Тақырыбы: ИФТ әдісі

Ақтолқын

2-027 топ
Тексерген: Әбуова Ғ.Т.






Қарағанды 2018

сапалық анықтау иммунологиялық зертханалық әдісі

Engvall және Perlmann Нидерланд ғалымдары - van Weemen және Schuur,

АҚШ ғалымы - Rubenstein

жасалады. Комплексті анықтау үшін ферментті белгімен (пероксидаза, сілтілі фофатаза, глюкозооксидаза,

ацетилхолинэстераза, каталаза және т.б.) байланысқан анти-антидене болып табылатын арнайы конъюгат (адам Ig қарсы қоян антиденелері немесе моноклондық антиденелер) қолданылады.

зерттелетін сары сумен бірге инкубацияланады. Спецификалық антиденелер болған жағдайда олар

байланысып, антиген-антидене комплексі түзіледі.
Одан кейін бұл комплекс конъюгатпен инкубацияланған кезде анти-антиденелер антиген-антидене комплекстерімен байланысады.
Ферменттік реакция (түрлі-түсті реакция) сутегі тотығы мен пероксидазды реакция процесінде тотығып, боялатын субстраттың қатысумен жүреді.
Боялу қарқыны анықталатын спецификалық антиденелердің санына байланысты болады.
Нәтижесі спектрофотометрмен немесе визуалды бағаланады.

өңделген
қоздырғыштар қолданылады
Рекомбинантты –
қоздырғыштардың гендік-
инженерлік
тәсілмен алынған антигендік
ақуыздары

қолданылады

Пептидтік –
ақуыздардың химиялық
жолмен синтезделген
фргаменттері
қолданылады

немесе қатты
фазалы ИФТ –
реакцияның бір компоненті
антиген немесе

антидене
арнайы қатты тасымалдағыштарда
– полистрироды планшет немесе
пробиркада орнатылады

Аралас ИФТ –
ақуыздардың химиялық
жолмен синтезделген
фрагменттері
қолданылады

жүйеде
антигеннің зерттелетін
байланысы және байланыс
орталықтары бар
спецификалық антиденелер

болады

Күрделі бәсекелес
(конкурентті) ИФТ –
Зерттелетін байланыспен
бірге оның антиденелердегі
спецификалық байланыс
орталықтарына бәсекелес
аналогы болады

сары су енгізіледі. Егер сары суда антигендерге қарсы антиденелер (3)

болса, инкубациялану кезінде антиген/антидене байланысы түзіледі.

екінші антиденелер (4) қосылады. Бұл антиденелерге белсенді фермент (Е) бекітілген.

Мұндай комплекстік байланысу конъюгат деп аталады. Инкубациялану кезінде ойықта сэндвич тәрізді құрылым түзіледі.

бұл субстратқа фермент (Е) әсер етіп, оны бояйды (6).

– зерттелуші сары су қосылады, егер онда антигендер болса, олар

антиденелермен байланысып, пробирканың қабырғасына бекітіледі;
в – белгілі антигенге қарсы ферментпен белгіленген антиденелерді енгізу, олар қабырғадағы иммундық комплекспен байлаынысады;
г – сутегі асқын тотығы мен хромогенді қосқанда оттегінің әсерімен сары түске боялады.

кезеңін анықтау
Аутоиммундық ауруларды диагностикалау
Аллергияны диагностикалау
Гормондарды анықтау
Онкомаркерлерді анықтау
Цитокиндерді анықтау

бірнеше спецификалық антиденелерді анықтаған (немесе IgM және IgG антиденелерін) жөн,

бұл біріншілік инфекцияны диагностикалау үшін қажет.
Аурудың динамикасын бағалау үшін антиденелердің санын анықтау қажет.
Белсенді және жасырын инфекцияны айыру үшін IgG авидтілігі деңгейін сараптау.
Бұрын жұқтырылған инфекцияның нәтижесінде антиденелер төмендеген иммунитетте, ақуызды ашығу кезінде анықталмауы мүмкін.

штаты) ғалымдары және STL Analyzers LLS компаниясының қызметкерлері алғашқы сараптама

анализаторы ашқан мен мәліметтерді өңдеу және есте саұтау үшін бағдарламаламен қамтамасыз еткен.

ELISPOT әдісімен Т- және В-жасушаларды сараптау үшін қолданылады. ELISА әдісінен айырмашылығы гидрофобты мембрананың бетіндегі антиденелер жасушаның белгілі өнімін (цитокиндер) байланыстырады.

температурада инкубациялау
Планшетті екі рет фосфатты-тұзды буфермен шаю
Ойықтарға 100 мкл-ден 0,5%

бұқа сары су альбумині (БСА) енгізіледі
Планшетті 1 сағат бойы 37°С температурада инкубациялау
Планшетті екі рет фосфатты-тұзды буфермен шаю
Ойықтарға лимфоциттердің CD2, CD3, CD4, CD8 маркерлеріне сәйкес 100 мкл-ден моноклондық антиденелер енгізіледі
Планшетті 1 сағат бойы 37°С температурада инкубациялау

IgG конъюгаттары (пероксидазамен белгіленген) енгізіледі
Планшетті 1 сағат бойы 37°С температурада

инкубациялау
Планшетті екі рет фосфатты-тұзды буфермен шаю
Ойықтарға лимфоциттердің 100 мкл-ден субстрат (цитратты буфердағы 0,2% сутегі пероксиді ерітіндісі мен ортофенилендиаминдигидрохлорид) енгізіледі
Планшетті 10 минут 20°С қараңғы жерде инкубациялау
Ойықтарға50 мкл-ден 50% күкірт қышқылы (стопреагент) енгізіледі
Ойықтардың құрамының рптикалық тығыздығын вертикалді фотометрде өлшеу

– 95%
Зерттелуші материалдың ең аз мөлшерін қолдануға болады
Реакцияны жүргізу өте

қарапайым, оңай
Реакцияның барлық кезеңдерін автоматизациялау мүмкіншілігі
Экологиялық таза және медперсонал үшін қауіпсіз
Диагностикалық жинақтар бағасы арзан

Кожанова С.В Алматы 2008