Схема - строение светового микроскопа

виды гистологических препаратов:
а) срезы органов (толщиной 5-15 нм), б) мазки

(крови, костного мозга и т.д.) и отпечатки (напр., селезёнки), в) плёнки (брюшины, мягкой мозговой оболочки), или тотальные препараты
Чаще всего используются срезы.
2. Приготовление препарата обычно включает 5 следующих этапов:
а) взятие и фиксация материала, б) обезвоживание и уплотнение материала, в) приготовление срезов, г) окрашивание препаратов и д) заключение в консервирующую среду.

разложение извлеченных из организма тканей под действием собственных ферментов и

способствует сохранению целостности клеточных и тканевых структур. Воздействуя на ткани, фиксатор (например, формалин, спирт, пикриновая кислота или различные сложные смеси веществ), вызывает необратимую коагуляцию белков и быструю гибель клеток.

для удаления из него воды. Оно необходимо для выполнения следующего

этапа обработки материала - его заливки

парафином, целлоидином или специальной пластической массой. В результате заливки после

охлаждения парафина или полимеризации пластмассы кусочек ткани (блок) становится достаточно плотным для получения тонких срезов при резке.

особых стальных ножей - бритв. При этом обычно получают срезы

залитого в парафин или другую среду материала толщиной 5-7 мкм (в оптимальном варианте - серийные, т.е. следующие один за другим в виде непрерывной ленты).

парафиновый блок с заключенным в него образцом;

3 – срез;

4 –

подающее устройство

Однако этого можно избежать путем придерживания и приподнимания среза кисточкой

за передний его край в процессе резки.

необходимо изучить объект в короткий промежуток времени, используют замораживающие микротомы,

снабженные замораживающим столиком, на котором укрепляется исследуемый объект. Столик гибким шлангом соединен с металлическим баллоном, в котором находится жидкая углекислота. Для замораживания тканевых блоков применяют также термоэлектрический охлаждающий столик (ТОС-1)

удаления из них парафина (депарафинирования). Окрашивание позволяет выявить различные структурные

компоненты тканей и клеток благодаря их неодинаковому сродству к гистологическим красителям.

типа:

и кислый красители.
в) Поэтому позволяет выявить почти все клетки

и многие неклеточные структуры.
2. При этом
ядра прокрашиваются гематоксилином, т.е. приобретают сине-фиолетовый цвет,
а цитоплазма красится эозином в желтовато-розовый цвет.
3. Замечание: используемый гематоксилин готовится по методу Эрлиха: окисляется до гематеина калийными квасцами.

видны кишечные ворсинки (1): они находятся на внутренней поверхности тонкой

кишки.
б) Ворсинки покрыты одним слоем эпителиальных клеток.
в) Ядра (2) этих клеток – фиолетового,
а цитоплазма (3) – розового цвета.

и красного костного мозга. Здесь тоже используются 2 красителя:

основной – азур II, окрашивающий базофильные структуры в тёмно-синий цвет,
и кислый – эозин, красящий оксифильные структуры в ярко-розовый цвет.
2. Отличия от приготовления срезов таковы:
фиксацию мазков проводят чистым метанолом;
окрашивание продолжают всего 30-45 мин, а не несколько часов;
для заключения под покровное стекло используют кедровое масло, а не канадский бальзам.
3. В результате
эритроциты приобретают розовый цвет,
цитоплазма большинства лейкоцитов – голубой или синий цвет,
цитоплазматические гранулы окрашиваются в зависимости от их природы.

(1) с очень мелкой нейтрофильной (фиолетово-розовой) зернистостью в цитоплазме,

а также гораздо более мелкие тромбоциты.

обрабатывают (протравляют) железноаммиачными квасцами,
а потом обрабатывают гематоксилином.
2.

Структуры приобретают коричневато-серый цвет.
3. Хорошо выявляются
структуры ядра,
границы клеток,
мышечные волокна.
Препарат - срез языка.
В мышечных волокнах видны ядра (1) и отчётливая поперечная исчерченность.

кислого фуксина, анилинового синего и оранжевого G.
2. Коллагеновые волокна

окрашиваются в синий цвет.

Препарат - срез мышцы.

Мышечные волокна (1) – розовые,

а прослойки соединительной
ткани (2 и 3) между
ними – синие.

снимке - женская половая клетка (ооцит), находящаяся в фолликуле яичника.

Цитоплазма (1) клетки окрашена в слабо-розовый,
окружающая её блестящая оболочка (2) - в сине-голубой,
а ядра фолликулярных
клеток (3) - в фиолетовый цвет.
2. Синий цвет блестящей оболочки свидетельствует о том, что в ней, помимо прочих компонентов, содержатся коллагеновые волокна.
Окраска по Маллори используется не только для выявления компонентов соединительной ткани, но и в иных целях, например, для дифференциации эндокринных клеток гипофиза.

кислый фуксин:
коллагеновые волокна окрашиваются в ярко-красный цвет,

а элементы других тканей (напр., мышечные волокна) – в жёлтый цвет.

серебра, а затем – восстановителями.
2. Выделяющееся серебро осаждается на

ретикулярных (аргирофильных) волокнах (богатых SH-группами), и волокна приобретают чёрный цвет.

