Слайд 1Лабораторная диагностика бруцеллёза
Слайд 2Бруцеллёз — зоонозная инфекция
Слайд 3Род Brucella - 10 видов
B. melitensis (3 биовара; преимущественно
поражает коз и овец, возможна миграция на крупный рогатый скот
и свиней),
B. abortus (7 биоваров; вызывает аборты и орхиты у крупного рогатого скота),
B. suis (5 биоваров; поражает свиней, зайцев, северных оленей, грызунов),
B. neotomae (выделяется от пустынной кустарниковой крысы),
B. ovis (вызывает эпидидимиты и орхиты у баранов),
B. canis (поражает собак).
Вновь зарегистрированные бруцеллы:
B. ceti выделяются от китообразных,
B. pinnipedialis - от ластоногих
B. microti - от серой полевки,
B. inopinata - источник не установлен.
Заболевания людей преимущественно вызывают
B. melitensis, B. abortus и B. suis биовары 1 - 4, реже - B. canis
Слайд 4Бруцеллы в мазке из чистой культуры
Бруцеллы в мазке-отпечатке из тканей
Окраска по методу Грама
Слайд 6
Бруцеллы обитают в организме млекопитащих преимущественно внутри макрофагов и плацентарных
трофобластов.
Слайд 8КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗА
ГЛАЗА
Кератит
Язва роговицы
Увеит
Эндофтальмит
ОРГАНЫ ДЫХАНИЯ
Бронхит
Бронхопневмония
Лимфоаденопатия корня легкого
Абсцесс легкого
Плеврит
ЖКТ
Гепатит
Илеит
Панкреатит
Холецистит
Перитонит
КОЖНЫЕ ПОКРОВЫ
Узелковая эритема
Васкулит
ЦНС
Менингит
Энцефалит
Психоз
Полирадикулит
Периферическая
нейропатия
ССС
Эндокардит
Миокардит
Перикардит
МПС
Орхит
Гломерулонефрит
Интерстициальный нефрит
Пиелонефрит
Аборт
ОДС
Артрит (сакроилеит)
Остеомиелит
Слайд 9Лабораторная диагностика
бруцеллёза
Клинический материал:
кровь,
костный мозг,
спинномозговая жидкость,
пунктат из лимфоузлов,
моча,
желчь,
суставная жидкость
(при артритах),
гной (при абсцессах).
Материал из объектов внешней среды, продукты.
Слайд 10пересев клинического материала с транспортной среды на плотные и жидкие
среды; инкубация при 37 °С до 20 - 30 сут.;
3
- 21 сут. от начала исследования:
- учет результатов роста, бактериоскопия;
постановка реакции агглютинации (МФА) отобранных изолированных колоний с сывороткой бруцеллезной диагностической поливалентной для РА;
отсев для получения чистой культуры;
5 - 30 дней от начала исследования:
постановка с культурами возбудителя бруцеллеза, находящимися в стабильной S-форме, тестов межвидовой дифференциации:
- отношение к избыточному содержанию углекислоты в воздухе;
- образование сероводорода;
- редукция красителей (тионин, основной фуксин);
- агглютинация моноспецифическими бруцеллезными сыворотками (anti-abortus, anti-melitensis);
- чувствительность к бруцеллезному бактериофагу Тб;
- чувствительность к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом;
10 - 40 сут. от начала исследования:
учет результатов.
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Слайд 11- заражение биопробных животных (морские свинки, белые мыши) подкожно в
паховую область или внутрибрюшинно - при исследовании крови, спинномозговой жидкости,
костного мозга.
- вскрытие биопробных животных,
посев на питательные среды патологического материала: лимфатические узлы (регионарные в месте введения исследуемого материала, паховый, подчелюстной, шейный, парааортальный), кусочки органов (селезенка, печень, костный мозг), кровь;
- приготовление мазков-отпечатков из органов биопробных животных, постановка МФА;
- постановка ПЦР (суспензия из гомогената органов, лимфатических узлов, костный мозг, сыворотка крови);
- постановка реакций агглютинации
40 сут. от начала исследования:
учет результатов.
20-35 сут. от начала исследования:
БИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
Слайд 12СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ
МЕТОД
(реакции агглютинации Хеддельсона и Райта, реакция Кумбса,
РНГА, ИФА )
Отстаивание
1-2 часа 20 ̊С
Забор крови
Слайд 13
Протокол. Лабораторная диагностика бруцеллеза
Слайд 17Диагностический титр - 1:200
1:100
1:400
1:200
1:800
Слайд 18Brucellinum
Бруцеллин — фильтрат 30-дневной бульонной культуры трех типов бруцелл
Показания к применению
Бруцеллин
применяется для диагностики бруцеллеза у людей и выявления иммунологической перестройки
организма после вакцинации.
Правила применения
Бруцеллин вводят внутрикожно в дозе 0,1 мл в ладонную поверхность предплечья.
Оценка результата 24-48 часов
Размер гиперемированного и отечного участка:
- до 1 см – peaкция сомнительная;
- 1-3 см – реакция слабо положительная;
- 3-6 см – реакция положительная;
- более 6 см – реакция резко положительная.
