ИФА диагностикасы

классификациясы
Қатты фазалы ИФА
ИФА тікелей әдісі
Тікелей емес ИФА
Сэндвич- әдіс
Конкурентті ИФА
Ингибиторный

ИФА
Иммуноферментті дақ әдісі
Нәтижені есептеу
ИФА-ның тәжірибеде қолданылуы
ИФА көмегімен анықталатын инфекциялар
Қорытынды

алдын-ала антиген адсорбирленіп алынады.

тазартылған антигенінің арасында болады, ол иммунологиялық планшеттің лункасының беткейіне бекітіледі.
Пайда

болған иммунды комплекстерді анықтау үшін екінші иммунологиялық реакция жүргізіледі, бұл кезде антиген ретінде байланысқан спецификалық Ig, ал антидене ретінде – конъюгат алынады.
Әрі қарай конъюгат молекуласының ферментті бөлігімен катализирленетін ферментативті реакция жүреді. Бұл реакцияның субстраты түссіз зат - хромоген , реакция барысында боялған затқа айналады. Лункадағы боялу интенсивтілігі иммуноглобулин сынамасының құрамындағының санына байланысты.

келесі қасиеттерге ие болуы керек:
- үлкен ерітіндіде қолдану үшін, жоғары

антидене титрімен және жоғары антигенге ұқсастыққа ие , сондықтан ол спецификалық емес байланысты төмендетеді.
- Ертінді спецификалылығы жеткілікті болу керек;
- Мономерлі түрі полмерліден басымболуы крек,
- Фермент пен антидене арасында оптимальды молярлы қатынас болады (оптимальды қатынасы 1:1);
- Конъгаттың жеткіліңті ферментативті активтілігі.

келесі факторлармен анықталады:

 антиденелер ұқсастығы, моноклональды антиденелерді пайдалану ;

 ферменттің спецификалық активтілігі ;
 сигналдың интенсивтілігі;
 сигналды ескру сезімталдығы.

ИФА ның орташа сезімталдығы – 10-9 – 10-12 моль.

және конкурентті емес әдістер.
А) Конкурентті ИФА-да бірінші сатыда жүйеде бір

уақытта талданып жатқан байланыс және оның аналогы болады.
Б) Конкурентті емес әдіс үшін бірінші сатыда тек талданып жатқан байланыс және спецификалық байланысу орталығы тән.

болып бөлінеді.


Гомогенді ИФА негізіне , төмен молекулярлы субстанцияларды анықтау үшін

қолданылатын, антиген немесе антиденемен байланысатын ферменттің белсенділігінің ингибирленуі жатады. Ферменттің белсенділігі антиген-антидене реакциясының қорытындысы негізінде қалпына келеді.
Гетерогенді әдіс үшін анализді екіфазалы жүйеде қатты фазалы- тасымалдаушы қатысуымен жүргізу тән.Міндетті сатысы иммунды комплексті әсер көрсетпеген компоненттен бөлу. Иммунды комплекстің бірінші сатыда түзілуі қатты фазада жүреді – қатты фазалы әдіс деп аталады.

Заттың концентрациясын (антигена или антидене) тікелей анықтау бірге әсер ететін

байланыс орталықтарымен қатар жүреді. Бұл жағдайда ферментті белгі пайда болған спецификалық АГ-АД комплексте болады. Анықталып отырған заттың концентрациясы тіркелген сигналға тікелей пропорционал болады.
Б) Байланысу орындарының жалпы санының әртүрлілігі және қалған бос байланысу орталықтарына байланысты заттың концентрациясын анықтау.Бұл кезде анықталатын заттың концентрациясы өседі, тіркелетін сигнал төмендейді.

үшін әртүрлі материалдарды қолдануға болады: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен және т.б.

Қатты фаза ретінде пробирка қабырғасы, 96-ай тәрізді және басқа. планшеттер, шариктер, нитроцеллюлозды және басқа мембраналар.
Осы фазада антиген және антидененің иммобилизациясы 3 жолмен жүреді:
– пассивті адсорбция, белоктар және синтетикалық беткеймен қатты гидрофобты әсерге негізделген;
– қатты фазаға ковалентті байланыс;
– иммунохимиялық . (коваленті емес және адсорбционды емес байланыс).

Боялу интенсивтілігіне байланысты нақты нәтижені бағалау ИФАда сәйкес светофильтрмен бағаланады.

