I Разделение и очистка

кислот

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Масс-спектрометрия

Иммунохимические методы анализа

идентификации нуклеиновых кислот основаны на явлении их гибридизации, которое заключается

в способности одноцепочечных молекул нуклеиновых кислот связываться с комплементарными по составу нуклеотидов одноцепочечными молекулами, образуя дуплексы (двухцепочечные молекулы нуклеиновых кислот).

называется ренатурацией или отжигом

ДНК, РНК, олигонуклеотидами

длинные дуплексы удерживаются большим числом водородных связей и требуют больше

энергии для их разрушения;

- состав нуклеотидов  так как GC-пары образуют три водородные связи, а AT-пары  две, чем выше процентное содержание GC-нуклеотидов в составе цепей дуплекса, тем выше температура или рН среды, при которых происходит денатурация дуплекса;

- состав среды  моновалентные катионы (например, ионы Na+) стабилизируют структуру дуплекса; а вещества, разрушающие водородные связи, такие как мочевина и формамид, облегчают денатурацию

Стабильность дуплексов нуклеиновых кислот

температура, соответствующая средней точке перехода между исходным (двухцепочечным) и денатурированным

(одноцепочечным) состоянием молекул нуклеиновых кислот.
Температуру плавления (Tm) дуплексов нуклеиновых кислот, в составе которых две цепи полностью комплементарны друг другу по составу нуклеотидов, можно рассчитать с помощью формул. Наличие некомплементарных оснований в цепях гетеродуплекса снижает его стабильность.

Примечания: а или для других моновалентных катионов, выполняется в диапазоне концентраций ионов 0,01- 0,4 М;
б справедливо при содержании GC пар от 30% до 70%;
в N – длина гетеродуплекса в п.н.

Стабильность дуплексов нуклеиновых кислот

- фермент

situ hybridization, FISH)

клетки можно выделить методом аффинной хроматографии, используя носитель с последовательностью

поли-Т