Стресс и его регуляция у растений. Механизмы оксидативного стресса

наблюдается дисбаланс между произведенными и детоксифицированными активными формами кислорода (АФК)

и свободными радикалами.

Современное дополнение – это также может быть и стресс-фактор, напрямую вызывающий продукцию АФК.

ответы растений на стрессоры. Пока не найдено ни одного стресс-фактора,

который бы хотя бы частично не действовал через индукцию оксидативного стресса.

2. Является универсальным «декодировщиком» стимулов, он играет основную роль в распознавании и усилении стресс-сигналов (в особенности, патогенных) и запускает иммунный ответа и генетические программы устойчивости (неспец. и спец.).

3. Выступает в роли индуктора программируемой клеткой смерти при дистрессе.

Поэтому АФК часто относят к «гормонам» стресса или «регуляторам» стресса.
Другой такой регулятор - это цитоплазматический Са2+

вещества, имеющие
более активный кислород

Свободный радикал, если имеет неспаренный электрон,

и может существует несвязанно

АФА – активные формы азота – у растений найдены, но функция в стрессе не до конца ясна

3.1 -
3.9 µс

1 нс

< 1с

1 µс – 1 мс

радикалов в живых системах:

массы H2O – превалирует по массе в живых системах.

Атмосферный элементарный

O2 начал накапливаться с появлением первых растений и его содержание сейчас примерно 21% от всего объема воздуха.

Кислород – важнейший окислитель аэробного мира, включая живые системы, поскольку он второй по силе окислитель после фтора, который намного более редок в природе.

существует как свободная молекула, поэтому он свободный радикал. Но электроны

у данного молекулярного кислорода имеют однонаправленные спины. В виду спиновой рестрикции они малоактивны.

Для активации электронная конфигурация кислорода должна измениться – например, под действием внешней энергии.
Внешнюю энергию могут передать энергизированные электроны в ЭТЦ, ультрафиолет, некоторые химические реакции, кавитация, ионизирующая радиация и т.д.).

формы кислорода): вещества, содержащие кислород в более активной, чем в

О2 форме. Они не всегда радикалы (Н2О2).

Свободные радикалы (СР) – вещества, имеющие неспаренные электроны, и способные к свободной диффузии. Не все СР имеют в своем составе кислород, т.е. не все они АФК.

Переходные металлы (ПМ) – IUPAC: "an element whose atom has an incomplete d sub-shell, or which can give rise to cations with an incomplete d sub-shell". В клетке Fe2+/3+ и Cu+/2+ легко принимают и передают электроны, играя ключевую роль в активации О2.

Согласно IUPAC Gold Book переходные металлы «условно» не относят к СР, хотя они имеют неспаренные электроны.

Oxidation of tartaric acid in presence of iron. J Chem

Soc Trans 65: 899-911

Tartaric acid – винная кислота – обильна в вине и соке
Окисляющим агентом, на самом деле был гидроксильный радикал – наиболее сильный окислитель из АФК (Хабер и Вейс – 20-30-е годы открыли реакцию его биосинтеза)
Fe2+ + H2O2 → Fe3+ + ·OH + OH−

Классические реакции Фентона:
(I.) металл восстановленный + H2O2 → металл окисленный + •OH + OH−;
(II.) металл окисленный + H2O2 → металл восстановленный + HO2•- + H+

Примечательно, что в статье Фентона 1894 г. было
также открыто окислительное действие озона!

действием внешней энергии. Это могут быть энергизированные электроны в ЭТЦ,

ультрафиолет, некоторые химические реакции, кавитация, ионизирующая радиация и т.д.).

Классическая
Реакция Фентона
Внешний перенос электрона

Восстановление
кислорода

Неклассический синтез гидроксильного радикала
Внутренний перенос электрона (с образованием интермедиата)

Характерен для гемовых оксигеназ, цитохрома P450, superoxide reductases, и некоторых белков ФСII

«супероксид» или «супероксидный анион»)

Синтез супероксида лежит в начале большинства редокс-процессов

клетки. Это вещество чаще выступает в роли восстановителя, и является предшественников перекиси водорода.

•О-2 может реагировать с H+, формируя гидропероксильный радикал (гидропероксил): HO2•, который более реакционно-активен и более стабилен и, возможно, может проходить через водные каналы биомембран

В реакции дисмутации 2 молекулы HO2• дают O2 и H2O2.

Соотношение •O2-/HO2• возрастает с pH:
1/1 при pH 4.8
10/1 при pH 5.8
100/1 при pH 6.8

Stress Physiology” CABI, 2012, in press
Развитие представлений о механизмах оксидативного

стресса - до 80-х годов 20-го века

- радикальное окисление фотосинтетических пигментов и гемов, глиоксилатный путь (Асада, Халливел, Фойер, Бэйкер и др.)

