Культивирование бактерий. Изучение культуральных

бактерий.
Питательные среды, их назначение, применение, классификация. Условия культивирования бактерий. Термостат,

правила эксплуатации.
Выделение чистой культуры бактерий. Культуральные и биохимические свойства бактерий, их значение для дифференциации бактерий.
Особенности культивирования риккетсий и хламидий. Культивирование анаэробов.
Список использованной литературы.

Содержание

вещества.
Вода составляет 80% массы клетки.
Белки – 40-80% сухой

массы бактерий (участвуют в процессах метаболизма, обладают ферментативной активностью).
Белки обладают антигенными и иммуногенными свойствами, вирулентностью и видовой принадлежностью.
НК (нуклеиновые кислоты) – 10-30% сухой массы.
ДНК определяет наследственность.
РНК – информационная, матричная, транспортная, рибосомальная.
Участвуют в биосинтезе белка.

Химический состав бактериальной клетки.

Крахмал и гликоген являются запасными питательными веществами.
Липиды входят в

состав цитоплазматической мембраны и её производных. В цитоплазме откладываются на запас. Липиды представлены фосфолипидами, жирными кислотами и глицерином.
Минеральные вещества – 2-14% сухой массы. Фосфор, калий, натрий, сера, железо, кальций, магний, а также микроэлементы – цинк, медь, кобальт, барий, марганец.

Химический состав бактериальной клетки.

из которых слагается метаболизм микроорганизма.
Ферменты представляют собой белки с

молекулярной массой от 10000 до нескольких миллионов. Ферменты синтезируются самой микробной клеткой и имеют сложное строение.

Ферменты бактерий. Питание, дыхание, рост и размножение бактерий.

газ.
2. Гетеротрофы – питаются готовыми органическими соединениями.
3. Сапрофиты – гетеротрофы,

утилизирующие органические остатки отмерших организмов.
4. Паразиты – бактерии, существующие за счет органических веществ живых клеток и тканей, вызывающие заболевания у человека или животных.
5. Фототрофы - фотосинтезирующие бактерии.
6. Хемотрофы – бактерии, синтезирующие химическую энергию.

Ферменты бактерий. Питание, дыхание, рост и размножение бактерий.

По способу питания:

бактериальной клетки.
Размножение – самовоспроизведение, приводящее к увеличению количества бактериальных

клеток и популяции.

Бактерии размножаются бинарным делением пополам, реже – почкованием.

Рост и размножение.

простые, сложные.
по источнику – естественные и синтетические (искусственные).
по назначению –

основные, универсальные, специальные, элективные, транспортные, дифференциально-диагностические, обогащенные, индикаторные.

Питательные среды, их назначение, применение, классификация. Условия культивирования бактерий. Термостат, правила эксплуатации.

слегка наклонно, причем пробирку с посевным материалом держат ближе к

себе. В правой руке, как писчее перо держат бактериальную петлю и прокаливают ее вертикально в пламени горел­ки. Мизинцем и краем ладони правой руки вынимают одновременно пробки из обеих пробирок- края пробирок обжигают в пламени горелки. Прокаленной петлей набирают немного посевного материала и вносят в пробирку с жидкой средой. Необходимо следить за тем, чтобы среда не вылилась и не касалась пробки.

Выделение чистой культуры бактерий. Культуральные и биохимические свойства бактерий, их значение для дифференциации бактерий.

Способы посева микроорганизмов

После посева петлю извлекают из пробирки, края пробирки обжигают и, проведя пробку через пламя горелки, закрывают пробирку, после чего прока­лывают петлю. Посев жидкого материала можно производить стерильными пастеровскими или градуированными пипетками. Пробирки с засеянной куль­турой этикируют и помешают в термостат.

петлей или в пи­петку, наносят на поверхность МПА и втирают

шпателем по всей поверхности агара. При посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой, использу­ют 2-3 чашки для последовательного посева.

Способы посева микроорганизмов.

выделения чистой куль­туры микроба.

Осторожно приподняв крышку чашки, захватывают прокаленной

и осту­женной петлей одну отдельно расположенную колонию и вносят в пробирку с плотной питательной средой. Пробирку держат в наклонном положении в ле­вой руке между большим и указательным пальцами. Правой рукой держат пет­лю с посевным материалом. Мизинцем, мякотью ладонью правой руки выни­мают пробку из пробирки, обжигают в пламени горелки ее край и вносят в нее петлю, посев производят:

Способы посева микроорганизмов.

а) штрихами на поверхности агара;

б) уколом в столбик агара.

При посевах и пересевах внимание работающего должно быть обращено на соблюдение правил стерильности: чтобы с одной стороны не загрязнить свои посевы посторонней микрофлорой, а с другой — не явиться источником инфек­ции для окружающих.

