Разделы презентаций
- Разное
- Английский язык
- Астрономия
- Алгебра
- Биология
- География
- Геометрия
- Детские презентации
- Информатика
- История
- Литература
- Математика
- Медицина
- Менеджмент
- Музыка
- МХК
- Немецкий язык
- ОБЖ
- Обществознание
- Окружающий мир
- Педагогика
- Русский язык
- Технология
- Физика
- Философия
- Химия
- Шаблоны, картинки для презентаций
- Экология
- Экономика
- Юриспруденция
Иммунологические методы диагностики инфекционных заболеваний
Содержание
- 1. Иммунологические методы диагностики инфекционных заболеваний
- 2. Реакции иммунитета – реакции между АГ и
- 3. Особенности:Высокочувствительны (улавливают АГ в больших количествах)Строго специфичны
- 4. Серологические (гуморальные) реакции – р-ции АГ+АТ (АТ
- 5. Взаимодействии АГ-АТ основано на принципе взаимного узнавания, обусловленного их комплементарностью (избирательной «прилипаемостью» молекул)
- 6. Способы достижения комплементарностиСоответствие поверхностей выступ-углубление
- 7. Способы достижения комплементарностиПротивоположными электрическими зарядами: против «+»
- 8. Способы достижения комплементарностиКомбинаций электростатической и конформационной (пространственной)
- 9. типы ИРАгглютинацииПреципитацииЛизисаОпсонизацииНейтрализацииСвязывания комплементаСоответственно каждому из феноменов in
- 10. Серологические реакции в зависимости от участвующих в них компонентов и условий среды
- 11. Феномен взаимодействия:Молекулы АГ, участвующих в РА и РП – поливалентныАТ – двухвалентны или пятивалентны
- 12. Возникновение в серологических р-ях крупных агрегатов, видимых
- 13. Серологические р-ции – р-ции взаимодействия м/у АГ
- 14. 2-я фаза – неспецифическая – комплекс АГ+АТ
- 15. Х-р видимой фазы зависит от состоянияАГ и условий среды, в которой происходит еговзаимод-е с АТ
- 16. Применение серологических р-ийДля серодиагностики (выявление АТ в
- 17. Применение серологических реакций
- 18. Приготовление иммунной (диагностической) сыворотки:Получают из крови людей
- 19. иммунные сыв-киНативные (неадсорбированные)адсорбированные
- 20. Недостаток нативных сыв-к:Наличие в них групповых АТ
- 21. Адсорбированные сыв-ки – строго специфичны (реагируют только
- 22. Гибридомы – клетки, вырабатывающие in vitro моноклональные
- 23. Моноклональные АТ синтезированы к одному классу, подклассу,
- 24. Реакция агглютинации (РА) – склеивание и выпадение
- 25. Постановка реакции:РА на стекле (ориентировочная)РА развернутая (в пробирках)
- 26. РА на стекле
- 27. РА развернутая
- 28. РА развернутаяТитр агглютинирующей сыв-ки – ее максимальное
- 29. Агглютинация:Мелкозернистая (О-агглютинация – при работе с АТ
- 30. Титр сыворотки б-го сравнивают с диагностическим («законодательным»)
- 31. Реакция коагглютинации - для определения антигенов с
- 32. Реакция гемагглютинации (по механизму действия):РГА – серологическая
- 33. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА, РПГА)Er, с адсорбированным
- 34. Реакция преципитации (РП) – выпадение в осадок
- 35. Основные методы постановки РП:Р. кольцепреципитацииРП в агаре
- 36. радиальная иммунодиффузия (по Манчини) :АГ, диффундируя в
- 37. Экспресс-диагностика сифилиса (ЭДС). Реакция микропреципитации на
- 38. Иммуноэлектрофорез - сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации:
- 39. Реакции лизиса (иммунный цитолиз) – растворение клеток
- 40. РСК применяютдля идентификации АГв серодиагностике (напр. р. Вассермана)участвуют:С′две системы АГ+АТ: основная и гемолитическая или индикаторная
- 41. Отсутствие гемолиза регистрируют как «+» результат РСК
- 42. Реакция иммунофлюоресценции - РИФ (метод Кунса) -
- 43. Непрямой метод РИФ - выявление комплекса антиген
- 44. РИФ (ПИФ)
- 45. Радиоиммунный метод (РИА) - основан на реакции
- 46. После взаимодействия АГ с АТ отделяют образовавшийся
- 47. Иммуноферментный анализ (ИФА) - выявление АГ с
- 48. ИФАПосле соединения антигена с меченой ферментом иммунной
- 49. Твердофазный ИФА - вариант теста, когда
- 50. Конкурентный ИФА для определения антигенов: искомый антиген(1)
- 51. Иммуноблоттинг (син. вестернблоттинг) - высокочувствительный метод выявления
- 52. Метод переноса пятен ДНК первоначально разработал Сазен
- 53. Иммунная электронная микроскопия (ИЭМ)- электронная микроскопия микробов,
- 54. Реакция иммунного прилипания (РИП) основана на активации
- 55. АТ иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие
- 56. При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего
- 57. Реакция флоккуляции (по Рамону) ( лат .
