Микобактериозы

вирусологии



МИКРОБИОЛОГИЯ МИКОБАКТЕРИОЗОВ

д.м.н., проф. Шаркова В. А.

известные как микобактериозы

Заболевания регистрируют у различных теплокровных и холоднокровных. Наиболее

характерны поражения легких, кожи и лимфатических узлов

Mummy at British MuseumTubercular decay has been found in the spines of Egyptian

суставов, кожи, мочеполовых и других органов

общества с сообщением об этиологии туберкулеза
Роберт Кох- лауреат Нобелевской премии

1905г. за открытия возбудителей сибирской язвы и туберкулеза

struggle with the tuberculosis: Majority of supposed cases of tuberculosis

in 2007 occurred in Asia (55%) and Africa (31%) with a small share of cases in Regions of Eastern Mediterranean ( 6%), European region (5%) and Regions of countries of America ( 3%).

Index of morbidity rate of tuberculosis, 2007
(per 100 thousand of population-per one hundred thousand of population)

struggle with the tuberculosis: Majority of supposed cases of tuberculosis

in 2007 occurred in Asia (55%) and Africa (31%) with a small share of cases in Regions of Eastern Mediterranean ( 6%), European region (5%) and Regions of countries of America ( 3%).

Index of morbidity rate of tuberculosis, 2007
(per 100 thousand of population-per one hundred thousand of population)

штаммов микобактерий туберкулеза, циркулирующих на территории Приморского края, и выявление

корреляции между генотипом, тяжестью заболевания и лекарственной устойчивостью

Рис.1. Оценка ВОЗ заболеваемости туберкулезом в странах мира.

и Российской Федерации за период с 2000-2013 гг.

в РФ, 2010. Аналитический обзор статистических показателей, используемых в РФ.-М..-2011

– 280с.

РФ, 2010. Аналитический обзор статистических показателей, используемых в РФ.-М..-2011 –

280с.

паразитических и сапрофитных видов)

к питательным средам.

Между собой различаются по отношению к питательным средам,

скорости роста, по способности образовывать пигмент, каталазной и пироксидазной активности

Морфология
тонкие полиморфные палочки

(прямые, изогнутые, колбовидные)
спирто-, щелоче-, кислотоустойчивы (обусловлено высоким содержанием липидов, миколовой кислоты в клеточной стенке)
- Грам (+)
- плохо воспринимают
анилиновые красители
окрашиваются по
Циль-Нильсену в красный
цвет

Морфология
способны образовывать L-формы

неподвижны
не имеют спор
не имеют капсул (есть микрокапсула)

Mycobacterium tuberculosis in sputum

расположены в цитоплазме

Mycobacterium tuberculosis

Культуральные свойства

- аэробы (способны

расти в факультативно-анаэробных условиях – 5-10% СО2)
37-380 С
РН 5,8-7,0

требовательны к питательным средам:

белки
глицерин
факторы роста: биотин, никотиновая кислота, рибофлавин
углерод
хлор
сера
фосфор
азот
ионы Mg2+, K+, Na+, Fe2+

Питательные среды
а) яичные среды

Левенштейна-Йенсена
Петраньяни
Дорсе
Финна II
б) синтетические среды
Сотона
в) глицериновый бульон, глицериновый агар, глицериновый картофель

образуют морщинистые колонии желтовато-кремового цвета с чуть приподнятым центром и

изрезанными краями. Зрелые колонии напоминают цветную капусту, крошковатые, плохо смачиваются водой и имеют приятный запах.
Культуры плохо снимаются со среды и при прокаливании трещат

в виде пленки, грубой, ломкой, морщинистой, бульон прозрачен

Протеолитический фермент в кислой и щелочной среде расщепляет белок
сахаролитические

ферменты расщепляют углеводы
образует уреазу


образует ниациновую к-ту (ниацин)

выработку АТ (агглютининов, преципитинов, комплементсвязывающих, др.)
диагностическое значение низкое (малая

концентрация, низкая специфичность)

жирные к-ты (масляная, пальмитиновая, туберкулостеариновая, олеиновая)- способствуют творожистому перерождению, распаду

клеточных элементов, вызывают блокаду ферментов (липазы, протеазы)
липиды – повреждающее д-е (сульфатиды – серосодержащие липиды – снижают активность фагоцитов, при введении свинкам фосфатидов – специфические гранулемы в печени, л/х, л/узлах)