Препарат - срез лимфоузла.

Видны многочисленные ретикулярные волокна (1), образующие густую сеть.

приобретают вишнёвый цвет;
остальные структуры – слабо-розовый.
Препарат -

срез аорты.
В её средней оболочке (II) обнаруживаются многочисленные эластические мембраны (1) – в виде толстых извилистых линий, расположенных концентрически.

коллагеновые волокна – в красный цвет,
ядра клеток

– в фиолетовый цвет.

Препарат – срез
эластической связки.

Видны пучки
эластических волокон (1)
и между ними – клетки
(фиброциты) (2).

для размягчения подвергают декальцинации (с помощью кислоты).
2. Краситель –

раствор тионина.
3. Стенки костных полостей и канальцев (выстланные сетью коллагеновых волокон) окрашиваются в тёмно-коричневый цвет; остальной фон – светло-коричневый.

Препарат - срез трубчатой кости.

В костном веществе видны
костные полости (1), содержащие тела
костных клеток (остеоцитов),
и костные канальцы (2), содержащие
отростки остеоцитов.

В этом методе
фиксацию материала в формалине проводят не

менее 7 дней,
а уплотнение образца осуществляют путём замораживания.
2. При окрашивании срез обрабатывают растворами
азотнокислого серебра,
формалина,
аммиачного серебра.
3. Клетки и волокна нервной системы окрашиваются в чёрный цвет, а окружающие ткани – в светло-коричневый цвет.

имеющие

тёмную цитоплазму,
более светлое ядро (1) и

отростки (2 и 3).

служит толуидиновый синий, окрашивающий умеренно базофильные соединения в синий цвет.

2. Таким образом в цитоплазме нервных клеток обнаруживаются глыбки базофильного вещества (т.н. субстанция Ниссля).

Препарат - срез спинного мозга.

Вышеуказанные глыбки содержатся в теле (1) нейрона и в некоторых отростках (2).

выявления всех структур, богатых липидами или жирами, – мембран, жировых

или липидных капель и т.д.
2. Растворяя в себе осмиевую кислоту, эти структуры приобретают чёрный цвет.

поперечные срезы миелиновых нервных волокон.
У каждого из них

светлый осевой цилиндр (1) окружён толстой миелиновой оболочкой (2).
Последняя имеет мембранную природу и потому – осмиофильна.

химическим реактивом и определённым компонентом препарата.
Образующийся продукт реакции

имеет окраску, отличную от окраски исходного реактива

красителей: метилового зелёного и пиронина.
2. Пиронин окрашивает структуры, богатые

РНК, в малиновый цвет. Другие структуры – зелёные.
3. Чтобы проверить специфичность окраски, делают контрольный препарат, который перед окрашиванием обрабатывают рибонуклеазой.

Препарат - срез поджелудочной железы.

В малиновый цвет окрашены
цитоплазма (1) и
ядрышки (2) секреторных клеток – из-за высокого содержания в них РНК (в составе рибосом и их предшественников).

кислота (реактив Шиффа).
2. а) Под его действием ДНК-содержащие структуры

окрашиваются в вишнёвый цвет.
б) Прочие структуры – зелёные.

Препарат - срез печени.
Распределение окраски – противоположное предыдущему:
в вишнёвый цвет красится хроматин (1) в ядрах,
а ядрышки (2) и цитоплазма (3) клеток оказываются зелёными.

с бромфеноловым синим (у белков - тёмно-фиолетовая окраска);
со

смесью нингидрин-реактив Шиффа (белки приобретают красный цвет).

буквы и составляют аббревиатуру ШИК).

2. Периодат способствует образованию в

субстрате альдегидной группы, которая взаимодействует с реактивом Шиффа.

3. На препарате ШИК-положительные компоненты (например, гранулы гликогена) имеют фиолетовый или тёмно-красный цвет.

ворсинка.

В составе покрывающего её эпителия выделяются своей фиолетовой

цитоплазмой т.н. бокаловидные клетки (1).
Эти клетки активно секретируют слизь, отчего в их цитоплазме накапливаются полисахариды – компоненты слизи.

толуидинового синего с веществами, содержащими много кислотных групп, наблюдается метахромазия

– изменение окраски с синей на фиолетовую и красную.
2. Подобным свойством обладают, в частности, компоненты межклеточного аморфного вещества соединительной ткани – гликозамингликаны (являющиеся гетерополисахаридами с высоким содержанием кислотных радикалов).

гликозаминогликанами.

уже отмечалось, судан III – представитель индифферентных, или липофильных, красителей.

2. Проникая в клетки, он растворяется в жировых и липидных каплях и тем самым окрашивает их в ярко-оранжевый цвет.

тотальным, т.е. перед нами - не срез органа, а участок

сальника, растянутый на предметном стекле.
Видны жировые клетки;
каждая из них содержит крупную каплю жира (1), которая
занимает почти всю цитоплазму и
окрашена в ярко-оранжевый цвет.
Клеточные ядра (2) должны краситься гематоксилином в фиолетовый цвет. В данном случае они окрашены весьма слабо.
Ядро оттесняется жировой каплей к периферии клетки.