- 58. Слайд 58
- 59. Скачать презентанцию
Реакции иммунитета – реакции между АГ и АТ или между АГ и сенсибилизированными лимфоцитамиПроисходят в живом организме и могут быть воспроизведены в лабораторных условиях
Слайды и текст этой презентации
Слайд 1
ГБОУ ВПО «ВЛАДИВОСТОКСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ МЗСР РФ»
Кафедра микробиологии
и вирусологии
д.м.н., проф. Шаркова В. А.
Слайд 2Реакции иммунитета – реакции между АГ и АТ или между
АГ и сенсибилизированными лимфоцитами
Происходят в живом организме и могут быть
воспроизведены в лабораторных условиях
Слайд 3Особенности:
Высокочувствительны (улавливают АГ в больших количествах)
Строго специфичны (позволяют отличить близкие
по составу АГ)
Широко используются в решении теоретических и практических вопросов
медицины, биологии: в иммунологии, микробиологии, биохимии, генетике, онкологии, др.
Слайд 4Серологические (гуморальные) реакции –
р-ции АГ+АТ (АТ всегда находятся в
жидкой среде, сыворотке)
Serum - сыворотка
Humor - жидкость
Клеточные реакции - р-ции
АГ с сенсибилизированными лимфоцитами 
Слайд 5Взаимодействии АГ-АТ основано на принципе взаимного узнавания, обусловленного их комплементарностью
(избирательной «прилипаемостью» молекул)
Слайд 7Способы достижения комплементарности
Противоположными электрическими зарядами: против «+» заряда располагается «-»
в результате электростатических сил Кулона
АГ +
- АТ+ -
+ -
Слайд 8Способы достижения комплементарности
Комбинаций электростатической и конформационной (пространственной) комплементарности и расположением
друг против друга неполярных (гидрофобных) групп
АГ АТ+ -
+ -
- +
- +
+ -
Слайд 9типы ИР
Агглютинации
Преципитации
Лизиса
Опсонизации
Нейтрализации
Связывания комплемента
Соответственно каждому из феноменов in vitro АТ именуют:
агглютинины, преципитины, лизины, опсонины, комплементсвязывающие (типы АТ одни и те
же)
Слайд 11Феномен взаимодействия:
Молекулы АГ, участвующих в РА и РП – поливалентны
АТ
– двухвалентны или пятивалентны
Слайд 12Возникновение в серологических р-ях крупных агрегатов, видимых невооруженным глазом, объясняется
т. сети (т. образования сетевых структур)
Последующие присоединения ведут к образованию
сетей из АГ и АТ, превращающихся в крупные агрегаты, выпадающие в осадок
Слайд 13Серологические р-ции – р-ции взаимодействия м/у АГ и АТ:
1-я фаза
– специфическая – адсорбция АТ на частицах АГ
Слайд 142-я фаза – неспецифическая – комплекс АГ+АТ взаимодействует с неспецифическими
факторами среды, в которой идет р-ция, и, в следствии снижения
электрических зарядов, изменения физико-химических свойств АГ – результат взаимодействия виден невооруженным взглядом (склеивание, растворение…)Х-р видимой фазы
зависит от состояния
АГ и условий среды, в
которой происходит его
взаимод-е с АТ
Слайд 15Х-р видимой фазы
зависит от состояния
АГ и условий среды, в
которой происходит его
взаимод-е с АТ
Слайд 16Применение серологических р-ий
Для серодиагностики (выявление АТ в сыворотке б-ого)
Для серотипирования
(идентификации) – определение вида или типа АГ, выделенного из патогенного
материала МКОДля определения активности (титра) сыв-ки
В научных исследованиях
Слайд 18
Приготовление иммунной (диагностической) сыворотки:
Получают из крови людей или животных, иммунизированных
по схеме соответствующим АГ (вакциной)
Определяют титр (наибольшее разведение с-ки, в
котором она реагирует с соответствующим АГ в определенных условиях опыта)
Слайд 20
Недостаток нативных сыв-к:
Наличие в них групповых АТ (АТ к МКО,
имеющим общие АГ)
такие АГ есть у МКО, принадлежащих к
