ГЕННАЯ ТЕРАПИЯ БОКОВОГО АМИОТРОФИЧЕСКОГО СКЛЕРОЗА: З. А. Суслина, Б. С

В. З. Тарантул, С. Н. Иллариошкин,
М. Н. Захарова, И. А.

Завалишин, М. М. Шмаров, А. Л. Гинцбург,
Н. П. Бочков

ФГБУ «Научный центр неврологии» РАМН, Институт молекулярной генетики РАН, НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи МЗ РФ

ФГБУ «НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НЕВРОЛОГИИ»
РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

Москва, 2013

передних рогов спинного мозга и двигательных ядер мозгового ствола, а

также центральных мотонейронов. Заболевание проявляется неуклонно нарастающими парезами, мышечными атрофиями, фасцикулляциями и пирамидным синдромом

Стивен Хокинг
астрофизик

55-60 лет
Соотношение мужчин и женщин 1,6:1

Семейная форма – 5-10% больных

Ювенильная

форма – 10%

Западно-Тихоокеанская форма
(БАС + паркинсонизм + деменция)

Частота - в 100 раз чаще, чем спорадическая

Са 2+ гомеостаза
Митохондриальная дисфункция
Конформационные изменения белков и нарушения их деградации
Дефицит

нейротрофических факторов
Нарушение структуры и функции цитоскелетных белков и аксонального транспорта

о механизмах гибели мотонейрона
используются препараты, доказавшие свою эффективность на различных

природных и трансгенных моделях болезни двигательного нейрона у животных
при БАС могут быть эффективны и препараты, которые с успехом уже применяются при других нейродегенеративных заболеваниях (болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, хорея Гентингтона, прионные болезни)

LIF, CT-1 (кардиотрофин-1))
Трансформирующие ростковые факторы (GDNF, neuroturin, persephin)
Инсулиноподобные ростковые факторы

(IGF-1, IGF-2)
Гипоксия индуцибельные факторы (VEGF, эритропоэтин, ангиогенин)

и BDNF; CNTF и LIF; GDNF и NT3, 4/5)
Способность замещать

друг друга
Гетерогенность действия на различные субпопуляции мотонейронов спинного мозга, ядер черепно-мозговых нервов, двигательной коры

сосудов, относящийся к новому классу соединений - гипоксия индуцибельных нейротрофических

факторов.

В экспериментах на животных показано, что уменьшение уровня VEGF приводит не только к снижению нейрональной перфузии, но и к недостаточности VEGF опосредованной нейропротекции
Делеция промоторного элемента, в гене VEGF, определяющего реакцию на гипоксию (HRE) вызывает БДН у мышей
Данная мутация приводит к избирательному снижению VEGF в МН на 40%, при гипоксии - на 75%
Полиморфизмы в гене VEGF, приводящие к снижению его экспрессии, повышают риск заболевания БАС в 1,8 раза
Снижение уровня VEGF в биологических жидкостях больных БАС и корреляция с тяжестью заболевания

и включают стимуляцию процессов транскрипции и трансляции белков, регуляцию биогенеза

рибосом, пролиферацию и рост эндотелиальных клеток
частота встречаемости мутаций в гене ANG у больных БАС 1,5%

прогрессирования при в/м введении IGF-1
Улучшение ЖЕЛ после в/м введения BDNF
Отрицательные

эффекты
Быстрая деградация пептидных молекул и, соответственно, кратковременный эффект
Низкая проницаемость через ГЭБ
Выраженность периферических побочных эффектов
Токсичность при введении больших доз
Образование аутоантител к нейротрофическим факторам

из организма в течение 4- 5 недель

способны проникать в широкий

спектр как делящихся, так и неделящихся клеток;
осуществляют высокоэффективную экспрессию генов терапевтического вмешательства

Безопасность

Эффективность

рекомбинантных
вирусных
частиц
клетки линии 293,
содержащие E1
область генома
аденовируса
рекомбинантная
вирусная
частица
Введение полученной
конструкции

в клетки

Этап 3

Область А

Этап 1

Удаление
области А

VEGF

Вставка
целевого гена

Этап 2

Спинной мозг

введения, доза/3 мл.

