Занятие 2. Электронная микроскопия

М.В. Ломоносова
Биологический факультет
Кафедра клеточной биологии и гистологии

(0,13 – 0,14 мкм) – при использовании УФ света
Предел

разрешения электронного микроскопа:
1Å (0,1 нм)

1 мкм = 10 −6 м; 1 нм = 10 −9 м; 1Å = 10−10 м

глутаровый альдегид
Альдегиды «сшивают» клеточные белки
Глутаровый альдегид обеспечивает лучшую сохранность тонких

структур + относительно быстро проникает в ткани.
Буферы – Зоренсена, какоделатный pH 7,2-7,4

ненасыщенные липиды и фосфолипипиды не стабилизируются – нужна дополнительная фиксация

(«постфиксация»).
1% раствор тетраоксида осмия (OsO4) - взаимодействует с липидами и беками по месту двойных связей.

60° спирт

50° спирт

1,5% раствор уранилацетата

5. Позитивное контрастирование

4. Обезвоживание

материала
Эпоксидные смолы, эпон
капсулы с заливочным эпоном →
термостат 37° С

→ термостат в 60 ° С (полимеризация)

толщина которых значительно превышает 100 нм;
в толстом срезе компоненты

перекрывают друг друга и видны менее четко.

→ тонкие срезы 50-100 нм

свинца по методу Рейнольдса)

буфером;
дофиксация четырехокисью осмия (+контрастирование);
50° спирт;
60° спирт;
70° спирт с уранилацетатом;

80° спирт;
96° спирт;
100° спирт;
ацетон;
ацетон:эпон=3:1;
ацетон:эпон=1:1;
ацетон:эпон=1:3;
эпон (эпоксидная смола);
37°;
60°;
затачивание пирамидки;
изготовление ультратонких срезов 60-80 нм на ультрамикротоме;
помещение срезов на бленды или сеточки с формваром;
контрастирование (уранилацетат, затем цитрат свинца).

кислота – электронноплотные вещества)
Объекты выглядят светлыми пятнами на темном

фоне

Плюсы
Можно проникать вглубь объекта, выявлять дополнительные детали

Минусы
Плохо выявляются нитчатые молекулы из-за малой толщины

их сплавы (золото, медь, алюминий, платина).
Напыление производят в специальной

вакуумной камере путем нагрева и испарения металла в вакууме или «выбивания» атомов металла в результате действия ионов инертного газа.
Атомы испаряющегося металла покрывают тонкой пленкой поверхность образца.
Если объект имеет сложную конфигурацию, и металл не поникает во все углубления, контрастирование производят путем напыления углерода.
Напыленный на ткань металл называется репликой.

вещество, например, тяжелый металл.
Термическое испарение металла металла
Атомы металла встречаются с

объектом и осаждаются на нем в виде слоя
Там, где объект экранирует пучок частиц – «тень»

Минусы:
Увеличение размеров объекта на толщину напыленного слоя
Дает представление только о внешнем виде и форме частиц

h = lxtgθ
θ - угол напыления, l - длина тени, h - высота объекта

спирт;
100° спирт;
96° спирт:ацетон =3:1;
96° спирт:ацетон =1:1;
96° спирт:ацетон =1:3;

ацетон;
высушивание в критической точке;
приклеивание образца к металлическому столику (лаком для ногтей);
напыление (смесью Au-Pd (золото – палладий)).

полиэтиленоксид)
Ткань подвергается быстрому замораживанию жидким азотом (-196°С)
Скол охлажденным ножом в

специальной вакуумной установке
В вакууме часть воды, перешедшей в стекловидную форму, возгоняется («травление»), а поверхность скола покрывается тонким слоем углерода, а затем металла (Au, Cu, Pd)
При комнатном температуре ткань растворяют в кислотах, а реплика остается, ее смотрят в ТЭМ