одной группе, роду, семейству
Слайд 21
Адсорбированные сыв-ки – строго специфичны (реагируют только с гомологичным АГ)
АТ
к другим (гетерогенным) АГ удалены адсорбцией
Однако, даже максимально очищенные, они
содержат АТ к различным антигенным детерминантам комплексного антигена, т.е. гетерогенныГетерогенность антител снижает чувствительность методов индикации антигенов и биологический эффект иммунных сывороток
Слайд 22Гибридомы – клетки, вырабатывающие in vitro моноклональные АТ (каждая популяция
АТ синтезируется одним клоном, т.е. отдельной линией клеток)
Гибридомы получены путем
гибридизации нормальных лимфоцитов иммунизированных мышей с миеломными клетками мышей
Слайд 23
Моноклональные АТ синтезированы к одному классу, подклассу, аллотипу, имеют один
вид легких цепей, однозначную аффинность (можно получить АТ к определенному
участку молекулы)Применяют для определения в сыворотке крови антигенов опухолей, микробных вирусных антигенов, для определения гормонов, медиаторов
Слайд 24Реакция агглютинации (РА) – склеивание и выпадение в осадок микробов
или других клеток под действием АТ в присутствии электролита (изотонического
р-ра NaCl)Для р-ции необходимы:
АТ (агглютинины) – в сыв-ке б-ого или в иммунной сыв-ке
АГ (агглютиноген)- взвесь живых или убитых МКО, Er, др. кл-к
Изотонический р-р
РА применяется
для серодиагностики ( при брюшном тифе, паратифах - р-я Видаля, бруцеллезе – р. Райта и др.)
АТ при этом определяются в сыворотке б-го, АГ является взвесь известного убитого микроба – диагностикум
идентификации микробов – АГ служит их взвесь, а антителом – известная иммунная сыворотка (диагностическая)
Слайд 28РА развернутая
Титр агглютинирующей сыв-ки – ее максимальное разведение, в котором
она агглютинирует гомологичные клетки
Агглютиноскоп – прибор для изучения характера и
величины агглютината
Слайд 29
Агглютинация:
Мелкозернистая (О-агглютинация – при работе с АТ к О-соматическому АГ)
Хлопьевидная
(Н-агглютинация)
наступает быстрее, образующийся при этом осадок очень рыхлый, легко разбивается
Слайд 30
Титр сыворотки б-го сравнивают с диагностическим («законодательным») титром
Если равен или
выше – заболевание,
ниже – начало заболевания, реконвалесценция или дальнейшая интерпретация
результатовПри серотипировании титр должен быть не менее половины титра диагностической сыворотки
Слайд 31Реакция коагглютинации - для определения антигенов с помощью антител, адсорбированных
на белке А клеток стафилококка (антительный диагностикум)
Антительный диагностикум
Белок А имеет
сродство к Fc-фрагменту иммуноглобулинов, поэтому такие бактерии, обработанные иммунной диагностической сывороткой неспецифически адсорбируют антитела сыворотки, которые затем взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба
Слайд 32Реакция гемагглютинации (по механизму действия):
РГА – серологическая (Er агглютинируются с
АТ (гемагглютининами)
РГА – несерологическая, в основе – биологический механизм (наличие
на Er некоторых видов рецепторов к вирусным частицам)Позволяет судить о наличии вируса в материале
Слайд 33Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА, РПГА)
Er, с адсорбированным на поверхности растворимым
АГ, приобретают способность агглютинироваться при взаимодействии с АТ к адсорбированному
АГ
Слайд 34Реакция преципитации (РП) – выпадение в осадок специфического иммунного комплекса,
состоящего из растворимого АГ (лизат, экстракт, гаптен) и специфического АТ
в присутствии электролитовРП обычно применяют для определения АГ:
при диагностике сибирской язвы (р. Асколи), менингита, др.
