Культивирование бактерий. Изучение культуральных

Изучение культуральных свойств»
2015 г. Ростов-на-Дону

дыхание , рост и размножение бактерий;
Классификация ферментов;
Способы питания бактерий;
Рост и

размножение бактерий;
Выделение чистой культуры бактерий;
Методы культивирования;
Методы выделений чистых культур микроорганизмов;
Культуральные свойства;
Ферментативная активность;
Сохранение культур;
Особенности культивирования риккетсий и хламидий .Культивирование анаэробов .

клетки приостанавливает процессы метаболизма и размножения , но не убивает

её.
Белки – 40-80 % сухой массы бактерий . Они участвуют в процессах метаболизма ,обладают ферментативной активностью .Белки обладают антигенными и иммуногенными свойствами ,вирулентностью и видовой принадлежностью
Нуклеиновые кислоты – 10-30 % сухой массы .ДНК определяет наследственность. РНК – информационная , матричная , транспортная , рибосомальная. Участвуют в биосинтезе белка.
Углеводы – моно- и дисахариды составляют 12-18 % сухой массы . Полисахариды часто входят в состав капсул . Крахмал и гликоген являются запасными питательными веществами.
Липиды входят в состав цитоплазматической мембраны и её производных .В цитоплазме откладываются на запас. Липиды представлены фосфолипидами ,жирными кислотами и глицерином
Минеральные вещества – 2-14 % сухой массы .Фосфор ,калий , натрий , сера ,железо , кальций ,магний , а также микроэлементы – цинк, медь ,кобальт , барий , марганец. Они участвуют в регуляции осмотического давления , окислительно-восстановительных реакциях , активируют ферменты и входят в состав витаминов

В состав бактерий входят белки , жиры , НК , углеводы , липиды , минеральные вещества .

бактерий.
Ферменты – биологические катализаторы . Они катализируют тысячи химических реакций

, из которых слагается метаболизм микроорганизма. Ферменты представляют собой белки с молекулярной массой от 10 000 до нескольких миллионов . Название ферменту даётся по веществу ,на которое он действует ,с изменённым окончанием на «аза». Фермент получает название ,которое указывает на природу катализируемой им химической реакции . Ферменты синтезируются самой микробной клеткой и имеют сложное строение .Некоторые состоят из белка – протеина ,а другие представляют собой протеиды , состоящие из белка – апофермента и структуры небелковой природы – кофермента . В этом случае апофермент соединяется с активной группой изменяемого вещества ,а кофермент способствует течению реакции .

Они играют большую роль в процессах биологического получения энергии.(НАД,НАДФ,ФАД)
Трансферазы –

катализируют перенос отдельных радикалов,чаще имолекул или целых атомных группировок от одних соединений к другим.(аминотрансферазы,фосфорилазы)
Гидролазы катализируют реакции расщепления и синтеза таких сложных соединений , как белки , жиры и углеводы,с участием воды (липазы.фосфатазы)
Лиазы включают в себя ферменты ,катализирующие отщепление от субстратов определённых химических групп с образованием двойных связей или присоединение отдельных групп или радикалов к двойным связям
Изомеразы осуществляют превращение органических соединений в их изомеры (триозофосфатизомераза ,глюкозофосфатизомераза).
Лигазы катализируют синтез сложных органических органических соединений из простых (карбоксигазы)

клеток углекислый газ .
Гетеротрофы – питаются готовыми органическими соединениями
Сапрофиты –

гетеротрофы , утилизирующие органические остатки отмерших организмов
Паразиты – бактерии , существующие за счёт органических веществ живых клеток и тканей ,вызывающие заболевания у человека или животных
Фототрофы – фотосинтезирующие бактерии
Хемотрофы – бактерии , синтезирующие химическую энергию

самой бактериальной клетки
Размножение – самовоспроизведение , приводящее к увеличению количества

бактериальных клеток и популяции.