ф-цию дыхания, фосфрилирования, способствует склеиванию МКО и росту в виде

кос и тяжей, фагоцитоз незавершенен, тормозит миграцию полиморфно-ядерных фагоцитов – слаб воспалит. ответ)
воск Д (гранулематозные изменения в л/узлах, легких), мураминдипептид, тригалозодимиколат, фтионовые к-ты

в 1890г. Р. Кохом
Полноценный АГ, содержит протеины, липиды, фосфатиды,

полисахариды
старый – культуральная жидкость, полученная при росте культуры в глицериновом бульоне и выпаренная при 70град до 1/10 своего первоначального объема
Новый – РРД- очищенный протеиновый дериват
не оказывает токсического д-я на здоровый о-зм
д-е проявляется в инфицированном о-зме
вызывает сенсибилизацию о-зма (св-ва аллергена)
р. Пирке, р. Манту – аллергические пробы (из бычьего типа микобактерий)

из неспороносных форм (липиды)
100 град – 5 мин.
УФЛ

– неск. часов
в высушенной мокроте – до 10 мес.
при низких температурах – длительно сохраняются
обычные дезинфектанты малоэффективны (5% р-р фенола- 5-6 час., 5% карболовая к-та – ч/з сутки)
наиболее чувствительны к хлорамину и хлорной извести
вырабатывает устойчивость к а/б средствам

больной человек
реже животные
M. bovis – человек сало чувствителен,

дети могут инфицироваться ч/з молоко больных животных
M. avium – болеют птицы: куры, голуби, фазаны; чел-к - редко

аэрогенный
алиментарный
трансплацентарный
контактный (ч/з кожу, слизистые – редко)

не всегда вызывает развитие патологического процесса

Особую роль играют неблагоприятные условия

жизни, сопровождающиеся нарушениями иммунитета:
снижение уровня жизни
дисбаланс в питании
стрессы
хронические заболевания
возрастной фактор

транспортируют их в регионарные лимфатические узлы

Фагоцитоз незавершенный (д-е липидов), в-ль

переживает в цитоплазме макрофагов

Воспалительный процесс невыражен – торможение миграции полиморфноядерных фагоцитов корд-фактором

По ходу регионарных лимфатических путей и узлов формируется первичный комплекс, представленный в виде гранулем (бугорков). Образование гранулем представляет собой клеточную р-цию ГЗТ (туберкулин, молочная к-та, низкое рН, СО2)

фибробласты)

В центре бугорка – участок творожистого некроза (казеоза)+ МКО

В гранулемах

размножение МКО замедляется или прекращается

При аэрогенном заражении первичный инфекционный очаг развивается в л/х (очаг Гона), при алиментарном – в мезентериальных л/узлах

процесс развивается доброкачественно: первичный очаг рассасывается, зарубцовываются казеозные очаги (пропитываются

солями Са с образованием соединительнотканной капсулы), в-ль остается жизнеспособным, но не выходит за пределы бугорка

В л/узлах, тканях и органах первичного инфекционного очага бактерии сохраняются много лет

80% - инфицированы и клинически здоровы

может активизироваться при низкой сопротивляемости орг-зма (под влиянием факторов

- инфекц. заболеваний
- психических
- физических травм
- неблагоприятных условиях труда и быта)
и вызвать генерализацию процесса

: бугорок подвергается некрозу, бактерии высвобождаются, в процесс вовлекают новые участки, образуются каверны – обострение, открытый процесс

которых активно отходят некротические творожистые массы, содержащие МКО

клинически реактивный

ТБ проявляется кашлем, часто с кровохарканьем, снижением массы тела, обильным ночным потоотделением, хроническим субфебрилитетом

- от нескольких недель до нескольких лет

туберкулез желудка и кишечника, почек, мозговых оболочек, костей и других

органов

Обусловлен комплексом защитных факторов: гуморальных, клеточных, резистентностью органов и тканей

Считается, что АТ к МКО – свидетели иммунитета и не оказывают ингибирующего д-я на в-ль

функции Т-лм процесс быстротечен и тяжел

Т-лм, макрофагов, др. клеток, способствующих ограничению размножения МКО, фиксации его

в очагах


Имеет значение не только сохранение живых бактерий, поддерживающих повышенную сопротивляемость к суперинфекции, но и
«иммунологическая память»

диагностика и изоляция больных
профилактическое обследование населения
при положительной кожной

пробе и отсутствии признаков активного процесса – профилактическое лечение
специфическая профилактика

