Раздел 2. Бактериология

Тема 2.2 Микроскопические

методы изучения бактерий

микроскопов и правила работы с ними.
3. Микроскопия в иммерсии,

описание микропрепарата.
4. Понятие о морфологических и тинкториальных свойствах бактерий.
5. Классификация бактерий по Грамму.
6. Простые и сложные методы окрашивания.
7. Принципы приготовления мазков и способы их фиксации.
8. Правила техники безопасности при проведении микроскопических исследований

результаты микробиологических исследований позволяют точно установить факт наличия возбудителя в

исследуемом материале.



Идентификацию чистых культур
проводят с учётом морфологических,
тинкториальных, культуральных,
биохимических, токсигенных и
антигенных свойств микроорганизма.

приготовление микроскопических препаратов из исследуемого материала и их изучение с

применением различных видов микроскопической техники (световая, темно-полевая, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная и др.).

В бактериологии этот метод называют бактериоскопический,
а в вирусологии – вирусоскопическим.

подвижность, окраску и расположение в мазке микроорганизмов

микроорганизмов
в темном поле (темнопольная
микроскопия) основано на
явлениях рассеяния

света при
сильном боковом освещении
взвешенных в жидкости частиц

света обратно пропорциональна показателю преломления. Фаза луча, проходящего через объект

с более высоким показателем преломления, чем у окружающей среды, будет запаздывать по сравнению с фазой того луча, который проходит только через среду.

В фазово-контрастном микроскопе специальный конденсор и объектив регулируют изменения фазы световых волн и превращают разность фаз в разность интенсивностей света, благодаря чему детали строения объекта становятся доступными для глаза.

качественного и количественного характера:
*цветным свечением;
*высокой степенью контрастности светящихся объектов на

темном фоне;
*возможностью исследования прозрачных и непрозрачных живых объектов, а также различных жизненных процессов в динамике их развития;
*возможностью обнаружения и установления локализации отдельных микробов и вирусов.

флуоресцирующих антител.
Метод люминесцентной микроскопии применяют для выявления возбудителя туберкулеза, для

диагностики дифтерии, гонореи, возвратного тифа.

момент облучения возбуждающим светом и прекращающееся сразу после его окончания. Фосфоресценция

— свечение, продолжающееся длительное время и по окончании процесса возбуждения.

которого пространство между объективом (или покровным стеклом) и наружной поверхностью

фронтальной линзы заполнено прозрачной (иммерсионной) жидкостью
Иммерсионные системы позволяют исследовать объекты, находящиеся на разной глубине в иммерсионной жидкости, путём погружения в неё объектива. Например, с объективом, рассчитанным на водную иммерсию, можно наблюдать микроорганизмы в воде.

структура.
Тинкториальные - отношение к различным красителям (характер окрашивания), прежде

всего к окраске по Граму.
По этому признаку все микроорганизмы делят на грамположительные и грамотрицательные.

Морфологические свойства и отношение к окраску по Граму позволяют как правило отнести изучаемый микроорганизм к крупным таксонам- семейству, роду.

1884 г. заключается в обработке мазка клеток  красителями 

Окраска по Грамму.
Толстый слой пептидогликана грамположительных бактерий при
окраске гиацинвиолетом связывает много красителя – препарат
окрашивается в синий-фиолетовый цвет.

Тонкий слой – грамотрицательных бактерий при
окраске гиацинвиолетом связывает мало красителя – препарат
Остается бесцветным. Дальнейшая обработка фуксином
окрашивает грамотрицательные микроорганизмы в красный цвет

Грамположительные (Гр+) бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет.
Грамотрицательные (Гр-) бактерии окрашиваются в красный

одним красителем;
сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и

др.) включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение.
Отношение микроорганиз­мов к красителям расценивают как тинкториальные свойства