Аллергический метод
Проба Бюрне с бруцеллином
Слайд 19с пробами из нативного материала
с материалом из подозрительных колоний;
с материалом
от биопробных животных
с пробами из объектов внешней среды, продуктов
Молекулярно-генетические методы
исследования
ПЦР
Слайд 21Вакцина для профилактики бруцеллеза
Культура живых микробов вакцинного штамма Вrucella abortus
19 ВА.
Через 20-30 дней после вакцинации развитие иммунитета до 10-12 мес, максимальная напряженность сохраняется 5-6 мес. Вакцинацию следует проводить не позднее, чем за 3-4 нед до начала работы, связанной с риском заражения.
Слайд 22Вакцина бруцеллезная инактивированная лечебная
Лекарственная форма:
лиофилизат для приготовления раствора для подкожного
введения и накожного нанесения, суспензия для инъекций
Слайд 23Лабораторная диагностика
сибирской язвы
Слайд 24Сибирская язва —
особо опасная инфекция (ООИ)
Слайд 25Классификация
Семейство Bacillaceae
Род Bacillus
Вид B. anthracis
Слайд 26B.аnthracis
мазок из стареющей культуры
мазок-отпечаток из пораженных тканей
(окраска по
Граму))
Слайд 30Лабораторная диагностика сибирской язвы
материал для исследования
а) от больных или подозрительных
на заболевание людей в зависимости от формы заболевания - содержимое
везикул, отделяемое карбункула или язвы, струпья, мокрота, кровь, спинномозговая жидкость, моча, испражнения, экссудаты;
б) трупный материал - кровь, экссудаты, кусочки органов (селезенки, печени, лимфоузлов и др.);
в) материал от животных;
г) продовольственное сырье и продукты животного происхождения;
д) объекты окружающей среды - почва, трава, фураж, подстилка, вода и т.д.
Слайд 31БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД
СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ
Слайд 32ЛЮМИНИСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ
(МФА)
Слайд 33БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД
I уровень исследования
Посевы материала на:
МПА, агарХоттингера ,
агар
с фенолфталеинфосфатом (на щелочную фосфатазу)
МПБ.
Инкубация (36 +/- 1) °С
на 18 - 20 ч (до 48 ч)
Через 24 часа
Оценка характера роста
Бактериоскопия
Оценка активности щелочной фосфатазы (нет розовых колоний при обработке аммиаком)
МФА и ПЦР с материалом из типичных колоний
Высев для накопления чистой культуры
Слайд 34I I уровень исследования
идентификация
Оценка характера роста чистой культуры
Бактериоскопия
Определение подвижности (рост
на полужидком агаре по следу укола)
Капсулообразование (слизистый рост на сывороточных
средах, бактериоскопия)
Чувствительность к бактериофагам
Гемолиз эритроцитов барана (рост на кровяном агаре)
Чувствительность к пенициллину («жемчужное ожерелье», диско-диффузионный метод)
Слайд 35I I I уровень исследования
Дополнительные тесты
Чувствительность к антибиотикам
Протеолитические свойства:
Желатин
Казеин
Альбумин
Гемоглобин
Лецитиназная активность
Рост на минимальной среде
Оценка вирулентности на среде с противосибиреязвенным иммуноглобулином
(слизистые колонии, капсула в мазке, преципитация вокруг колоний)
Слайд 36Биологический метод
Животные - белые беспородные мыши,
морские свинки,
золотистые хомячки.
Инфицирование - внутренняя поверхность бедра
Гибель - чаще через 1 - 3 сут.
Студенистый геморрагический отек подкожной клетчатки на месте введения материала, гиперемия внутренних органов, увеличение селезенки, несвернувшаяся кровь.
Из тканей и органов - мазки-отпечатки,
посевы.
Слайд 37Молекулярно-генетические методы исследования
ПЦР
с пробами из нативного материала
с материалом из подозрительных
колоний;
с материалом от биопробных животных
с пробами из объектов внешней среды,
продуктов
Слайд 38Выявление сибиреязвенного антигена
МФА, р Асколи
Реакция термокольцепреципитации Асколи
Слайд 39Серологический метод
МФА (непрямой), РНГА
Специфические антитела с 5-х сут. после начала
болезни,
титр нарастает до 21 и более суток.
Увеличение титра
в парных сывороток с интервалом 5 - 7 дней.
В МФА: диагностические титры 1:16 - 1:32 или
4-кратное нарастание при повторном исследовании.
Слайд 40Аллергический метод
Антраксин (anthraxinum) - гидролизат вегетативных форм сибиреязвенных бацилл.
Вводят 0,1 мл
строго внутрикожно.
Результат положительный: через 24 - 48 ч участок
гиперемии с инфильтрацией не менее 16-25 мм в диаметре.
Реакция сомнительная - до 15 мм,
требует повторения через 5-7 дней.
Слайд 41Протокол. Лабораторная диагностика сибирской язвы
Слайд 42Вакцина сибиреязвенная живая сухая для подкожного и скарификационного применения
Вакцина -
живые споры вакцинного сибиреязвенного штамма СТИ, лиофилизированные.
Схема вакцинации:
двукратная
0 день – 20 день или 30 день.
Ревакцинация ежегодно однократно.