Иммунохимические методы анализа

гр. 4106

антигена с антителом. Cфера применения - показаны в ситуациях, когда

необходимо количественно определить концентрации химических веществ, содержащихся в очень низких концентрациях в биологическом материале.
Белки сыворотки крови: Иммуноглобулины, липопротеины Опухолевые маркёры: Раково-эмбриональный антиген (РЭА), альфа-фетопротеин и др.
Гормоны.
Инфекционные маркёры: Нbs Ag,Anti-HIV
Маркеры воспаления: Ревматоидный Фактор, С- Реактивный Белок Лекарственные вещества: Теофиллин, Дигоксин, Фенитоин и др.

можно легко и точно дифференцировать в биологической пробе химические вещества,

имеющие очень схожую молекулярную структуру (например, Тироксин и Трийодтиронин).

Чувствительность:
При помощи иммунологических методов исследования в биологической пробе можно определить химические вещества в концентрациях вплоть до 10 - 23 моль/л.

– реакция между антигеном и антителом.

Антиген - вещество, распознающееся

иммунной системой.
Антитела (иммуноглобулины) - белки, специфически реагирующие с антигенами.

Антиген подходит к определенному антителу как «ключ к замку».

антигена - тест-система должна иметь в своём составе соответствующее антитело

(для определения концентрации дигоксина надо иметь в тест- системе антитела к нему)
2.Детекция антител - тест-система должна содержать в своём составе соответствующий антиген (для определении антител к НbSAg в тест системе должен содержаться синтетический HbSAg) 3.Детекция иммунного комплекса (т.е. связанных между собой Антигена и Антитела) – реакция преципитации, агглютинации и т.д. ( в зависимости от молекулярной массы и концентрации в сыворотке крови исследуемого антигена

( об образовании комплекса АГ-АТ судят по появлению новых свойств

метки ( потеря активности). Нет необходимости в этапе их физического разделения)
- Гетерогенные ( одна из фракций прикрепляется к твердой фазе, покрытой АГ или АТ, поэтому другие фракции должны быть удалены.)
- Смешанные (Если же на первой стадии анализа образование специфических иммунных комплексов происходит в растворе, а лишь затем для целей разделения используют твердую фазу с иммобилизованным реагентом .)

на первой стадии в системе одновременно присутствует анализируемое соединение и

его аналог, конкурирующие за ограниченное количество центров специфического связывания)
неконкурентный (если в системе присутствуют только анализируемое соединение и соответствующие ему центры связывания (антиген и специфические антитела)).

3) По применению общих антивидовых антител:
Прямой
Непрямой

антиген - антитело с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом

(125J,14C, 3Н, 51Сr и др.). После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (бета- или гамма-излучение). Интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.

определить уровень содержания гормонов в миллионных частях миллионной части грамма.
Ученые,

открывшие радиоиммунный анализ, с его помощью изучали клиренс инсулина у больных диабетом, поэтому первоначально его применяли для измерения концентрации инсулина в плазме крови. Однако чем больше последующие поколения ученых изучали РИА, тем он становился популярнее и востребованнее. И сегодня его используют для измерения концентрации самых разных гормонов: гормоны поджелудочной железы, желудочно-кишечного тракта, гипофиза, щитовидной железы, а также для измерения негормональных веществ: ферментов, опухолевых антигенов, белков сыворотки крови и др.
Так, при помощи радиоиммунного анализа диагностируют самые различные заболевания.

на реакции преципитации.
1)Простая радиальная иммунодиффузия .

Суть метода заключается в следующем:
-

в тонком слое геля, содержащего антитела в известной концентрации, вырезают лунки;
- антиген, помещенный в эти лунки, диффундирует в гель;
вокруг лунок образуются кольца преципитации, диаметр которых пропорционален концентрации антигена.

Метод обычно применяется для определения концентрации иммуноглобулинов.

тонком слое геля вырезают лунки для антигена и антител;
антиген и

антитела диффундируют навстречу друг другу, образуя линии преципитации на некотором расстоянии от лунок.
По расстоянию от лунки с антигеном до линии преципитации можно определить концентрацию антигена.

электрофореза.
Суть метода заключается в следующем:
- в лунку, вырезанную в

тонком слое геля, помещают исследуемую сыворотку;
- проводят электрофоретическое разделение белков сыворотки;
- в геле вырезают бороздку, параллельную направлению миграции белков при электрофорезе, и заполняют ее смесью антител к сывороточным белкам;
разделенные при электрофорезе белки (антигены) и антитела диффундируют навстречу друг другу. В местах связывания антител с антигенами образуются дуги преципитации.

Иммуноэлектрофорез применяется в основном для исследования сывороточных белков