Бактерии размножаются бинарным делением пополам .реже –почкованием.

,их значение для дифференциации бактерий
Чистую культуру можно получить из единой

клетки или отдельной колонии
Способ посева микроорганизмов:
Посев из пробирки в пробирку
Посев на пробирке с чашкой Петри
Метод культивирования :
Температура
Влажность
Сроки культивирования
Аэрация
Пассивная аэрация
Активная аэрация
Методы выделения чистых культур микроорганизмов :
Рассев петлей
Бактериостатический метод

аэрация – культивирование на плотных и жидких средах в сосудах

,закрытых ватным тампоном, или в чашках Петри
Активная аэрация(выращивают в больших объёмах. Сроки культивирования – 18-24 часа ,но есть виды , растущие медленно (до 4-6 недель)

. Берут одну чашку Петри с питательным агаром и делят

её на четыре сектора , проводя разграничение линии на внешней стороне дна чашки . Исследуемый материал петлёй вносят в первый сектор и проводят ею параллельные линии по всему сектору .Этой же петлёй ,не изменяя её положения по отношению к агару , проводят такие же линии на других секторах чашки .В том же месте ,где на агар попало большое количество микробных клеток ,рост микроорганизмов будет в виде сплошного штриха. На секторах с небольшим количеством клеток вырастают отдельные колонии .
Бактериостатический метод (метод ингибирования) основан на различном действии некоторых химических веществ и антибиотиков на микроорганизмы .Определённые вещества угнетают рост одних микроорганизмов и не оказывают влияния на другие .

хорошо растут на простых средах ,другие – только на специальных

.Микроорганизмы могут давать пышный рост или скудный .Культуры могут быть бесцветными ,сероватыми , серо-голубыми . На плотных средах микроорганизмы образуют сплошной налёт или изолированные колонии .В полужидких средах микроорганизмы вызывают помутнение толщи среды .В жидких – микроорганизмы образуют равномерную муть ,дают осадок или плёнку.

Плотная питательная среда

Полужидкая питательная среда

Жидкая питательная среда

его варианты (биовары) . Расщепление углеводов (сахаролитическая активность),то есть способность

расщеплять сахара и многоатомные спирты с образованием кислоты или кислоты и газа ,изучают на средах Гисса ,которые содержат тот или иной углевод или индикатор ,изменяющий окраску среды . Эти среды называются «пёстрый ряд» .

Протеолитические свойства (способность расщеплять белки , полипептиды) изучают на средах с желатином ,молоком , сывороткой ,пептоном . При росте на желатиновой среде микробов , ферментирующих желатин ,среда разжижается .
Гемолитические свойства (способность разрушать эритроциты ) изучают на средах с кровью .Жидкие среды становятся прозрачными ,а на плотных средах вокруг колонии появляется прозрачная зона .

вакууме из замороженного состояния позволяет создать состояние анабиоза . Высушивание

проводят в специальных аппаратах . Хранят культуры при 4’С ,лучше при -30…+70 ’С . Длительно сохранять культуры можно также в жидком азоте (-196 ’С) в специальных приборах .
Методы длительного сохранения культур :
Субкультивирование ;
Сохранение под слоем масла;
Хранение при – 20…+70 ’С;
Хранение в запаянных пробирках .По мере необходимости сохраняемый материал высевают на свежую среду .

культивирования риккетсий и вирусов используют три метода : культуру ткани

, развивающийся куриный эмбрион и заражение восприимчивых животных .Культура ткани – кусочек органа или отдельные клетки различных тканей (культура клеток),которые живут и размножаются вне организма в питательной среде .Ткани культивируют в стеклянной химически чистой стерильной посуде из нейтрального стекла .Культивирование вирусов и риккетсий можно проводить в растущих и переживающих тканях . Экспериментальные животные используются для выделения риккетсий и вирусов из исследуемого материала ,а также для получения больших количеств этих микроорганизмов .