для определения видовой принадлежности крови, спермы
при установлении фальсификации продуктов
определяют филогенетическое родство животных и растений
Слайд 35Основные методы постановки РП:
Р. кольцепреципитации
РП в агаре (геле):
- радиальная иммунодиффузия
(по Манчини)
- двойная (встречная) радиальная иммунодиффузия (по Оухтерлони): У
многокомпонентных систем между лунками с антигенами и антителами появляется несколько линий преципитата; у идентичных АГ линии преципитата сливаются; у неидентичных АГ - пересекаются
Слайд 36радиальная иммунодиффузия (по Манчини) :
АГ, диффундируя в гель, образует с
антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок
Диаметр кольца преципитации пропорционален
концентрации антигенаРеакцию используют для определения в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др.
Слайд 37Экспресс-диагностика сифилиса (ЭДС).
Реакция микропреципитации на примере экспресс-диагностики сифилиса
(ЭДС)
реакция выполняется для скрининга сывороток при массовых обследованиях на сифилис
в лунках иммунологического планшетасыворотки крови пациентов
кардиолипиновый антиген (неспецифический)
два контроля:
физиологический раствор и кардиолипиновый антиген (контроль мутности)
заведомо положительная сыворотка и кардиолопиновый антиген (контроль преципитата)
В опытной лунке – изучаемая сыворотка больного, взятая в разведении 1:10 и кардиолипиновый антиген (2-5 минут осторожно покачиваем планшет, в течение этого времени формируется преципитат, жидкость в лунке становится прозрачной. Учет реакции ведется по четырехплюсовой системе. Результат, оцениваемый как один и два плюса считается сомнительным, на 3 и ++++ - положительным
Слайд 38Иммуноэлектрофорез - сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации:
смесь антигенов вносится
в лунки геля и разделяется в геле с помощью электрофореза
(в течение 1-2 часов. Различные антигены с разной скоростью перемещаются между катодом и анодом), затем в канавку параллельно зонам электрофореза вносят иммунную сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте "встречи" с антигеном линии преципитации
Слайд 39Реакции лизиса (иммунный цитолиз) – растворение клеток под воздействием АТ
при участии комплемента. Для реакции необходимы МО, лизины (АТ), Er
или др. клетки и С′Р.бактериолиза (С′ лизирует бактерии в присутствии гомологичной сыворотки)
РСК – р. связывания комплемента (комплекс АГ+АТ всегда адсорбирует на себе С′)
Слайд 40РСК применяют
для идентификации АГ
в серодиагностике (напр. р. Вассермана)
участвуют:
С′
две системы АГ+АТ:
основная и гемолитическая или индикаторная
Слайд 42Реакция иммунофлюоресценции - РИФ (метод Кунса) - метод экспресс-диагностики для
выявления антигенов микробов или определения антител
Прямой метод РИФ основан
на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета
Слайд 43Непрямой метод РИФ - выявление комплекса антиген - антитело с
помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом:
мазки из взвеси
микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе
Слайд 44РИФ (ПИФ)
РНИФ (НИФ)
высокая специфичность, чувствительность,
положительна на 3—4-й
неделе после заражения сифилисом
Слайд 45Радиоиммунный метод (РИА) - основан на реакции антиген - антитело
с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом (123I, 14C, 3Н,
51Сr и др.)применяют для выявления:
микробных антигенов
гормонов
ферментов и т.д.
