Санкт-Петербургский государственный химико-фармацевтический

НОЦ МКТ, ассистент НОЦ ТРБ, аспирант «ИЭМ»
3 апреля 2020 г.
jkaypopey@gmail.com
Андреева

из более простых органических соединений – аминокислот.
Общая химическая формула аминокислот.
Аминокислоты

Радикалы аминокислот:
обеспечивают уникальность I структуры;
участвуют в формировании III структуры;
влияют на его растворимость;
формируют активный центр.

из более простых органических соединений – аминокислот.
Общая химическая формула аминокислот.
Аминокислоты

Радикалы аминокислот:
обеспечивают уникальность I структуры;
участвуют в формировании III структуры;
влияют на его растворимость;
формируют активный центр.

Радикал

из более простых органических соединений – аминокислот.
Общая химическая формула аминокислот.
Аминокислоты

Радикалы аминокислот:
обеспечивают уникальность I структуры;
участвуют в формировании III структуры;
влияют на его растворимость;
формируют активный центр.

Радикал

Триптофан: структурная формула

из более простых органических соединений – аминокислот.
Общая химическая формула аминокислот.
Аминокислоты

Радикалы аминокислот:
обеспечивают уникальность I структуры;
участвуют в формировании III структуры;
влияют на его растворимость;
формируют активный центр.

для каждой аминокислоты.

между карбоксильной группой одной аминокислоты и аминогруппой другой аминокислоты.
Пептидная связь

Реакция образования пептидной связи.

Пептидные связи соединяют аминокислоты в пептиды.

между карбоксильной группой одной аминокислоты и аминогруппой другой аминокислоты.
Пептидная связь

Реакция образования пептидной связи.

Пептидные связи соединяют аминокислоты в пептиды.

между карбоксильной группой одной аминокислоты и аминогруппой другой аминокислоты.
Пептидная связь

Реакция образования пептидной связи.

Пептидные связи соединяют аминокислоты в пептиды.

входят серин, аргинин, аланин, глицин, соединенные в этом порядке.
Укажите

между положительно заряженным водородом и отрицательно заряженным кислородом или азотом.

Пептидный
остов

-спираль

-спираль

петля

β-слой

N-конец

С-конец

Разные участки одного белка могут быть представлены различными типами вторичной структуры

при формировании третичной структуры белка.
1 – ионная связь
2 – водородная

Глобулярный белок

Фибриллярный белок

биологического материала (клеточных культур, тканей, органов растений и животных).
Очистка –

Примеси – это ненужные вещества, например, посторонние белки и пептиды, нуклеиновые кислоты, липиды, соли и многое др.

выделение

очистка

анализ

варьируется в зависимости от:
био жидкости
органы и ткани
Клетки эу- и прокариот

органеллах
требуется разрушение клетки
требуется отделить клеточную биомассу от биологической жидкости (это

клеточных мембран (лизис клеток):
Необходимо, когда белок находится внутри клеточных органелл,

иные белки (фракционирование):
разрушенные
клетки в растворе
надосадочная жидкость
(растворимые белки цитоплазмы)
осадок (нерастворимые и

время

скорость

Центрифугирование – разделение веществ по их плотности под действием центробежной силы.

клетки (перевод их в растворенное состояние):
нейтрофилы
экстракт
1
2
3
Необходимо, если искомый белок прочно

Важно правильно подобрать экстрагент!

– их очистка от других белков.
липиды
нуклеиновые кислоты

белка
суммарный заряд молекулы белка
растворимость в воде
связывание с другими молекулами
устойчивость к

использовать методы, учитывающие какую-либо характерную особенность данного белка.
изоэлектрическое осаждение

при помощи мембраны, способной пропускать молекулы определенного размера, под действием

Снимок под микроскопом мембраны для ультрафильтрации.

при помощи мембраны, способной пропускать молекулы определенного размера, под действием

Vivaflow, Sartorius

и форме при помощи колонки, заполненной частицами набухшего геля
Позволяет разделять

Существенный недостаток метода – сильное разбавление пробы.

основанный на неспособности молекулы белка из-за своих размеров проходить через

Процесс достаточно продолжительный (как минимум, 24 часа), относительно трудоемкий, требует неоднократной замены буферного раствора.

скорости миграции молекул в толще геля, что обусловлено их молекулярной

Возможно разделение белковых молекул, отличных по одной аминокислоте.

Очень длительный процесс (3 суток), требующий дорогостоящего оборудования.

белков от низкомолекулярных примесей в большинстве случаев используют хроматографические методы.
Кусочки

на разнице в распределении веществ между подвижной (элюент) и неподвижной

Y

Y

Y

сорбент

элюент

- сильное сродство

- средней силы сродство

- слабое сродство

(гидрофобными) взаимодействиями.
Метод разделения и очистки белков, основанный на различиях в

Данный механизм разделения лежит в основе высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

заряду.
Принцип метода состоит в том, что неподвижная фаза обратимо

Вымывание (элюция) белков с колонки в градиенте pH или соли.

Сродство сорбента с белками обусловлено электростатическими (межиоными) взаимодействиями.

основанный на избирательном взаимодействии белков с лигандами, прикрепленными к твердому

разделить смесь белков на индивидуальные белки; укажите физико-химические свойства белков,