Слайд 1
Государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«ПЕРВЫЙ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ
МЕДИЦИНСКИЙ
УНИВЕРСИТЕТ имени академика И.П. Павлова»
МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ Российской федерАции
Кафедра
иммунологии
Слайд 2«Гуморальный иммунный ответ.
Основные этапы развития».
Практическое занятие № 7
Слайд 3Вопросы
Основные этапы гуморального иммунного ответа.
Какие субпопуляции Т-лимфоцитов-хелперов участвуют в
развитии гуморального иммунного ответа?
Какие антитела преобладают при первичном иммунном ответе?
Что
представляет собой плазматическая клетка?
Какие функции в организме выполняют иммуноглобулины?
Слайд 4Постулаты теории клональной селекции
Каждый В лимфоцит имеет рецептор уникальной специфичности.
Высокоаффинное
(прочное) взаимодействие рецептора с антигеном приводит к активации лимфоцита.
Специфичность
рецептора сохраняется в процессе пролиферации и дифференцировки лимфоцита.
Лимфоциты с рецепторами, специфичными к собственным антигенам, удаляются на ранней стадии дифференцировки.
Слайд 5гены Ig молекул
Каждая молекула Ig состоит из 2 тяжелых (Н)
и двух легких (L) цепей, в каждой из этих цепей
присутствуют константные (С) и вариабельные (V) области.
Вариабельные (V) и константные (С) области иммуноглобулиновых молекул кодируются отдельными генами.
Слайд 7Выход зрелых В клеток на периферию
Из костного мозга выходят только
те В –лимфоциты, у которых успешно произошла реаранжировка генов тяжелых
и легких цепей Ig молекул, причем эти В –лимфоциты не активируются в ответ на аутоантигены –то есть не являются аутореактивными. Все остальные в клетки погибают в костном мозге путем апоптоза.
На поверхности отобранных В лимфоцитов экспрессируются IgM и IgD –Ig рецепторы, которые синтезируются с одной ДНК путем альтернативного сплайсинга.
Слайд 8Y
Y
Y
Y
Y
Y
Зрелый В-лимфоцит
выходит
на периферию
Y
Y
В - клеточная аутотолерантность – выход
зрелых
В клеток из костного мозга
Незрелый В-лимфоцит не распознает ауто
Аг
Слайд 9Этапы дифференцировки В клеток на периферии
После того, как В лимфоцит
встретится со «своим» антигеном в лимфоузле, он превратится в плазматическую
клетку, синтезирующую антитела.
Плазматическая клетка –конечный этап дифференцировки В –лимфоцита.
Слайд 10Фазы развития гуморального иммунного ответа
Слайд 11Расположение, строение и функция лимфатических узлов
Лимфоузлы находятся на стыке лимфатических
и кровеносных сосудов: по лимфе из тканей поступают клетки, готовые
к презентации антигена, а также свободный антиген.
Из кровотока поступают клетки: Т лимфоциты для возможной встречи с антигеном, презентируемым дендритными клетками (ДК), и В клетки – для возможной встречи со свободным антигеном.
Т клетки выходят с лимфой и возвращаются в кровь через грудной проток (рециркуляция).
Слайд 12Функции вторичных лимфоидных органов
Захватывать патогены «на входе» в макроорганизм
и тем самым ограничивать их распространение.
Способствовать контакту антигенпрезентирующих клеток
и лимфоцитов.
Способствовать контакту Т и В лимфоцитов.
Обеспечивать ниши для дифференцировки эффекторных клеток.
Слайд 13Строение ЛУ
Афферентный (приносящий) и эфферентный (выносящий) лимфатические сосуды.
Снаружи капсула, под
капсулой - кора – В- клеточная зона, в ней потом
сформируются зародышевые центры –места интенсивного размножения клеток.
Паракортикальная зона –Т- клеточная зона.
Слайд 15Строение ЛУ
В клетки покидают сосуды и входят в ЛУ через
ВЭВ (венулы с высоким эндотелием).
АГ попадает в ЛУ через афферентный
приносящий лимфатический сосуд.
После встречи с антигеном В клетки быстро пролиферируют в зародышевых центрах.
Из зародышевого центра выходят В клетки,
которые дифференцировались в плазматические клетки.
