Министерство образования и науки Украины Харьковский национальный университет

Каразина биологический факультет кафедра биохимии

Влияние восстановленного глутатиона и ингибитора каталазы на пероксидную

резистентность и скорость лизиса эритроцитов при действии хлорида железа


Дипломная работа магистра
Выполнила: Гурьева Анна Владимировна
Научный руководитель: к.б.н., доцент Баранник Т.В.

Харьков
2010

эритроцитов и кинетики гемолиза после обработки эритроцитов хлоридом железа (III),

азидом натрия, глутатионом, а также при совместных обработках эритроцитов азидом натрия и железом, глутатионом и железом

железа (III), азидом натрия, глутатионом, а также при совместных обработках

эритроцитов азидом натрия и железом, глутатионом и железом.
изучение пероксидной резистентности эритроцитов после предварительной их обработки вышеуказанными агентам.
Изучение влияния хлорида железа (III) на скорость гемолиза эритроцитов предварительно инкубированных с азидом натрия, глутатионом, а также при совместных обработках эритроцитов азидом натрия и железом, глутатионом и железом.

кровь (мужская) группы А(II), Rh+, консервант – глюгицир).

перекиси водорода и выражали в мкмоль/мг белка за минуту. Белок

определяли по методу Лоури
Степень пероксидного гемолиза определяли после предварительной инкубации эритроцитов с азидом натрия в присутствии пероксида водорода спектро­фотометрически по поглощению гемоглобина при 540 нм
Кинетику гемолиза при действии хлорида железа определяли по изменению оптической плотности при 670 нм (за счет снижения светорассеяния за счет лизиса клеток). Скорость гемолиза рассчитывали как величину обратную времени лизиса 50%

железа (III) и глутатиона.
(*- p

эритроцитам, #- p<0,01 по отношению к инкубации без Н2О2)

хлоридом железа) при инкубации в присутствии 0,5% FeCl3 отмечается в

промежутке на 3-й минуте инкубации.

на кинетику гемолиза эритроцитов 0,5% хлоридом железа (III).
(*-p

отношению к инкубации без Fecl3)

)

предварительной инкубации в присутствии азида натрия и хлорида железа (0,05%)

на кинетику гемолиза эритроцитов 0,5% хлоридом железа (III)

предварительной инкубации в присутствии глутатиона и хлорида железа (0,05%) на

кинетику гемолиза эритроцитов 0,5% хлоридом железа (III)

в том числе после их последующей инкубации с хлоридом железа

установлено снижение каталазной активности на 30% и на 20%, соответственно. При остальных изученных воздействиях каталазная активность не отличалась от контрольных значений.
Предварительная инкубация эритроцитов в присутствии ингибитора каталазы азида натрия вызывала повышение процента лизиса эритроцитов, обработанных азидом натрия в 2,5-3 раза относительно интактных эритроцитов – вне зависимости от присутствия перекиси водорода. Дальнейшее повышение степени лизиса (в 1,8 раза) при добавлении в среду инкубации перекиси водовода отмечено только для эритроцитов, предварительно инкубированных с восстановленным глутатионом.

Выводы

человека за 5 мин инкубации при 25оС. Кинетическая кривая выявила

S-образный характер с максимальным лизисом эритроцитов в области от 1,5 до 3,5 минут инкубации вне зависимости от предварительной обработки эритроцитов.
Предварительная обработка эритроцитов хлоридом железа в негемолитической концентрации (0,05%) не приводила к изменению скорости лизиса хлоридом железа по сравнению с контрольными эритроцитами, в отличие от азида натрия, обработка которым увеличивала скорость гемолиза в присутствии 0,5% FeCl3.
Последовательная предварительная обработка эритроцитов восстановленным глутатионом и далее FeCl3 вызывала снижение скорости лизиса эритроцитов хлоридом железа