однократно в/к в наружную поверхность левого плеча
ревакцинация – ч/з

7-12 лет, затем ч/з каждые 5-6 лет

Поствакцинальный иммунитет развивается ч/з 3-4 недели и сохраняется до 15 лет

о-зма к д-ю МКО и продуктов их размножения
стимулирует о-зм

к фиксированию и обезвреживанию в-ля
повышает биохимическую активность тканей
вызывает усиленную выработку антибактериальных веществ

противотуберкулезным препаратам (определения)

монорезистентность

– доказывается in vitro, устойчивость к одному из противотуберкулезных препаратов основного ряда

полирезистентность - доказывается in vitro, устойчивость к двум и более противотуберкулезным препаратам, за исключением устойчивости к сочетанию изониазида и рифампицина

in vitro, устойчивость по меньшей мере к изониазиду и рифампицину

- первичная лекарственная устойчивость (ЛУ)-
устойчивость, обнаруженная у микобактерий , выделенных от пациентов, не получавших ранее противотуберкулезных препаратов
- вторичная ЛУ - устойчивость, обнаруженная у микобактерий , выделенных от пациентов, получавших противотуберкулезные препараты более месяца

struggle with the tuberculosis: Majority of supposed cases of tuberculosis

in 2007 occurred in Asia (55%) and Africa (31%) with a small share of cases in Regions of Eastern Mediterranean ( 6%), European region (5%) and Regions of countries of America ( 3%).

Index of morbidity rate of tuberculosis, 2007
(per 100 thousand of population-per one hundred thousand of population)

struggle with the tuberculosis: Majority of supposed cases of tuberculosis

in 2007 occurred in Asia (55%) and Africa (31%) with a small share of cases in Regions of Eastern Mediterranean ( 6%), European region (5%) and Regions of countries of America ( 3%).

Заболеваемость туберкулезом с ШЛУ, 2013

продолжается не менее года

MGIT
BACTEC MGIT 960

gel. Based on the principles of fluorescent detection.
Data are

not represented

Molecular-genetic method PCR – RT (real times)

микобактерии туберкулезного комплекса (детекция специфического маркера IS6110), устойчивость к рифампицину

(выявление мутаций в rpoB гене), изониазиду (выявление мутаций в katG, inhA, ahpC генах)

протеомный масс-спектрометрический анализ

контакте со специфическими антигенами МБТ.
Наличие эффекторных Т-лимфоцитов свидетельствует об

инфицировании МБТ.
CLINISPOT-TB обладает высокой чувствительностью, позволяя выявлять единичные Т-лимфоциты и таким образом диагностировать латентную инфекцию, а также инфекцию у лиц со сниженным иммунным ответом. 

и лечению туберкулёза органов дыхания с множественной и широкой лекарственной

устойчивостью возбудителя
второе издание (2014 г.) федеральных клинических рекомендаций по диагностике и лечению туберкулеза органов дыхания с МЛУ и ШЛУ, составленных коллективом авторов Российского общества фтизиатров (РОФ, сайтroftb.ru) 

Благодарю за внимание

обычно является вторичным и возникает при наличии туберкулезного процесса в

легких, лимфатических узлах или костях.
Микобактерии туберкулеза попадают на слизистую оболочку рта чаще всего гематогенным или лимфогенным путем из первичного туберкулезного очага.

для размножения микобактерии туберкулеза. Как правило, они быстро гибнут на

ее поверхности.

Однако при наличии повреждений слизистой оболочки микобактерии могут проникнуть через нее и вызвать первичную туберкулезную язву. Первичный туберкулез в полости рта встречается крайне редко, в основном у детей

слизистой оболочке рта или красной кайме губ вследствие проникновения микобактерии

через поврежденную слизистую оболочку.

из туберкулезных поражений слизистой оболочки рта и красной каймы губ.

поражение слизистой оболочки рта, как правило, сочетается с поражением кожи
Излюбленная локализация - кожа лица (у 75 % больных) Часто поражается красная кайма верхней губы в результате распространения процесса с кожи носа. В последующем в процесс часто вовлекается и слизистая оболочка рта.
Избирательное поражение только слизистой оболочки рта встречается редко.
типичная локализация - слизистая оболочка верхней губы, альвеолярного отростка верхней челюсти в области передних зубов, твердого и мягкого неба, деснах

плоское, безболезненное образование величиной с булавочную головку (диаметр 1-3 мм),