Слайд 16Рециркулирующие В – клетки встречаются со «своим» антигеном в лимфоузле
Слайд 17События в лимфоузле – посте встречи В лимфоцита с комплементарным
его рецептору антигеном
После встречи наивного В лимфоцита с антигеном
и контакта с Т-лимфоцитом-хелпером, В-лимфоцит входит в цикл пролиферации.
Его потомки, несущие идентичные рецепторы, комплементарные к антигену, во вторичных фолликулах образуют зародышевые центры.
В зародышевых центрах интенсивная пролиферация сочетается с соматическими гипермутациями реаранжированных ранее V –генов и селекцией клеток, несущих высокоаффинные для данного антигена рецепторы.
Слайд 18События в лимфоузле – посте встречи В лимфоцита с комплементарным
его рецептору антигеном
Гипермутации с частотой 2-4% происходят в генах
V –областей IgG и IgA, реже - IgM и характеризуются заменой одного нуклеотида (так называемые SNPs).
Биологический смысл: в результате таких гипермутаций повышается аффинность секретируемых антител – то есть сила их связи с антигеном.
В результате происходит более полная «подгонка» антител к антигену.
Слайд 19События в лимфоузле – посте встречи В лимфоцита с комплементарным
его рецептору антигеном
После соматических гипермутаций в V-областях генов иммуноглобулинов
происходит отбор клеток, наиболее комплементарных к антигену- т.е. –антигензависимая селекция В-лимфоцитов.
После ее завершения для отобранных клеток есть 2 пути развития :
1. Превращение в короткоживущие плазматические клетки, синтезирующие антитела.
2. Превращение в долгоживущие В -клетки памяти, которые при повторном попадании антигена будут превращаться в плазматические клетки, сразу синтезирующие высокоаффинные антитела.
Слайд 20Primary Follicles become
secondary follicles
when germinal centres develop
Микроанатомия зародышевого центра
Слайд 21Тип иммунного ответа определяет цитокиновое
микроокружение, которое для наивных
Тхелперов создают активированные дендритные клетки
Слайд 22J J O’Shea, and W E Paul Science 2010;327:1098-1102
Развитие Т-хелперов
различных типов под влиянием цитокиновых сигналов от дендритных клеток
IL-6
IL-4
IFNg, IL-12
TGFb
TGFb,
IL-6
Слайд 23Распознал
неауто-АГ
на периферии
Ig - секретирующая
плазматическая клетка
Дифференцировка В
– клеток на периферии
Зрелый периферический
В -лимфоцит
Слайд 25В-лимфоцит и плазматическая клетка
уровень
экспрессии
рост соматические переключение
Ig MHC II Ig секреция мутации изотипов
Высокий Да нет да да да
низкий нет да нет нет нет
Слайд 26Домены –компактно уложенные структуры, устойчивые к действию протеаз; по типу
тяжелых цепей называются классы иммуноглобулинов a-цепь-(IgA); d - (IgD); e
(IgE); g - (IgG); m (IgM)
Полярность молекулы иммуноглобулина : Fc и Fab - фрагменты
С домены легких
цепей
k или l
Домены тяжелых цепей
a, d, e, g, или m
Слайд 27Функции (Fab – antigen binding) фрагментов в молекулах Ig
Распознавать антиген
Преципитировать
антиген
Запускать процессинг антигенов
Блокировать активные сайты токсинов
или патоген - ассоциированных
молекул
Блокировать взаимодействие между организмом –хозяином
и чужеродными молекулами
(Fab)2 фрагмент способен:
Воспаление и эффекторные функции клеток
Воспаление и эффекторные функции комплемента
Запус процессинга антигенов
Но (Fab)2 не может активировать:
Слайд 28Fv
Гибкость иммуноглобули
новых молекул
Слайд 29Мономерный IgM
На поверхности в клетки IgM существует только как мономер
мономерный
IgM имеет очень низкую аффинность к антигену
Слайд 30МУЛЬТИМЕРИЗАЦИЯ IgM
1. 2 мономера IgM
(показаны только Fc)
2. Цистеины в J
цепях формируют дисульфидные мостики с цистеинами каждого мономера
3. J цепи
соединяются дисульфидными мостиками
4. присоединяется
J цепь другой мономерной молекулы IgM
5. Цикл повторяется
6. Формируется пентамер.
