Метод прямого ИФА

лабораторный иммунологический метод выявления антигенов и антител, основанный на определении

комплекса «антиген-антитело» за счет введения в один из компонентов реакции ферментативной метки с последующей ее детекцией с помощью соответствующего субстрата, изменяющего свою окраску. Основой проведения любого варианта ИФА служит определение продуктов ферментативных реакций при исследовании тестируемых образцов в сравнении с негативными и позитивными контролями.

определение содержания лекарственных соединений в тканях, вирусные заболевания растений, определение

антибиотиков, витаминов и других биологически активных соединений при отборе активных штаммов-продуцентов в промышленной биотехнологии, контроль за качеством медицинских препаратов из донорской крови на отсутствие вирусов-возбудителей СПИДа и гепатита В — это лишь небольшой перечень практического применения ИФА.

антитела, а меченый ферментом и немеченый антиген конкурируют за связь с иммобилизованным

антителом.
Преимуществом прямой схемы является небольшое число стадий, что позволяет легко автоматизировать анализ. К недостаткам схемы относятся сложность методов синтеза ферментных конъюгатов, а также возможное влияние компонентов образца на активность фермента.

(исследуемый материал). АГ существенно различаются по способности адсорбироваться на разных

видах пластика в зависимости от того, к какому классу веществ они принадлежат. Часто в прямом ИФА антиген, иммобилизованный на твердой фазе, это клетки и другие корпускулярные антигены.
Контроль. В качестве контроля используют лунки с адсорбированным положительным контрольным образцом, в котором обязательно содержится искомый антиген, и отрицательным контрольным образцом заведомо не содержащим исследуемого антигена. При наличии очищенного стандартного антигена реакцию проводят в нескольких разведениях, так чтобы можно было построить калибровочную кривую.

помощью БСА казеина и др. (для предотвращения неспецифической сорбции конъюгата

на твердой фазе).

инкубируют. Связывание конъюгата с твердой фазой будет происходить лишь в

случае комплементарности обоих компонентов системы. После инкубации с коньюгатом лунки отмывают, удаляя, таким образом, не связавшуюся часть конъюгата.

и инкубируют. По достижении оптимального уровня окрашивания в лунках с

положительным контролем, ферментативную реакцию останавливают.

точного учета результатов интенсивность окрашивания оценивают на ИФА-ридере с соответствующим

светофильтром. По результатам проведенного анализа строят график зависимости оптической плотности от концентрации