Практическое занятие № 11 АНТИГЕНЫ. АНТИТЕЛА. ПРИМЕНЕНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

ДИАГНОСТИКЕ: СЕРОИНДИКАЦИЯ, СЕРОИДЕНТИФИКАЦИЯ , ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СЫВОРОТКИ.

микробного, которые способны вызывать в организме ответную специфическую иммунную реакцию

и принимать участие в её осуществлении.
Свойства антигенов:
1. Иммуногенность - способность АГ вызывать иммунный ответ ( иммунологические реакции).
2.Антигенность — способность АГ специфически реагировать с АТ и рецепторами лимфоцитов.
3.Специфичность - каждый АГ имеет специфический участок - эпитоп (уникальные фрагменты), за счет которого они могут вступать в реакцию с АТ или Т-лимфоцитом.

иммунологических взаимодействиях, но не способные активировать самостоятельно иммунный ответ. Лишь

после присоединения к крупным (обычно белковым) молекулам, гаптен может приобрести свойства полного антигена.

-Комплексные- состоят из нескольких АГ.
Микробная клетка обладает множеством антигенов, свойственных отдельным ее структурам.

рода или семейства)
б) видоспецифические (встречаются у 1 вида)
в) типоспецифические (делят

вид на серологические варианты - серовары)

исключение полипептид) связаны с ЛПС клеточной стенки и капсулой.
б)

Соматический АГ или О-АГ- связан с бактериальной клеточной стенкой, у Гр- бактерий связан с ЛПС клеточной стенки, термостабилен, не разрушается после обработки формалином, этанолом.
в) Жгутиковые Н-антигены – входят в состав бактериальных жгутиков. Это белок флагелин, разрушается при нагревании, но сохраняет свои антигенные свойства после обработки фенолом.
г) Антигены бактериальных токсинов. Токсины бактерий обладают полноценными антигенными свойствами в том случае, если они являются растворимыми соединениями белковой природы.
Ферменты, продуцируемые бактериями, также обладают антигенными свойствами.

свойством которых является способность к специфическому взаимодействию с АГ.

Свойствами антител

обладают белковые молекулы, называемые иммуноглобулинами.

где происходит связывание с АГ.
Fс фрагмент - осуществляет эффекторные функции:

связывание с рецепторами, которые экспрессированы на клетках организма (например, фагоцитах)

образование хлопьев.
Различают прямую и непрямую (пассивную) агглютинации.
Реакция преципитации- в реакции

участвуют растворимые АГ.
Результат взаимодействия АГ+АТ= видимое глазом помутнение или преципитат.
Различают: кольца преципитации и преципитация в геле.

logos — учение) - это обнаружение неизвестного АГ или АТ

по второму известному реагенту in vitro.
Принцип состоит во взаимодействии специфических АГ и АТ.
Свойства серологических реакций:
1.Специфичность (определенный АГ взаимодействует с определенным АТ)
2.Чувствительность (для протекания реакции достаточно очень малого количества АТ/АГ (в пикограммах))

исследуемом материале без выделения чистой культуры с помощью диагностических сывороток

(препарат из заведомо известных АТ). Реакции: -РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) -ИФА (иммуноферментный ) -РП (реакция преципитации) -РИФ (реакция иммунофлюорисценции)
2. Сероидентификация- определение АГ в чистой культуре возбудителя с помощью известных АТ (диагностической сыворотки). Проводиться на 3 этапе бак.метода. Реакции: -РА(реакция агглютинации) -реже РП (реакция преципитации)
3.Серодиагностика - это обнаружение неизвестных АТ в сыворотке крови больного с помощью диагностикумов(зараннее известные АГ). Самостоятельный метод диагностики инфекционных заболеваний – серологический метод. Реакции: -РПГА -РА -РСК(реакция связывания комплемента) -нРИФ -ИФА

на стекле
2. Исследуемый материал (в нем ищут АГ) + диагностическая

сыворотка (Суспензионные антитела – получают путем иммунизации лабораторных животных корпускулярным антигеном, с последующей адсорбцией иммуноглобулинов Fc-фрагментом на эритроцитах I группы крови человека, предварительно обработанных танином или формалином для улучшения адсорбционных свойств последних.)
3.Учет реакции: «+» Хлопья красного цвета «-» Отсутствие хлопьев

+диагностическая сыворотка (Преципитирующая - содержит АТ к растворенным АГ (некорпускулярным).

Наслаивают на исследуемый материал по стеке пробирки.
3.Результат:
«+» на границе растворов образуется помутнение в виде кольца
«-» на границе растворов нет кольца

+диагностическую сыворотку (Люминесцирующая сыворотка получают путем иммунизации лабораторных животных корпускулярным

антигеном, с последующим присоединением к иммуноглобулину (Fc фрагменту) люминесцентной (флюоресцентной) метки, например ФИТЦ). Инкубируем. Промываем (удаление не связавшихся компонентов реакции).
Результат: люминесцентная микроскопия «+»- свечение, «-» нет свечения.

первые АТ + Исследуемый материал. Инкубация. Отмывка. Внесение вторых АТ к

этому АГ, которые несут ферментную метку (пероксидаза). Инкубация. Отмывка. + S к ферментной метке (Н2О2) взаимодействие = E-S комплекс + хромоген (индикатор). Инкубация.
Результат:
1.С помощью спектрофотометра (ридера) по оптической плотности.
2. Глазом цвет(голубой)(+) или бесцветный (-)

белого цвета,
«-» отсутствие хлопьев.

Различают неадсорбированные (содержат полный набор антител) и адсорбированные (удалены ненужные

антитела).
Ненужные антитела удаляют адсорбцией по Кастелани: иммунизируют лабораторных животных корпускулярным антигеном, с последующим добавлением в полученную сыворотку микроорганизмов, имеющих в структуре антигены, сходные по структуре с теми, на которые наработались ненужные антитела. Т.о. ненужные антитела взаимодействуют с антигенами микроорганизмов и выпадают в осадок.

культуры (экзотоксины)
1.Чашка Петри
2.Питательный агар (гель) + антитоксическая диагностическая сыворотка.
3.Результат: «+»

образование полос (усов) преципитации, «-» отсутствие полос преципитации.
4.Трактовка «+» - токсигенная культура,
«-» не токсигенная культура.

Неадсорбированные
-Агглютинирующие
Адсорбированные
-Преципитирующие

-Антитоксические

-Лизирующие