Слайд 31Изменения конформации молекулы IgM, вызванные антигеном
Слайд 32IgM
Тяжелая цепь: m - Mю
Время полужизни: 5 - 10 дней
% от
Ig сыворотки: 10
Уровень в ыворотке 0.25 - 3.1 ( мг мл-1):
Активация комплемента: ++++ классический путь
Взаимодействие с клетками: фагоцитоз через C3b рецепторы
эпителиальные клетки = полимерный IgR
Перенос через плаценту : нет
Аффинниость к Аг: мономерный IgM –– валентность = 2
пентамерный IgM - валентность = 10
Слайд 33IgD
IgD ко-экспрессируется вместе с IgM на В клеткк в результате
альтернативного РНК - сплайсинга
IgD –плазматические клетки обнаружены в назальной слизистой–
однако функции этого класса иммуноглобулинов не ясны
Тяжелая цепь: d - дельта
Время полужизни: 2 - 8 дней
% Ig в сыворотке: 0.2
уровень (мг мл-1): 0.03 - 0.4
Активация комплемента: нет
взаимодействие: T клетки через лектиноподобный IgD R
Перенос через плаценту: нет
Слайд 34IgG
Тяжелые цепи: g 1 g 2 g3 g4 - гамма 1
- 4
Время полужизни : IgG1 21 - 24 дней
IgG2 21 - 24 дней
IgG3 7 - 8 дней IgG4 21 - 24 дней
уровень (мг мл-1): IgG1 5 - 12 IgG2 2 - 6
IgG3 0.5 - 1 IgG4 0.2 - 1
% от Ig сыворотки: IgG1 45 - 53 IgG2 11 - 15
IgG3 3 - 6 IgG4 1 - 4
Активация комплемента: IgG1 +++ IgG2 + IgG3 ++++ IgG4 нет
Взаимодействие с клетками: все субклассы через IgG рецепторы на МФ
Перенос через плаценту: IgG1 ++ IgG2 +
IgG3 ++ IgG4 ++
Слайд 35IgA - димеризация и секреция
IgA –основной изотип антител, секретируемых
слизистыми
В сыворотке существует в виде мономера, но обычно - как
димер, связанный J цепью , который образуется сходным образом с IgM пентамерами
Существует 2 субкласса IgA
IgA1 в основном присутствует в сыворотке и продуцируется костномозговыми B клетками
IgA2 в основном присутствует в секретах, молозиве и молоке и продуцируется B клетками, локализованными в слизистых
Слайд 36секреторный IgA и трансцитоз
комплекс pIgR разрушается, освобождается IgA с частью
pIgR - секреторным компонентом
Слайд 37IgA
Тяжелые цепи: a1 или a2 - альфа 1или 2
Время полужизни: IgA1
5 - 7 дней
IgA2 4 - 6 дней
Уровень в сыворотке
IgA1 1.4 - 4.2
(мг мл-1): IgA2 0.2 - 0.5
% от Ig сыворотки : IgA1 11 - 14
IgA2 1 - 4
Активация комплемента: IgA1 – альтернативный и лектиновый путь IgA2 - нет
Взаимодействие с клетками: эпителий - через pIgR
фагоциты -через IgAR
Перенос через плаценту : нет
Слайд 38IgE
IgE появился позже в эволюции в связи с его ролью
в защите от паразитарных инфекций
Большинство IgE – молекул абсорбируется на
IgE рецепторах эффекторных клеток
IgE также тесно связан с аллергией
Тяжелые цепи: e - эпсилон
Время полужизни: 1 - 5 дней
Уровень в сыворотк 0.0001 - 0.0002
% от Ig сыворотки : 0.004
Активация комплемента : нет
Взаимодействие : через высокоаффинные IgE R тучных клеток, эозинофилов, базофилов,
клеток Лангерганса
через низкоаффинные IgE R В лф , моноцитов
Перенос через плаценту : нет
Слайд 39Различия в аминокислотной последовательности молекул антител
Изотипические различия – у
всех изотипов одинаковая аминокислотная последовательность в антигенсвязывающем центре (IgM, IgD,
IgG, IgA, IgE).
