавняя АВО-несовместимая трансфузия
Трансплантация костного мозга
Полиагглютинабельность эритроцитов
Приобретенный В антиген (если реципиент группы A)
Аутоантитела на эритроцитах
Сопутствующие антитела в используемых реактивах

Совпадает

Не совпадает

Аутоконтроль отрицательный
С эритроцитами A1-полож.результат
С эритроцитами A2- и панелью для скрининга отриц.результат

Подгруппа A2 или A2B с анти- A1

Все эритроциты дали (+) результат
Аутоконтроль (+)

В сыворотке присутствуют аутоантитела

Один или больше образцов дали поло-жительный результат

В сыворотке присутству-ют аллоантитела
Установить специфич-ность с панелью эритроцитов
Оценить клиническое значение аллоантител

реактивы, в качестве которых нет сомнения.
Исследование

необходимо проводить перекрестным способом. Не использовать для исследования эритроциты A, B и O от произвольно взятых лиц, применять только стандартные эритроциты.
Использовать изогемагглютинирующую сыворотку AB для контроля специфичности реакции агглютинации.
Кровь для исследования брать до проведения больному гемотрансфузий, так как трансфузии несовместимой крови и больших объемов компонентов от лиц группы крови 0 могут приводить к последующему неправильному заключению о групповой принадлежности.
Кровь для исследования брать до переливания плазмозамещающих растворов (для исключения ошибок, вызванных склеиванием эритроцитов в монетные столбики).
Обращать внимание на диагноз. Ошибки чаще встречаются при исследовании крови больных онкологическими, гематологическими заболеваниями, беременных женщин.
Взятие крови и определение групповой принадлежности производить дважды с использованием каждый раз двух серий сывороток.

эритроцитах аутоантител, вызывающих слабоположительную реакцию за счет связывания с компонентами

реагента анти-резус. Для исключения провести контроль на каждое исследование.
Ослабление активности антигенов системы Резус при заболеваниях.

Ложноотрицательный результат:
Наличие D-вариантного и D слабого антигенов.
Ослабление антигенов при заболеваниях,
Недостаточное качество реактивов (низкая активность антител, узкий спектр антител, выявляющий не все варианты антигенов)
Нарушение методики исследования (неправильное соотношение реактивов, несоблюдение температуры и времени).

другой специфичности.
В реактиве, используемом для определения резус-принадлежности, содержатся

антитела дополнительной специфичности (например, анти-K, -C, -Fy и так далее).
На исследуемых эритроцитах присутствуют аутоантитела.
Полиагглютинабельность исследуемых эритроцитов.
Бактериальное загрязнение крови.

Ложноотрицательные результаты:
Ошибочное использование другого реактива.
Недостаточно-высокое качество используемого реактива.
Ослабление активности антигенов при заболеваниях.
Использование реактива антирезус для метода исследования, который не указан на этикетке.
Реактив антирезус не добавлен в исследуемый образец.
Чрезмерно-интенсивное перемешивание взвеси эритроциты-реактив при проведении исследования, что приводит к распаду мелких агглютинатов
Срок годности используемого реактива истек.

взаимодействуют с антигенами эритроцитов, но направленны против иных химических структур,

представленных на эритроцитах и вызывающих их неспецифическую агглютинацию.

того чтобы быть уверенным, что заготовленная гемотрансфузионная среда не содержит

антител, способных вызвать гемолиз эритроцитов реципиентов (тромбовзвесь, плазма, эритроконцентрат).
У реципиентов перед гемотрансфузией, чтобы предотвратить гемотрансфузию, несовместимую по антигенам эритроцитов донора с антителами реципиента.
У беременных женщин для выявления возможного иммунологическогоконфликта с плодом по антигенам эритроцитов (для диагностики гемолитической болезни новорожденных).
При выяснении причин ложноположительных реакций при определении группы крови и постановке пробы на совместимость.

при некоторых аутоиммунных заболеваниях.

При диагностике гемолитической болезни новорожденных, обусловленной иммунологическим конфликтом мать-плод по антигенам эритроцитов.
При исследовании антител к лекарствам.
При выяснении причин ложноположительных реакций в аутоконтроле при проведении изосерологических исследований антигенов и антител.

Кумбсом, Морантом, Рейс в 1945 г.

Суть данного метода: антиглобулиновая

сыворотка, содержащая антитела к иммуноглобулинам человека, при реакции с эритроцитами, сенсибилизированными неполными антителами, приводит к их агглютинации.

В зависимости от того, фиксированы ли антитела на поверхности эритроцитов или находятся в свободном состоянии в плазме крови, применяется прямая или непрямая проба Кумбса.

эритроцитов антителами в солевой среде
К IgG относятся се виды иммунных

антител (антитела к антигенам эритроцитов Резус, Келл, Даффи и др.). Для выявления необходимо добавление коллоидных добавок, повышение температуры, применение антиглобулиновой сыворотки)

сенсибилизации соответствующими антителами, т.е. первая фаза реакции — фиксация антител

на поверхности эритроцитов — произошла в организме
последующее добавление антиглобулиновой сыворотки вызывает агглютинацию сенсибилизированных клеток.

Первый этап — инкубация тест-эритроцитов с исследуемой сывороткой, во

время которой происходит фиксация на эритроцитарной поверхности антител, содержащихся в исследуемом образце.
Второй этап — добавление антиглобулиновой сыворотки.

Кидд, Льюис и др.) и антител к этим антигенам;
для обнаружения

и идентификации аллоиммунных антиэритроцитарных антител, включая антитела, вызывающие гемолитические посттрансфузионные реакции;
для определения наличия иммунных антител системы АВ0 при трансфузионных гемолитических осложнениях;
в качестве пробы на совместимость при индивидуальном подборе переливаемой крови и ее компонентов
для более точного установления резус-принадлежности (антиген D) при нечетких результатах определения резус-фактора другими методами (полиглюкиновый, желатиновый и др.)