ТРАНСКРИПЦИЯ

размеры промотора?

Cell (© Garland Science 2008)

анализ мутантов и выяснение эпистатических взаимодействий
2. Молекулярно-биологический – исследование структуры

генов, выделение регуляторных белков и поиск их мишеней, анализ белок-белковых и белок-ДНК взаимодействий
3. Анализ транскриптомов
4. Разработка принципов интеграции различных регуляторных цепей

сродством к глюкозе) и лактатдегидрогеназы

метаболический распад молекул питательных веществ, например, глюкозы
Дрожжи S. cerevisiae факультативные

анаэробы

переноса сигнала о концентрации глюкозы в среде. Необходим для репрессии

транскрипции генов HXT ,белком репрессором Rgt1p;
Взаимодействует с Rgt1p и сенсорами глюкозы Snf3p и Rgt2p;
Фосфорилирование Mth1p киназой Yck1p запускает его деградацию;
MTH1 имеет паралог STD1,который возник в результате полногеномной дупликации
Std1 – белок взаимодействует с Snf1p, сенсорами глюкозы Snf3p и Rgt2p; регулятор транскрипционного фактора Rgt1p;

и репрессором. Rgt1 совместно с Mth1 и Std1 репрессирует гены

HXT, кодирующие транспортеры глюкозы. Освобождение промоторов от Rgt1 некоторых генов HXT требует активности cAMP-зависимой пртеинкиназы (PKA)

S , Johnston M Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1999;63:554-569
Grr1 –

убиквитин-лигаза

домена димеризации и связывается с ДНК в виде мономера
Бифункциональный ТФ

– если нет глюкозы – репрессор, много глюкозы – активатор, низкий уровень – нейтральный фактор.
Rgt1 регулирует экспрессию генов, кодирующих белки-переносчики глюкозы и не влияет на экспрессиию генов, кодирующих ферменты гликолиза

комплекс ко-репрессора Tup1-Ssn6
Rgt1

норме ингибируется цитратом и АТФ, при раке- нет)

Пируваткиназа Pyk1 –

определяет скорость гликолиза. Мишень для антираковой терапии.

с Gcr1 и активирует только гены гликолиза

сотнями промоторов
репрессор локусов типа спаривания и удлинения теломер
Гликолиз регулирует

в комплексе с Gcr1/Gcr2
RPG-box – ACCCATACATTTA
Узнает и активирует 294 гена у дрожжей ( 5% генов)

клеточного цикла
5’-CTTCC-3’
гомодимер

клеточного цикла

Трансляция ( изменение скорости трансляции – Adr1p; изменение стабильности иРНК

- cтабильность иРНК MAL63 – c 25 минут до 6 минут.
3. Протеолитическая деградация – добавление глюкозы в среду приводит к быстрому фосфорилированию и деградации некоторых ферментов, например фруктозо-1,6-дифосфатазы.

CCR, отбирали мутантов, не чувствительных к глюкозной репрессии, а также

мутантов не способных к индукции при отсутствии глюкозы в среде/


Reg1-Reg2-Glc7 – комплекс протеинфосфатаз

Snf1-Snf4 = комплекс киназы SNF1

Mig1 –Ssn6-Tup1 – комплекс репрессора

в этом гене являются супрессорами мутаций snf1 и snf4.
Белок

Mig1р имеет цинксодержащий домен С2Р2 и связывается с последовательностью ДНК «GC-бокс»-(G/C)(C/T)GGGG
Гибридный белок LexА-Mig1 регулирует экспрессию репортерных генов, находящихся под контролем нескольких Lex –операторов, в зависимости от концентрации глюкозы. При росте на глюкозе их транскрипция репрессирована, снижение концентрации глюкозы приводит к ослаблению репрессии, а на среде с галактозой репрессии нет.
Mig1p фосфорилируется протеинкиназой Snf1p. В штаммах, содержащих мутацию snf1, гены ГКР репрессированы даже на среде без глюкозы.
В то же время, по-видимому, Snf1p является не единственной киназой, которая фосфорилирует Mig1p (Schuller, 2003).
Mig1p привлекает к промоторам репрессивный комплекс Tup1p-Сyc8 (Ssn6) и, тем самым, блокирует транскрипцию

в среде (Schuller, 2003)





NLS – (nuclear localization sequence) последовательность, обеспечивающая

ядерную локализацию,
NES – (nuclear export sequence) последовательность, необходимая для экспорта белка из ядра

для распознавания субстратов киназы
Snf4 – (гамма субъединица) – связывается с

производными аденозина, сигнал для прекращения автоингибирования ( АМФ:АТФ)

АТФ>АМФ

АМФ>АТФ

in S. cerevisiae. (a) The main glucose repression pathway. In

response to high glucose concentrations, the complex containing the Snf1 kinase inhibits the Mig1 repressor-containing complex and thus represses genes involved in respiration, gluconeogenesis and the metabolism of alternative carbon sources, such as galactose (GAL genes) and maltose (MAL genes). Protein phosphatase type 1 (PP1) acts in a complex with Reg1 to down-regulate Snf1 in low-glucose conditions. Glucose phosphorylation by Hxk2 is required for this pathway, but the step at which it acts is not known. (b) The Snf3/Rgt2 glucose-sensing pathway. In the absence of glucose, Rgt1 acts in a complex with Std1 and Mth1 as a transcriptional repressor of the HXT1-HXT4 genes. When glucose is present, the transcription factor Rgt1 is inactivated through SCF-Grr1-mediated inactivation and degradation of Mth1 and Std1, and hyperphosphorylation by an unknown kinase, resulting in dissociation of Rgt1 from the HXT promoters. Snf3 triggers the induction of HXT1-HXT4 in response to low glucose concentrations. High glucose concentrations further enhance HXT1 expression through Rgt2 in a process that involves conversion of Rgt1 into a transcriptional activator. (c) The Gpr1/Gpa2 glucose-sensing pathway. High glucose concentrations activate cAMP synthesis by the adenylate cyclase Cyr1 (which is dependent on Ras) through the Gpr1/Gpa2 G-protein-coupled receptor system in a glucose-phosphorylation-dependent manner. The resulting activation of protein kinase A (PKA) affects a wide variety of target genes involved in, for example, carbon metabolism and stress resistance. Some of these effects are mediated by the Msn2 and Msn4 transcription factors. STRE, stress-response element. See text for further details.
Geladé et al. Genome Biology 2003 4:233   doi:10.1186/gb-2003-4-11-233

to UDP-Glucose= GAL-UDP transferase (Gal 10)
UDP Glucose is converted to

Glucose 1-p by epimerase (GAL7)
Glucose1-p is converted to Glucose6-p by GAL5-p.

Chr. XVI,
GAL80 -Chr. XIII
GAL3 - Chr. IV
Регуляторные белки

регулируют более 22 генов
          GAL-7       P             GAL-10        P  P           GAL-1
<---------------------I------I<----------------------I-----II-----I-------------------->

activator sequences,
URS = Upstream regulator / repressor sequences,

is blocked Mig1 which binds to Tup.

to UDP-Glucose= GAL-UDP transferase (Gal 10)
UDP Glucose is converted to

Glucose 1-p by epimerase (GAL7)
Glucose1-p is converted to Glucose6-p by GAL5-p.

GAL4 binding sites

the promoter region and activates the genes.  

elements and the assembly of all transcriptional components.

head, middle and tail complexes