Аллотипические различия – разные последовательности аминокислот в константных областях тяжелых цепей у разных особей 1 вида.
Идиотипы – различия в аминокислотных последовательностях в антигенсвязывающих центрах молекул Ig (в гипервариабельных участках).
Слайд 40Роль антигенпрезентирующих клеток (АПК) в активации В лимфоцитов при ответе
на Т- зависимые антигены (большинство белковых антигенов)
Т- зависимые антигены одновременно
распознаются и Т- и В-лимфоцитами, при этом В-лимфоциты распознают эпитопы антигенов, а Т-лимфоциты –белки-носители антигена.
Информацию об антигене Т- и В-лимфоцитам передают антигенпредставляющие клетки (АПК), которые осуществляют процессинг антигена и предоставляют его в иммуногенной форме лимфоцитам в виде комплекса: антигенный пептид+ молекула MHC.
В зародышевых центрах ЛУ роль АПК играют дендритные клетки.
Слайд 41Взаимодействие Т и В лимфоцитов при ответе на Т- зависимые
антигены
В лимфоциты презентируют антиген Т клеткам, и от Т-клеток получают
сигналы «помощи» и запуска пролиферации и дифференцировки.
В ходе иммунного ответа помогают В лимфоцитам только те Т-клетки, которым уже был представлен комплекс АГ-пептид +MHC антигенпрезентирующей клеткой.
Слайд 42Взаимодействие Т и В лимфоцитов при ответе на Т- зависимые
антигены
Мембранносвязанный IgR(рецептор) на В лимфоците взаимодействует с антигеном, доставленным В
–лимфоциту дендритными клетками.
Путем рецептор-связанного эндоцитоза АГ попадает внутрь В лимфоцита, где он процессируется, его фрагменты упаковываются в молекулы MHC II и выносятся на клеточную поверхность В лимфоцита.
Слайд 43Взаимодействие Т и В лимфоцитов при ответе на Т- зависимые
антигены
Комплекс MHC II +АГ пептид распознается Т-клеточным рецепторм (TCR),а молекула
MHC II –корецептором (CD4), после этого распознавания в Т клетку идет первый сигнал активации.
Молекулы CD80/CD86 на поверхности В клетки связываются с молекулой CD 28 на поверхности Т-клетки, в Т-клетку идет второй сигнал активации.
Молекула CD40L на поверхности Т-клетки связывается с молекулой CD40 на поверхности В клетки – в В клетку идет сильнейший сигнал к активации.
Слайд 44ДК презентируют
РАЗЛИЧНЫЕ АНТИГЕНЫ
Захват антигенов В клеткой
Поверхностный Ig захватывает АГ
Перекрестное
связывание рецепторов с антигенами активирует В клетку
Активированные В клетки экспрессируют
CD40
CD40
Слайд 452. Связывание и интернализация через
Ig вызывает экспрессию CD40
3.
Антиген подвергается процессингу
4. Пептидные фрагменты АГ упаковыва
ются в молекулы MHC
внутри клетки.
Комплексы MHC/пептид экспресси
руются на поверхность клетки
Антигены интернализируются В - клеткой
Связывание антигена
максимизирует захват антигенов
Слайд 46T клетки помогают B клеткам
сигнал 1
антиген и рецептор
к антигену
1.
T клеточный рецептор
2. Ко-рецептор (CD4)
3.CD40 лиганд
Слайд 47T клеточная помощь - сигнал 2
B клетки погибают путем
апоптоза, однако
сигналы1 и 2 повышают экспрессию Bcl-XL на В клетках,
а Bcl-XL предотвращают апоптоз
сигналы 1 и 2 позволяют В – клеткам выживать
T клетки регулируют выживаемость B клеток и, т.о., контролируют их клональную селекцию
цитокины
IL-4
IL-5
IL-6
IFN-g
TGF-b
Слайд 48Цитокиновая активация В клеток
Активированные Т клетки секретируют цитокины, активирующие В
клетки:
IL-2 –индуктор активации Т и В клеток.
IL-4 –действует на ранней
стадии активации и пролиферации В клеток.