Слайд 46После взаимодействия АГ с АТ отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс
и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (бета- или гамма-излучение)
Интенсивность
излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул АГ и АТтвердофазный РИА – меченные АГ или АТ, сорбированные в лунках полистироловых панелей
Слайд 47Иммуноферментный анализ (ИФА) - выявление АГ с помощью соответствующего АТ,
конъюгированного с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазной и или щелочной фосфатазой)
применяют для :
- диагностики вирусных,
бактериальных и
паразитарных болезней
определения гормонов,
ферментов
- лекарственных препаратов,
- др. БАВ,
содержащихся в минорных
концентрациях - 1010 - 1012
Слайд 48ИФА
После соединения антигена с меченой ферментом иммунной сывороткой в смесь
добавляют субстрат/хромоген
Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции
- интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител
Слайд 49 Твердофазный ИФА - вариант теста, когда один из компонентов
иммунной -реакции (антиген или антитело ) сорбирован на твердом носителе,
напр., в лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или антигенов. При положительном результате изменяется цвет хромогена
Слайд 50Конкурентный ИФА для определения антигенов: искомый антиген(1) и меченый ферментом
антиген(2) конкурируют друг с другом за антитела (3), сорбированные на
твердой фазеКонкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченые ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.
Слайд 51Иммуноблоттинг (син. вестернблоттинг) - высокочувствительный метод выявления белков, основанный на
сочетании электрофореза и ИФА
Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в
полиакриламидном гелепереносят их (блоттинг - от англ, blot, пятно) из геля на активированную бумагу (1) или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с "блотами" антигенов
На эти полоски наносят сыворотку больного (2)
после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом (3)
на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата (4), изменяющего окраску под действием фермента
Слайд 52
Метод переноса пятен ДНК первоначально разработал Сазен (Southern) - фамилия
означает ЮЖНЫЙ; метод получил название сазенблоттинг (южный перенос)
Метод переноса фрагментов
ДНК называют нозенблоттинг (северный перенос)переноса фрагментов белка - вестернблоттинг (западный перенос)
Слайд 53Иммунная электронная микроскопия (ИЭМ)- электронная микроскопия микробов, чаще вирусов, обработанных
соответствующими антителами
Вирусы, обработанные иммунной сывороткой, образуют иммунные агрегаты (микропреципитаты).
Вокруг вирионов образуется "венчи" из антител, контрастированный фосфорно-вольфрамовой кислотой или другими электроннооптически плотными препаратами
Слайд 54Реакция иммунного прилипания (РИП) основана на активации системы комплемента корпускулярными
антигенами (бактериями, вирусами), обработанными иммунной сывороткой
В результате образуется активированный третий
компонент комплемента (СЗb), который присоединяется к корпускулярному антигену в составе иммунного комплексаНа эритроцитах, тромбоцитах, макрофагах имеются рецепторы для СЗb, благодаря чему при смешивании этих клеток с иммунными комплексами, несущими СЗb, происходят их соединение и агглютинация
(Препаратмикроскопия ультратонкого среза стафилококка, инкубированного с сывороткой и форменными элементами крови. Иммунное прилипание стафилококков к эритроциту посредством иммуноглобулинового покрова, образовавшегося в результате отложения иммуноглобулинов, комплемента и др. белков на клеточной стенке бактерий. (Препарат А.С. Быкова)
Слайд 55АТ иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их
токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой
микробных антигенов антителами, т.е. их нейтрализациейРеакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген - антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы)
РН
Контроль Опыт
Физ. раствор Токсин + антитоксическая поливалентная
сыворотка
Слайд 56При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или
их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и,
следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген - антитело.Реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток:
А - цитопатогенный эффект (ЦПЭ) в результате размножения вирусов;
Б - ЦПЭ отсутствует в результате нейтрализации вирусов антителами
РН
Слайд 57Реакция флоккуляции (по Рамону) ( лат . f1оecus - хлопья
шерсти) - появление опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитации) в пробирке
при реакции токсин - антитоксин или анатоксин – антитоксиндля определения активности антитоксической сыворотки или анатоксина