по аналогии с животными и бактериями (супероксид в комплексах I

и III)

- гидроперекисное окисление липидов, цепные радикальные реакции – по аналогии с животными

детально:
http://www.plantstress.com/Articles/Oxidative%20Stress.htm

Япония)

впервые показано, что патогенные организмы – Phytophthora infestans –

вызывают у растений (клубни картофеля) биосинтез (de novo) АФК (супероксидного анионного радикала)

Doke N (1983) Generation of superoxide anion by potato tuber protoplasts during the hypersensitive response to hyphal wall components of Phytophthora infestans and specific inhibition of the reaction by suppressors of hypersensitivity. Physiol Plant Pathol 23: 359-367

Doke N, Miura N (1995) In vitro activation of NADPH-dependent O2- generating system in isolated plasmamembrane-rich fraction of potato tuber tissues by treatment with an elicitor from Phytophthora infestans and digitonin. Physiol Mol Plant Pathol 46: 17-28

Park HJ, Doke N, Miura Y, Kawakita K, Noritake T, Komatsubara H (1998) Induction of a systemic oxidative burst by elicitor-stimulated local oxidative burst in potato plant tissues: A possible systemic signaling in systemic acquired resistance. Plant Sci 138: 197-208

Брессана

показано, что абиотические стрессы, такие как засоление, засуха, холод и

др. вызывают
биосинтез de novo АФК

Сейчас установлено, что практически любой стресс-фактор среды может вызвать так называемый
оксидативный стресс (дисбаланс между генерацией и детоксификацией АФК, приводящий к окислительному повреждению клеточных компонентов и нарушению физиологических функций)

засоление

(расположены в плазматической мембране, «выбрасывают» электрон наружу, активируя О2 до

супероксида, 10 генов у арабидопсиса, цитоплазматический Са2+ является кофактором)

- пероксидазы (класс-III, свободные ферменты, продуцирующие пероксиды и гидроксильные радикалы, содержат гем, многие транспортируются в апопласт и вакуоль, 73 гена у арабидопсиса)

в других процессах – росте, гравитропизме, полярности, для действия гормонов

и при эмбриогенезе:

- например, работы лаборатории Стивена Фрая (Эдинбург) Анны Лизкай и Петера Шопфера (Фрейбург, Германия)

гидроксильный радикал, производимый в клеточной стенке из Н2О2 под действием связанного переходного металла (медь или железо), вызывает разрывы в полисахаридах и пектине, необходимые для роста клеток

кальциевая волна) – это код для внешних сигналов у клеток

растений (и животных тоже), которые «видят и слышат» окружающий мир при помощи мембранных рецепторов и волны изменения активности Са2+

За развитие представлений о сигнальной роли Са2+ дали
3 Нобелевские премии

цитоплазма:
[Са2+] = 100 нM

мембрана

канал

клеточная стенка
(наружная среда):
[Са2+] = 0.1-1 мM

Са2+

катионный

ферменты,
гены

внеклеточное пространство вблизи плазмалеммы и сайты локализации свободных пероксидаз типа-III.

Рисунок ниже – ЭТЦ фотосинтеза – ФС2 - согласно EPR-анализу – утечка электрона на кислород (супероксид генерируется) идет около около феофитина (pheo.), первичного хинонового акцептора (QA) и цитохрома b559. Также в ФС2 одноэлектронное окисление H2O2 на (OEC) дает дополнительный супероксид в лумене.

Основным местом АФК-синтеза считается ФС1, где O2•-, вероятно, продуцируется на комплексе 4Fe-4S (кластеры X) на стороне стромы.

растений:

В хлоропластах O2•- супероксид-дисмутаза превращает супероксид в O2 и H2O2,

который детоксифицируется аскорбат пероксидазой (аскорбат + H2O2 → дегидроаскорбат + H2O).

В митохондриях O2•- супероксид-дисмутаза превращает супероксид в O2 и H2O2, который детоксифицируется глутатион-пероксидазой.

Есть факты, что в некоторых тканях растений в митохондриях работают аскорбат пероксидаза и каталаза.

Кроме детоксификации – системы репарации – ферменты восстановления поврежденных белков.

Cd2+, гербициды и другие ксенобиотики
приводят к синтезу супероксида в

пероксисомах.

Два сайта синтеза супероксида в пероксисомах:

1 - Ксантин-оксидаза в матриксе

2 - НАДН/НАДФН-зависимая малая ЭТЦ пероксисомальной мембраны (NADH:ferricyanide reductase, cytochrome b, monodehydroascorbate reductase and NADPH:cytochrome P450 reductase) в цитоплазме.

Супероксид-дисмутаза – основной АО пероксисом.

редуктаза
Восстановленный
глутатион
Окис-
ленный
глутатион
О•2-
Н2О
Дегидро-аскорбат
НАДФН
НАДФ
НАДФ
НАДФН