IL-6 –активатор В - клеточной дифференцировки.
Слайд 49Ответ В клеток на Т-независимые антигены
При ответе на Т-независимые антигены
В лимфоцитам не нужна помощь Т-лимфоцитов.
Т - независимые антигены –липополисахариды
бактерий, бактериальные углеводы –декстран, леван, белки бактерий – флагеллин, эндотоксин и др. – все они представляют собой молекулы с часто повторяющимися структурными участками, в высоких концентрациях они являются митогенами –то есть способны активировать многие клоны В –клеток (поликлональная активация), в низких концентрациях – только специфические клоны В клеток.
Слайд 50Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
T независимые антигены (липополисахариды)
6 различных B клеток, для активации которых
требуется 6 различных АГ
Высокая доза LPS вызывает поликлональную активацию всех
6 типов В-клеток, независимо от их специфичности.
Поэтому Т-независимые антигены называются МИТОГЕНАМИ
LPS связывается с CD14, LPSBP и TLR4
Слайд 51Ответ В клеток на Т- независимые антигены
В ответе В клеток
на Т-независимые антигены отсутствует взаимодействие Т- и В-клеток, нет взаимодействия
молекул CD40-CD 40L, нет сильного сигнала к активации В клеток.
Первичный ответ – слабый, слабое формирование клеточной памяти. Такой ответ в основном осуществляет В1 популяция клеток, синтезирующих только IgM –антитела (нет переключения изотипов).
Слайд 52B-1 клетки
Распознают эпитопы АГ с повторяющимися структурами - фосфотидилхолин, липополисахариды
и др.
Не являются частью адаптивного иммунитета:
нет иммунологической памяти
нет более высокой
эффективности ответа
при повторном введении АГ
присутствуют с рождения
Натуральные антитела
Могут производить Ig без помощи T клеток
Слайд 53Первичный ответ на АГ
При первичном попадании антигена в организм развивается
первичный гуморальный ответ, он протекает в 4 фазы:
Лаг – фаза
–антитела в сыворотке крови не обнаруживаются.
Лог - фаза – титр антител нарастает логарифмически.
Фаза плато –стабилизация титра антител.
Фаза затухания –катаболизирование или выведение из организма антител.
Слайд 54Вторичный ответ на АГ
При повторном попадании антигена в организм развивается
вторичный иммунный ответ, который характеризуется укороченной лаг - фазой и
более продолжительными фазами плато и затухания.
Уровень антител во время фазы плато обычно более, чем в 10 раз превышает количество антител при первичном ответе.
Слайд 55Сравнительная характеристика первичного и вторичного иммунного ответа
Слайд 56Продукция IgM- и IgG-антител при первичном и вторичном иммунном ответе
1-я
иммунизация
2-я иммунизация
Время, сут
Уровень
антител,
усл.ед/мл
Всего
Всего
Первичный
ответ
Вторичный
ответ
Слайд 57Временные характеристики первичного ответа
При первичном иммунном ответе первыми синтезируются антитела
класса М
(начало –на 3-4 сутки, пик –на 7 сутки,
затухание – на 14 сутки после введения АГ)
Позже происходит синтез антител класса G
(начало – на 6 сутки, пик – на 14 сутки, затухание - на 21 сутки).
Слайд 58Временные характеристики вторичного ответа
При вторичном иммунном ответе синтезируются антитела класса
G уже на 2-3 сутки, пик их уровня достигается на
7 сутки, фаза плато – более длительная.
Антитела класса М при вторичном ответе присутствуют лишь в небольших количествах.
Слайд 59Роль цитокинов в переключении изотипов Ig
Т- клеточные цитокины, освобождаемые в
непосредственной близости к В-клеткам, определяют новый изотип молекулы иммуноглобулина.
Например,
IL-4 –активирует процесс переключения изотипа с IgG1на IgE, одновременно ингибируя переключение и синтез IgG2.
Трансформирующий ростовый фактор бета (TGF ) –переключение на IgA и IgG2, а интерферон –гамма (IFN-) – на IgG2.