Пассивная аэрация – культивирование на плотных и жидких средах в

сосудах, закрытых ватным тампоном, или в чашках Петри.
5. Активная аэрация (выращивают в больших объёмах.
Сроки культивирования – 18-24 часа, но есть виды, растущие медленно ( до 4-6 недель).

Методы культивирования.

в жидкой питательной среде.
Существует ряд методов выделения чистой культуры в

зависимости от свойств изучаемого материала и цели исследования. Обычно чистые культуры получают из изолированных колоний - обособленных скоплений микробов на плотной среде.

Методы выделений чистых культур микроорганизмов.

Этапы выделения чистой культуры:

1-й день - получение изолированных колоний. Каплю исследуемого материала петлей, пипеткой или стеклянной палочной наносят на поверхность агара в чашке Петри. Шпателем втирают материал в поверхность среды; не прожигая и не перевертывая шпателя, производят посев на 2-й, а затем на 3-й чашке. При таком посеве на 1-ю чашку приходится много материала и соответственно много микробов, на 2-ю меньше и на 3-ю еще меньше.

2-й день - изучают рост микробов на чашках. В 1-й чашке обычно бывает сплошной рост - выделить изолированную колонию не удается. На поверхности агара во 2-й и 3-й чашке вырастают изолированные колонии. Их изучают невооруженным глазом, с помощью лупы, при малом увеличении микроскопа и иногда в стереоскопическом микроскопе (см. главу 31). Нужную колонию отмечают со стороны дна чашки и пересевают на скошенный агар. Посевы ставят в термостат.

мазок, окрашивают его и, убедившись в том, что культура чистая,

приступают к ее изучению. На этом выделение чистой культуры заканчивается. Выделенная из определенного источника и изученная культура, называется штаммом.

При выделении чистой культуры из крови (гемокультуры) ее предварительно "подращивают" в жидкой среде: 10-15 мл стерильно взятой крови засевают в 100-150 мл жидкой среды. Так поступают потому, что в крови обычно мало микробов. Соотношение засеваемой крови и питательной среды 1:10 не случайно - так достигается разведение крови (неразведенная кровь губительно действует на микроорганизмы). Колбы с посевом ставят в термостат. Через сутки (иногда через большее время в зависимости от выделяемой культуры) из содержимого колб делают высевы на чашки для получения изолированных колоний. При необходимости повторяют высевы с интервалами 2-3 дня.

В ряде методов для получения чистых культур используют биологические особенности выделяемого микроба. Например, при выделении спорообразующих бактерий посевы прогревают при 80° С 10 мин, убивая этим вегетативные формы; при выделении возбудителя туберкулеза, устойчивого к кислотам и щелочам, с помощью этих веществ посевной материал освобождают от сопутствующей флоры; для выделения пневмококка и палочки чумы исследуемый материал вводят белым мышам - в их организме, высокочувствительном к данным возбудителям, эти микробы размножаются быстрее других.

В научно-исследовательской работе, особенно при генетических исследованиях, необходимо получать культуры заведомо из одной клетки. Такая культура называется клон. Для ее получения чаще всего пользуются микроманипулятором - прибором, снабженным инструментами (иглами, пипетками) микроскопических размеров. С помощью держателя под контролем микроскопа их вводят в препарат "висячая капля", извлекают нужную клетку (одну) и переносят ее в питательную среду.

Методы выделений чистых культур микроорганизмов.

не только видовую и типовую принадлежность микроба, но и определить

его варианты (биовары).

- Протеолитические свойства (способность расщеплять белки, полипептиды) изучают на средах с желатином, молоком, сывороткой, пептоном. При росте на желатиновой среде микробов, ферментирующих желатин, среда разжижается.
- Гемолитические свойства (способность разрушать эритроциты) изучают на средах с кровью. Жидкие среды становятся прозрачными, а на плотных средах вокруг колонии появляется прозрачная зона.

Ферментативная активность

при – 30… +70°С.
Длительно сохранять культуры можно также в жидком

азоте (-196°С) в специальных приборах.

Методы непродолжительного сохранения:
Субкультивирование;
Сохранение по слоем масла;
Хранение при -20… +70°С;
Хранение в запаянных пробирках.

Сохранение культур.

лишить доступа свободного кислорода воздуха. Для этого удаляют воздух из

питательной среды различными способами.

Культивирование актиномицетов, грибов, микоплазм, L-форм, спирохет и простейших.
Культивирование этих микроорганизмов принципиально сходно с культивированием бактерий. Для них разработаны специальные среды и подобраны режимы, соответствующие их потребностям.

Культивирование риккетсий и вирусов.
Риккетсии и вирусы являются облигатными паразитами, т. е. могут развиваться только в живых клетках. Их культивируют в культурах тканей, организме экспериментальных животных, развивающихся куриных эмбрионах.

Особенности культивирования риккетсий и хламидий. Культивирование анаэробов.

http://bsmy.ru/3692
4.http://biologylib.ru/books/item/f00/s00/z0000015/st010.shtml


Список использованной литературы.