СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ

реакций антиген-антитело, определяемых в сыворотке крови и других жидкостях, а

также тканях организма
Реакция in vitro между антигеном и антителом состоит из специфической и неспецифической фазы
Специфическая фаза – это специфическое связывание активного центра антитела с детерминантой антигена
Неспецифическая фаза – проявляется видимыми физическими явлениями (образованием агглютината или преципитата). Эта фаза требует определенных условий (электролитов, рН среды)

= АГ-АТ. Эта фаза связана со специфичностью эпитопа и паратопа

(аффинность и авидность)
Аффинность – это сила специфического взаимодействия АГ-АТ. Обусловлена степенью пространственного соответствия эпитопа и паратопа
Авидность – это прочность связывания АГ-АТ. Определяется количеством паратопом у АТ

котором обнаруживается активность антител с помощью какой-либо серологической реакции

суспензией убитых нагреванием при 60º С в течение 1 ч

взвеси бактерий. Иммунизацию проводят с интервалами между инъекциями в 5-8 дней. Затем у животных стерильно берут кровь, получают сыворотку, определяют ее титр, добавляют консерванты и расфасовывают в ампулы.
Иммунные сыворотки бывают:
видовыми (неадсорбированными) – их получают иммунизацией кроликов целыми бактериальными клетками
адсорбированными и моновалентными – их получают в реакции адсорбции агглютининов по Кастеллани

антигенной структуры бактерий

При наличии у разных бактерий одинаковых (групповых) антигенов

они могут агглютинироваться одной и той же сывороткой, что затрудняет их идентификацию


Реакция адсорбции агглютининов по Кастеллани основана на способности близкородственных бактерий адсорбировать из иммунной сыворотки только групповые антитела. Полученные сыворотки называются адсорбированными или монорецепторными, так как содержат антитела только к типовым или даже одному определенному антителу

антигенов и антител в присутствии электролита
РА проявляется образованием хлопьев или

осадка
Различают развернутую, ориентировочную, непрямую реакцию гемагглютинации
РА используют для:
Определения антител в сыворотке крови больного (реакция Райта, Хеддельсона, Видаля)
Определения возбудителя, выделенного от больного (реакция Грубера)
Определение групп крови с использованием моноклональных антител против аллоантигенов эритроцитов

«решётки»
Комплекс АГ-АТ называется - агглютинат

как сыворотка, так и антиген, но чаще всего этот вариант

используют для идентификации микроорганизмов.
Для идентификации микроорганизма (м/о) на обезжиренное предметное стекло наносят раздельно каплю известной агглютинирующей сыворотки, например сальмонелёзной, и каплю физиологического раствора (контроль). Затем бактериологической петлей берут бактериальную массу изучаемой культуры из колонии в чашке Петри или с поверхности скошенного МПА в пробирке и суспендируют раздельно в иммунной сыворотке и физиологическом растворе до получения гомогенной взвеси. Результат учитывают через 2- 4 мин.
Учет результатов: в контрольной пробе изменения должны отсутствовать. При специфическом соответствии культуры бактерий иммунной сыворотке появляются хлопья агглютината (положительный результат), в случае отсутствия феномена агглютинации делают заключение о том, что исследуемая культура бактерий не соответствует иммунной сыворотке.

на примере роз-бенгал пробы, применяемой при серодиагностике бруцеллеза. На предметное

стекло наносят 0,3 мл исследуемой сыворотки крови животного и 0,03 мл бруцеллезного антигена (окрашенные розовым-бенгальским клетки бруцелл). Компоненты тщательно перемешивают покачиванием стекла и через 4 мин учитывают результат.
Учет результатов: при положительной реакции появляются розовые хлопья агглютината. Серологическую реакцию подобного типа относят к качественной, так как с ее помощью можно выявлять антитела к возбудителю в сыворотке крови животного, но невозможно оценить их количественное содержание.