Слайд 60Последовательность переключения
классов иммуноглобулинов
Переключение классов иммуноглобулинов в одной клетке
Слайд 61Роль T клеточных цитокинов в T клеточной помощи
цитокины
IL-4
IL-5
IL-6
IFN-g
TGF-b
IgM IgG3 IgG1 IgG2b
IgG2a IgE IgA
IL4 +
+
IL-5
IFN-g + +
TGF-b + +
Пролиферация и
дифференцировка
Слайд 62Регуляция специфичности иммунного ответа
1. T клетки могут помогать только тем
В-клетками, которые презентируют им антиген.
2. B клетки выполняют функцию презентации
антигена, то есть являются профессиональными антигенпредставляющими клетками.
3. B клетки наиболее эффективно поглощают те антигены, которые обладают наибольшим сродством к их В – клеточным рецепторам.
4. Т и В клетки помогают друг другу, что усиливает иммунный ответ на один и тот же антиген.
После окончания ответа остаются Т и В – клетки памяти
Слайд 63Связь между В клеткой (красный цвет)
И Т клеткой (зеленый цвет)
Слайд 64T клетка (в центре) , окруженная В – клетками,
цитоскелет
окрашен зеленым цветом
Слайд 65Свойства антител
Нейтрализация
Опсонизация
Активация системы комплемента
Слайд 66Эффекторные механизмы защиты против внеклеточных патогенов
НЕЙТРАЛИЗАЦИЯ
Нейтрализующие антитела
БАКТЕРИЯ
ТОКСИН
Слайд 67Эффекторные механизмы защиты против внеклеточных патогенов
ОПСОНИЗАЦИЯ
ОПСОНИЗАЦИЯ
Слайд 68Эффекторные механизмы защиты против внеклеточных патогенов
Активация комплемента
лизис
Слайд 69Вопросы
Фазы адаптивного иммунного ответа.
Типы иммунного ответа и факторы, их определяющие.
В-лимфоцит
как антигенпредставляющая клетка.
Взаимодействие В-лимфоцита и Т-лимфоцита-хелпера.
Активация и пролиферация В-лимфоцитов.
Дифференцировка В-лимфоцитов
в плазматические клетки и клетки памяти.
Общая характеристика и строение молекулы иммуноглобулина.
Характеристика классов иммуноглобулинов.
Механизмы взаимодействия антигенов и антител
Свойства и эффекторные функции антител.
Слайд 70Тестовые вопросы
Антитела обладают способностью:
Расщеплять антиген
Активировать комплемент
Специфически связывать антиген
Фагоцитировать антиген
Экспрессировать антиген
Основным
классом иммуноглобулинов, участвующим в защите слизистых оболочек, является:
IgA
IgG
IgE
IgD
IgM
Слайд 71Тестовые вопросы
К «цитофильным» иммуноглобулинам относятся:
IgA
IgG
IgM
IgE
IgD
Основными иммуноглобулинами вторичного ответа являются:
IgA
IgG
IgM
IgE
IgD
Слайд 72Тестовые вопросы
К «цитофильным» иммуноглобулинам относятся:
IgA
IgG
IgM
IgE
IgD
Основными иммуноглобулинами вторичного ответа являются:
IgA
IgG
IgM
IgE
IgD
Слайд 73Тестовые вопросы
К «цитофильным» иммуноглобулинам относятся:
IgA
IgG
IgM
IgE
IgD
Основными иммуноглобулинами вторичного ответа являются:
IgA
IgG
IgM
IgE
IgD
Слайд 74Тестовые вопросы
Активировать систему комплемента по классическому пути способны:
IgA
IgG
IgM
IgE
IgD
Изотипы иммуноглобулинов определяются:
Строением легких цепей.
Строением тяжелых цепей.
Способностью образовывать
глобулярные структуры.
Способностью активировать комплемент.
Способностью диффундировать в ткани.
Слайд 75Тестовые вопросы
Через плаценту проникает:
IgA
IgG
IgM
IgE
IgD
Основными иммуноглобулинами первичного ответа
являются:
IgA
IgG
IgM
IgD
IgE
Слайд 76Тестовые вопросы
К «цитофильным» иммуноглобулинам относятся:
IgA
IgG
IgM
IgE
IgD
Основными иммуноглобулинами вторичного ответа являются:
IgA
IgG
IgM
IgE
IgD