Состав:
смесь (1:1) рекомбинантных псевдоаденовирусных частиц, экспрессирующих гены фактора

роста эндотелия сосудов человека и ангиогенина человека, в суммарной концентрации (7,0±1,4)х1011 частиц в 3 мл буферного раствора.

экспрессируют мутантный ген Cu/Zn-супероксиддисмутазы SOD1

характеризуются прогрессирующей дегенерацией мотонейронов,

в

возрасте 6–7 месяцев появляются первые клинические признаки заболевания: парез и последующий паралич одной или двух конечностей, с последующей генерализацией

умирают через 4–6 недель после клинической манифестации заболевания в возрасте около 8 месяцев

жизни
Курс инъекций через каждые 2 недели
Раствор вводился билатерально в

разные группы мышц передних, задних конечностей и спины (всего 6 групп); в каждой из указанных мышечных зон было по 5 точек введения, каждое введение – по 30 мкл препарата или сравниваемого контрольного раствора (в каждую группу мышц по 150 мкл, соответственно)
общее количество вводимого препарата 0,9 мл

2 3
Экспрессия гена VEGF (RT-PCR):
1 –

поясничный отдел, 4-й день;
2 – поясничный отдел, 8-й день;
3 – грудной отдел, 8-й день.

Экспрессия маркерного белка GFP:
A – флюоресцентная
микроскопиия;
Б – иммуногистохимия.

животных
после введения препарата (сравниваемого раствора) у животных не наблюдалось явных

признаков воспалительных, аллергических реакций или проявлений системной интоксикации
в экспериментальных группах не зафиксировано каких-либо ассоциированных патологических состояний, которые могли бы быть прямо или косвенно связаны с введением рекомбинантного препарата

задних конечностей
Установка Opto-Varimex-3 ("Columbus instruments", США)

0,05
*

VEGF 121 и ANG у больных со спорадической формой БАС

возрасте от 18 до 69 лет
Достоверный диагноз БАС, согласно международным

критериям El Escorial (1998)
Длительность заболевания не более 3-х лет
Значение по шкале ALSFRS не менее 30 баллов
ЖЕЛ не менее 70%
Женщины могут включаться в исследование при следующих условиях:
- не обладающие репродуктивным потенциалом
- обладающие репродуктивным потенциалом с отрицательным результатом теста мочи на беременность во время скрининга при условии согласия постоянно использовать один из указанных методов контрацепции (ВМС, барьерные методы контрацепции)

лабораторных показателей функции почек и печени
Наличие онкологических заболеваний у пациентов
Любое

клинически значимое отклонение от нормы на ЭКГ, зарегистрированное в любом из 12 отведениях
Кормление грудью, беременные женщины или пациентки, планирующие беременность
Наличие сахарного диабета I-II типов
Наркотическая и лекарственная зависимость, алкогольная зависимость в течение последних 6 месяцев
Пациенты, позитивные по гепатитам В, С или ВИЧ
Участие в других клинических испытаниях
Наличие у больных трахеостомы или гастростомы
Высокий исходный уровень вируснейтрализующих антител (>1:80)

AdV VEGF+ANG, 25 получающих плацебо)
Введение препарата (или плацебо) внутримышечное в

3 мышцы (m.trapezius, m.deltoideus, m.quadriceps) с каждой стороны каждые 3 недели
Общая однократно вводимая доза препарата 1,2 мл, содержащие 3х109БОЕ (бляшкообразующих единиц) (в каждую мышцу по 0,2 мл)
Количество визитов – 26 (в течение 18 месяцев)

масса тела, ЭКГ)
Контроль лабораторных данных (клинический и биохимический анализы крови,

мочи, исследование онкомаркёров)
Оценка нежелательных явлений (местных, системных, лабораторных отклонений)

ALSFRSR
Исследование мышечной силы с оценкой по шкале ММТ (manual muscle

test)
Выживаемость больных БАС

отличие от визита 1 (p

препаратом AdvVEGF+ANG замедляет снижение жизненной емкости легких у больных БАС.
Во

время исследования серьезных нежелательных явлений не было