раствор
Сыворотка диагностическая
Чистая культура возбудителя
Оборудование:
Пробирки
Пипетки
Штатив

реакции:
в пробирках производят разведение диагностической сыворотки, затем в каждую

пробирку вносят одинаковое количество АГ
Реакцию учитывают в крестах
Диагностический титр
1:12 800

-
диагностическая реакция агглютинации при брюшном тифе и других сальмонеллезах
В

качестве антигенов используют стандартные тифо-паратифозные диагностикумы
Соответственно АГ структуре возбудителя брюшного тифа в сыворкте больного могут присутствовать О-, Н-, Vi- агглютинины. Диагностическое значение имеют О-, Н-агглютинины
Для их обнаружения используют соответствующие диагностикумы (Н-диагностикум - культура, убитая формалином; О-диагностикум – культура, убитая спиртом или кипячением)
Результаты Н-агглютинации учитывают после 2-часового пребывания в термостате; О-агглютинация учитывается после 2-часового пребывания в термостате и 18-20 часов при комнатной температуре
О-антитела появляются первыми и исчезают быстро
Н-антитела сохраняются долго

наличии явно выраженного осадка (при встряхивании осадок разбивается на хлопья,

комочки, в крупинки)
+++ — те же явления, которые отмечаются для четырёх крестов, но жидкость слегка опалесцирует (недостаточно полное просветление)
++ — просветление жидкости выражено слабо. Имеется осадок, который при встряхивании разбивается на хлопья, комочки и крупинки
+ — отсутствие или весьма незначительное просветление при наличии слабо выраженного осадка или его следов. При встряхивании жидкости заметны комочки и крупинки
— отрицательная реакция агглютинации. Отсутствие просветления и осадка

антительный)
Антитело или антиген
Электролит

Диагностикум - эритроциты, на поверхности которых предварительно адсорбированы

антигены или антитела

антигены
Электролит

Диагностикум - эритроциты, на поверхности которых предварительно адсорбированы антигены или

антитела (реакция обратной непрямой гемагглютинации)

в которых предварительно приготовляются разведения исследуемой сыворотки и контрольных образцов
После

внесения эритроцитарного диагностикума и инкубации проводится учет результатов реакции
Положительными считают образцы, в которых происходит агглютинация эритроцитов, имеющая вид перевернутого “зонтика”
При отрицательной реакции — эритроциты оседают на дно лунки в виде кольца или диска

Для подтверждения специфичности полученных результатов реакция ставится как с “опытным” эритроцитарным диагностикумом (т. е. эритроциты, сенсибилизированные антигеном или антителами), так и с “контрольным” диагностикумом (т. е. эритроциты не сенсибилизированы антигеном или антителами). Наличие позитивной реакции с “контрольным” диагностическим препаратом свидетельствует о ложнопозитивной реакции.

с адсорбированными на них молекулами АГ/АТ агглютинируются соответствующими АТ/АГ

растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом.

Он образуется при смешивании антигенов (преципитиногенов) и антител (преципитинов) в эквивалентных количествах
Виды реакции преципитации:
Кольцепреципитации (термопреципитации)
Двойной иммунодифузии по Оухтерлони
Радиальной иммунодиффузии (реакция Манчини)
Иммуноэлектрофорез
Флоккуляции (по Рамону)
Реакция преципитации в геле (тест Элека)

(В.anthracis)

Петри со средой
Токсигенная культура C.diphtheriae (контроль «+»)
Нетоксигенная культура C.diphtheriae (контроль

«-»)
Исследуемая культура
Антитоксическая сыворотка (нанесена на фильтровальную бумагу)

постановки реакции растопленный агаровый гель тонким слоем выливают на стеклянную

пластинку
После затвердевания в нем вырезают лунки
В лунки геля раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые диффундируют навстречу друг другу
В месте встречи в эквивалентных соотношениях они образуют преципитат в виде белой полосы
В многокомпонентных системах между лунками с антигенами и антителами появляется несколько линий преципитата
у идентичных АГ линии преципитата сливаются
у неидентичных АГ - пересекаются.

(эритроциты барана (АГ), АТ к эритроцитам барана)
Комплемент

Особенности постановки:
Исследуемую сыворотку необходимо

прогреть при температуре 56°С 30 мин-декомплементировать
Определить титр комплемента

посев на чашки Петри
Реакция гемолиза
Компоненты реакции:
Эритроциты барана
АТ к эритроцитам барана
Комплемент

исследуемая сыворотка
Фагоциты (обычно нейтрофилы исследуемой крови)


Постановка реакции
Компоненты реакции смешивают, затем

инкубируют 30 мин температура 37°С
после чего вновь перемешивают и готовят мазки
Окрашивают по Романовскому-Гимзе
В мазках подсчитывают 25 нейтрофилов, учитывая в каждом из них количество захваченных микроорганизмов