Жүргізілген анализ қорытындысы бойынша ,концентрациясынан оптикалық тығыздық графигі тұрғызылыды.

қолданылады.
Тақтайша лункаларында стандартты антиген адсорбирленеді және науқастан алынған

сарысу немесе басқа биологиялық материал үлгісі (жұлын сұйықтығы, сілекей және т.б)инкубацияланады.
Қатты фазада антигенмен байланысқан спецификалық антиденені конъюгаттың антиглобулині көмегімен анықталады.

Антидене ферменттері антидене байланыстыратын бірнеше эпитоптардан тұрады.
ИФА-ның бұл

түрін жүргізгенде жоғарыспецификалық поли немесе моноклоналды антиденелер қатты фазада келесідй инкубирленеді.

Шаю процедурасынан кейін лункаларға ферментпен белгіленген антиденені қосады, ары қарай антигенге реакцияның барлық қалған этаптарын жүргізеді. Спецификалық комплекстің эффективтілігінің түзілуі анализдің әр деңгейінде антиген –антидене реакциясын байланыстыратын константаға байланысты.

адсорбирленген антигенмен байланысы үшін бәсекелестігі.
Қатты фазаға байланысқан

ферменттің саны қосындыда бос антидене болуына байланысты пропорциональды төмендейді..

Антигенді анықтау үшінсол нұсқа қолданылады,бірақ бұл жағдайда қалған антиген стандартты антигенмен антидене байланысы үшін бәсекелеседі.

белгіленетін моноклональды антиденелермен байланысады және иммобилизирленген қатты фазада олардың стандартты

антигенімен әсерін ингибирлейді.
Конъюгатқа спецификалы антигеннің үлгіде аз бөлігінің болуының өзі белгіленген антидененің иммобилизирленген антигенмен байланысын ингибирлейді.
Ингибирлену деңгейі ерітінді құрамындағы антигенге тікелей пропорциональды.Сан анализін жасау үшін калибрленген қисық сызықты құрады.

қолданылады.
5

фотометрлеу жүргізіледі.

Нәтижені есептеу үшін арнайы құрылғы қолданады.

Бақылау сынамаларының оптикалық

тығыздығын салыстыру үшін анализ нәтижесіне математикалық есеп жүргізіледі.

Ұяшықтағы оптикалық тығыздық артқан сайын ,сынамады спецификалық антидене саны арта түседі.

спецификалық антигендер немесе антиденелердіанықтау үшін);
• Биологиялық үлгілерден гормондарды және

дәрілік препараттарды анықтау;
• Антигене қарсы антидене изотиптерін анықтау;
• Иммунды комплекстерді анықтау;
• Онкомаркерлерді анықтау;
• Қан сарысуынан белокты анықтау (ферритин, фибронектин);
• Жалпы IgE және спецификалық IgE антиденелерін анықтау;
• Моноклональды антиденелер скринингі;
• Биологиялық сұйықтықтан цитокиндерді анықтау.

бірге), ВИЧ-инфекциясы, вирусты гепатиттер.
Хламидия инфекциясының диагностикасы үшін , цитомегаловирусты

инфекция және басқа герпестік инфекциялар.  
Қанда антидене деңгейін анықтау біріншілік жыныс жолдарымен берілетін инфекция диагностикасы үшін қажет емес.
ИФА нәтижесі бойынша микропреципитация реакциясымен бірге сифилисты таниды.

ие. 0,05 нг/мл концентрацияны анықтау үшін жоғары сезімталдыққа ие. Зерттелетін

заттардың минимальды көлемін қолдануға болады. ИФА-ны жүргізу үшін керекті ингридиенттерді сақтауда тұрақты. Реакцияны жүргізу ыңғайлы. Реакцияның барлық этаптарының автоматизациясы. Диагностикалық құралдардың төмен бағада болуы. Өзінің жоғары емес бағасына байланысты және экологиялық қауіпсіздігіне байланысты ИФА барлық «рутинді» анализдерді артқа қалдырды.

в диагностике интерн кафедры «Клинической лабораторной диагностики» Российский государственный медицинский

университет 2009
2. Кишкун А.А. Иммунологические исследования и методы диагностики инфекционных заболеваний в клинической практике. Медицинское информационное агентство, 2009 г.
3. Кондратьева И.А. Практикум по иммунологии. Учебное пособие для ВУЗов. Академия,2004 г.