Слайд 1Транскрипция –
 синтез РНК
 по матрице 
ДНК
                            							
							
							
						 
											
                            Слайд 2Все типы РНК транскрибируются с ДНК
                            							
														
						 
											
											
											
                            Слайд 5Рибонклеозидтрифосфаты – субстраты для синтеза РНК
                            							
														
						 
											
                            Слайд 6~
~
~
~
~
~
~
~
А
Г
Ц
У
Нуклеозидтрифосфаты
                            							
														
						 
											
                            Слайд 7Принципы транскрипции
2. Комплементарность
3. Антипараллельность
5. Асимметричность
4. Униполярность
1. Матричный принцип
                            							
														
						 
											
                            
                                                            
                                    
   5΄ CGATGCAT 3΄  Нематричная цепь, кодирующая
                                    или смысловая
 
ДНК
 
       3΄ GCTACGTA 5΄  Матричная цепь, некодирующая или несмысловая
 
 
m PHK 5΄CGAUGCAU 3΄  
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 9РНК транскрибируется комплементарно и
 антипараллельно с одной из цепей ДНК
                            							
														
						 
											
                            Слайд 10Эксперимент, доказывающий, что транскрипция идет
с одной цепи ДНК 
                            							
														
						 
											
                            Слайд 11Разные гены могут транскрибироваться с одной и другой
цепи ДНК
                            							
														
						 
											
											
                            Слайд 13РНК-полимераза E.coli
Белок с четвертичной структурой
Holo-фермент (полный) состоит из 5 субъединиц
                                                            
                                    
–ααββγ. Без γ – это core-фермент. γ  узнает расплавленные
                                    области промотора. Holo-фермент связывается с промотором и начинает транскрипцию после этого γ уходит и далее элонгацию осуществляет core-фермент
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 14В β субъединице находятся 2 каталитических центра, один отвечает за
                                                            
                                    
инициацию, а другой за элонгацию. Один работает в Holo-ферменте а
                                    другой – в core-ферменте
                                
                            							
														
						 
											
											
                            Слайд 16Единица транскрипции у прокариот
Оперон
Промотор
Оператор
Цистрон 1
Терминатор
Цистрон n
Цистрон 1
Цистрон – ген, кодирующий
                                                            
                                    
один полипептид или одну
молекулу РНК
ДНК
3'
5'
                                                                    
                            							
														
						 
											
                            Слайд 17П
О
Т
3'
5'
Промотор
Начало
транскрипции
-10
-35
16-19 пар нуклеотидов
РНК-полимераза
ТТГАЦА
ТАТААТ
                            							
														
						 
											
											
                            Слайд 19Терминация
П
О
Т
3'
5'
не гни папин ген
                            							
														
						 
											
                            Слайд 20Теория оперона
Ф. Жакоб и Ж. Мано 1961 год
Оперон – это
                                                            
                                    
группа генов, функции которых 
тесно связаны в метаболизме. Оперон весь
                                    либо активен, либо не активен. Если оперон активен, с него транскрибируется полицистронная мРНК, служащая матрицей для синтеза всех белков оперона.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 21Промотор – РНК-полимераза узнает 
в промоторе два АТ-богатых расплавленных участка
                                                            
                                    
, центры их -10 и -35п. н., а между ними
                                    16-19 п. н. (если меньше или больше, РНК-полимераза не узнает промотор)
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 22Этапы транскрипции
Узнавание и прочное связывание
 РНК-полимеразы с промоторомЕсли оператор свободен,
                                                            
                                    
то в β 
субъединице оказывается первый 
нуклеотид оперона и при
                                    этом 
плавится один виток двойной спирали 
ДНК – 10 п.н.Образуется транскр глазок
3. Инициация – образование фосфодиэфирной связи между 1 и 2 нуклеотидом. Первый всегда пурин трифосфат. σ покидает фермент
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 234. Элонгация – наращивание цепи РНК
Core фермент покрывает 40 п.
                                                            
                                    
н. при 
этом плавления спирали не происходит
, но зато В-форма
                                    ДНК превращается в А-форму с пустотой внутри 0,5 нм, что облегчает транскрипцию. Водородные связи разрываются на участке не более 6 п. н. 
5. Терминация
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 24Lac-оперон
Если в среде глюкозу заменить лактозой, то через некоторое время
                                                            
                                    
E. coli начинают синтезировать 3 фермента, обеспечивающих метаболизм лактозы.
В отсутствие
                                    лактозы репрессор ( аконитаза) связан с оператором, перекрывающим промотор, и транскрипция не идет.
 При появлении лактозы, она связывается с репрессором, оператор освобождается и начинается транскрипция оперона
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 25Триптофановый и гистидиновый опероны
В присутствии солей аммония как источника азота
                                                            
                                    
E. coli синтезирует все АМК. При добавлении в среду Три
                                    или Гис перестает синтезировать именно эти АМК.
Это связано со структурой корепрессора, который не имеет сродства к оператору, но приобретает его после присоединения АМК и тогда он присоединяется к оператору и запрещает транскрипцию
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 26Оперон – единица транскрипции у 
прокариот, с него считывается 1
                                                            
                                    
молекула РНК
Промотор – в начале оперона, 
в конце – терминатор,
                                    а между ними
Цистроны-последовательность ДНК, 
кодирующая 1полипептид или 2 РНК
Промотор – площадка для посадки 
РНК-полимеразы
Терминатор- сигнал к окончанию 
Транскрипции
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 27Оператор- регуляторный участок оперона. С ним связывается белок-репрессор и останавливает
                                                            
                                    
транскрипцию
                                                                    
                            							
														
						 
											
                            Слайд 28Готовность к транскрипции
Ремоделирование нуклеосом strip, split,flip?
Деконденсация доменов
Гиперацетилирование гистонов и появление
                                                            
                                    
чувствительности к ДНК-азе I
Уменьшение или распад нуклеосом
Превращение нуклеосом в гексасомы
Территория
                                    хромосомы – неактивные гены внутри, а активные по периферии
                                
                            							
														
						 
											
											
											
											
                            Слайд 32Элонгация – последовательное 
наращивание цепи РНК. При этом необходим разрыв
                                                            
                                    
водородных связей. В это время работает core-фермент. Он сначала переводит
                                    В форму в А, в которой есть внутренняя пустота, облегчающая элонгацию, разрыв водородных связей происходит на очень небольшом участке – 6 п.н.
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 33Терминация- в терминаторе имеются Г-Ц богатые участки – палиндромы.Дойдя до
                                                            
                                    
палиндрома, РНК-полимераза не останавливается, а считывает его. После этого копия
                                    палиндрома в РНК складывается в шпильку а фермент сваливается с ДНК
                                
                            							
														
						 
											
                            Слайд 34Транскрипционная единица эукариот
                            							
														
						 
											
											
											
                            Слайд 37Инициация транскрипции у эукариот
                            							
														
						 
											
                            Слайд 38Разнообразие РНК-полимераз в эукариотических клетках
                            							
														
						 
											
                            Слайд 39Структура эукариотического промотора
                            							
														
						 
											
											
                            Слайд 41Грибы, 
Amanita,
содержащие яд
Аманитин, оста-
навливающий 
Транскрипцию
РНК-полимераза
II –очень
 чувствительна, III – менее,
                                                            
                                    
I - нечувствительна