мягкой консистенции, красного или желтовато-красного цвета.
Бугорки склонны к периферическому росту и слиянию с соседними элементами, что приводит к образованию бляшек, в которых различаются отдельные бугорки.
Центр бляшки разрушается, превращаясь в язву с мягкими, изъеденными, но не подрытыми краями. Язва поверхностная, малоболезненная, дно ее покрыто желтоватым или желтовато-красным налетом, при наличии разрастающихся грануляций напоминает малину

Возникает у больных, страдающих тяжелыми формами туберкулеза легких или гортани,

сопровождающихся выделением с мокротой большого количества микобактерии туберкулеза.
Вследствие снижения резистентности организма у таких больных возбудитель туберкулеза легко внедряется в слизистую оболочку и беспрепятственно размножается, вызывая язвенные процессы.
Поражаются главным образом постоянно травмируемые участки слизистой оболочки щек, по линии смыкания зубов, спинка и боковые поверхности языка, мягкое небо, дно полости рта

крайне редко, в основном у детей.
Характеризуется образованием узлов в

глубоких слоях слизистой оболочки. Узлы спаиваются со слизистой оболочкой рта или кожей, цвет которых становится цианотичным. Постепенно узлы размягчаются и вскрываются, через образовавшиеся свищевые отверстия выделяется гной с примесью крови и частицами некротизированных тканей. На месте вскрывшихся узлов формируются язвы, слабоболезненные, неправильной формы, с изъеденными подрытыми краями. Дно язв покрыто вялыми грануляциями и сероватожелтым налетом. После заживления язв остаются втянутые, обезображивающие рубцы

Mycobacterium leprae from a skin lesion

для детекции микобактерии туберкулеза и определения чувствительности к лекарственным препаратам.
В

основу технологии детекции заложено использование пробирки BD BBL™ MGIT ™ с модифицированной средой Миддлбрук и встроенным флуоресцентным индикатором, который инактивирован высокими концентрациями кислорода.
В процессе роста размножающаяся микробная популяция поглощает кислород, тем самым активируя флуоресцентный индикатор, который начинает светиться при ультрафиолетовом излучении.
В каждой секции установлены две УФ-лампы (диапазон 280-315 нм, 220 Вольт, 16 Вт)
Положительная флуоресценция в пробирках MGIT ™ является результатом роста культуры микобактерий.
АНАЛИЗАТОР BACTEC MGIT 960
Анализатор состоит из трёх секций, каждая из которых вмещает 320 пробирок MGIT ™ (максимальная одновременная загрузка прибора – 960 пробирок MGIT ™)
Пробирки системы MGIT ™ инкубируются внутри прибора и периодически (1 раз в час) автоматически трестируются в УФ-лучах, что гарантирует достоверность результатов)
Имеется встроенный термостат
Имеет встроенный компьютер с жидко кристаллическим дисплеем, клавиатуру, с помощью которой в компьютер вводятся основные данные об исследуемых образцах и пациентах. Встроенный считыватель штрих-кодов считывает информацию с этикетки пробирки. Дисплей и индикаторы на каждой из трёх секций показывают наличие положительных и отрицательных культур, а также ошибочно введенные пробирки. Световой и акустический сигнал указывают на выявленные положительные культуры. Максимальный протокол исследования 42 дня.
ВОЗМОЖНОСТИ АНАЛИЗАТОРА BACTEC™ MGIT™ 960
одновременное проведение 960 анализов (8000 в год)
детекция микобактерии за 3-15 дней, определение чувствительности к антибактериальным препаратам - 7-9 дней.
высеваемость микобактерии туберкулеза - до 94%
определение чувствительности к препаратам первого ряда (стрептомицину, изониазиду, рифампицину, этамбутолу) в высоких и критических концентрациях и пиразина
специфичность метода составляет 100%, чувствительность - 92-98% (в зависимости от

методику, позволила автоматически регистрировать рост в каждой из 960 пробирок.

При значительном количестве возбудителя туберкулеза в мокроте (положительной бактериоскопии) получение результатов теста на лекарственную чувствительность возможно в течение 2 - 3 недель.
Рост на жидкой питательной среде неспецифичен, возможен рост нетуберкулезных микобактерий, грибов и других МКО, устойчивых к действию щелочи, а/б и п/грибковых препаратов
Методика подтверждения специфичности роста на жидких средах предусматривает посев выросшей в пробирке культуры на КА для идентификации микробной контаминации и окраску мазков по Цилю-Нильсену для обнаружения кислотоустойчивых палочек и корд-фактора.
Система BACTEC MGIT 960 расценивает пробирку как положительную, если количество живых микроорганизмов в ней достигло 100 000 на 1 мл среды ------------------------