Слайд 1Виды ВЭЖХ по технике исполнения
Слайд 2Планарная
(тонкослойная) хроматография
Слайд 3Разделение веществ происходит на открытом слое сорбента
Хроматографический процесс обеспечивается
передвижением подвижной фазы (элюента) посредством капиллярных сил
Слайд 5Rf зависит от:
«Активности» и качества сорбента
Природы и качества
растворителей
Толщины слоя сорбента
Количества нанесенного вещества
Способа работы
Слайд 6Достоинства планарной хроматографии
Слайд 7 - единственный хроматографический метод, который позволяет проводить полный анализ неизвестной
смеси, т.к можно проверить, не осталось ли на старте неэлюированных
компонентов;
- по производительности, по крайней мере, на порядок, превосходит газовую и высокоэффективную жидкостную хроматографию;
- используется более простое и дешевое оборудование;
Слайд 8обладает высокой селективностью, которую легко варьировать, подбирая состав подвижной фазы;
- нет ограничений как в ВЭЖХ на выбор растворителей;
-
дает возможность одновременного разделения нескольких образцов в условиях однократного или многократного элюирования (при различных условиях);
- возможность детектировать соединения с высокой чувствительностью и селективностью, которые легко варьировать, подбором проявляющего реагента;
Слайд 9Недостатки планарной хроматографии
Слайд 10ограниченная разделяющая способность из-за сравнительно небольшой длины разделяющей зоны (3-10
см);
чувствительность ниже, чем в случае ВЭЖХ;
зависимость от окружающей среды: относительная
влажность, температура, а также наличие загрязняющих веществ в воздухе;
- трудности в работе с образцами, имеющими высокую летучесть, а также с веществами, чувствительными к кислороду воздуха или свету.
Слайд 11Области применения плоскостной
хроматографии
Слайд 12Методы элюирования в планарной хроматографии
Слайд 16Круговая хроматография
Подача элюента
Нанесение пробы
Зоны разделяемых
компонентов
Емкость с элюентом
Пластинка
Подача элюента
Слайд 17При нанесении пробы необходимо:
легкое удаление растворителя со стартовой
зоны;
растворимость анализируемых веществ должна быть не менее 0,01 г/мл;
растворитель не должен иметь высокую полярность, иначе зона на старте может быть размыта.
Слайд 23Подложки: стекло, алюминевая фольга, полимерные пленки
Связующие вещества : гипс (5-10%),
силиказоль, силикаты щелочных металлов, полиакриламид, полиакриловый эфир, крахмал
Флуоресцентный индикатор: смесь
силикатов цинка и магния и смесь сульфидов цинка и кадмия; вольфраматы щелочноземельных элементов
Слайд 24 образуют химически и физически стабильные слои;
не образуют ковалентных
связей с разделяемыми
веществами;
не растворяются
в подвижной фазе или перемещаются вместе с ней по пластинке;
не содержат компонентов, мешающих разделению или детектированию
не имеют собственной окраски;
не набухают и не сжимаются под действием подвижной фазы.
Требования к сорбентам в ТСХ
Слайд 25Предварительная подготовка слоя сорбента
- промыть пластинку
активировать пластинку
активироавнную пластинку
хранить в вакуум-эксикаторе
при нанесении пробы рабочую область платинки
предохранять покровной стеклянной пластинкой
Слайд 26Влияние относительной влажности на разделение ПАУ
Слайд 29Силикагель - полярный адсорбент, содержит активные силанольные и силоксановые группы.
Применяют для разделения соединений различной полярности.
Оксид алюминия - полярный
адсорбент с гетерогенной поверхностью, содержит активные ОН-группы, заметно выражены протоноакцепторные свойства. Применяют для разделения ароматических углеводородов, алкалоидов, хлоруглеводородов, стероидов
Слайд 31 Алифатические углеодороды Неполярный
Простые эфиры
Сложные эфиры
Карбонильные соединения
Фенолы и спирты
Карбоновые
кислоты
Полярный
hRf
Разделение органических соединений с различными функциональными
группами на слоях силикагеля
Слайд 32Хроматограмма разделения L-аминокислот
1- лейцин, 2- метионин, 3-фенилаланин, 4- валин,
5 – смесь кислот
ПФ – хлороформ:этанол:CH3COOH:H2O
А- пластинки «Сорбфил», высокоэффективный вариант,
Б
– пластинки «Сорбфил», аналитический вариант
Слайд 33Некоторые характеристики
ТСХ- и ВЭТСХ пластинок
Слайд 34Устройство для высокоэффективной тонкослойной
хроматографии под давлением
Слайд 38Методы подбора и оптимизации
состава подвижной фазы
Слайд 39Стандартные системы для адсорбционной ПХ:
Хлороформ – метанол
Хлороформ – ацетон
Диэтиловый эфир
– толуол
Диэтиловый эфир – гексан – уксусная кислота
Этилацетат – метанол
Этилацетат
- толуол
Слайд 40Стандартные системы для распределительной ПХ:
Хлороформ – метанол – вода
Хлороформ –
метанол – вода – уксусная кислота
Хлороформ – метанол – вода
– водный аммиак
Бутанол-1 – уксусная кислота – вода
Бутанол-1 – пиридин – вода
Этилацетат – муравьиная кислота – вода
Слайд 43Идентификация компонентов
- физическими методами, основанными на поглощении света и флуоресценции
химическими методами
с «универсальными реагентами»
с реагентами, которые избирательно
реагируют с определенными функциональными группами исследуемых соединений.
Слайд 46Количественный анализ в тонкослойной хроматографии
Слайд 47Определение с удалением хроматографической зоны с пластинки
Проводят двояко:
переносом
хроматографической зоны вместе с сорбентом
экстрагированием хроматографической зоны со слоя
сорбента
Определение определяемых соединений непосредственно на пластинке
Метод визуального сравнения размеров площадей пятен и их окраски с соответствующими параметрами пятен стандартных образцов
Слайд 50Использование метода денситометрии
Сканирование хроматограмм в видимом и УФ-свете с помощью
«хроматографических спектрофотометров» – денситометров.
Измеряется:
поглощение света веществом на хроматограмме в
режиме пропускания или отражения;
флуоресценция и ее гашение.
Слайд 54Использование метода видеоденситометрии
Введение изображения хроматограммы в компьютер с помощью
видеокамеры или цифровой камеры;
сравнением интенсивностей пятен стандартных соединений и исследуемых
образцов.
Использование денситометрии с планшетным сканером.
Слайд 56Вид пространственного распределения яркости в области пятна
Аi,j – значение уровня
яркости точки пятна; Вi,j- значение уровня яркости точки на базовой
поверхности.
Слайд 57 обработку пятна в видеоденситометрии проводят по двум характеристикам:
площади пятна;
его «объему» в пространстве;
в качестве третьей координаты используют
яркость (интенсивность окраски пятна)
Слайд 61Денситограмма ТСХ-хроматограммы питьевой воды с добавкой гербицидов (20 нг в
пробе)
1 – метоксурон; 2 – монурон; 3 – хлортолурон; 4
– небурон; 5 – линурон
при различных длинах волн (200; 220; 240; 260; 280; 300 нм).
Слайд 62Разделение тетрациклиновых антибиотиков
Сорбент – силикагель RP-18W;
ПФ: 0,5 М водный раствор
щавелевой кислоты – метанол – ацетонитрил (6:2:2)
1 – хлортетрациклин;
2 –
тетрациклин;
3 – окситетрациклин.
Слайд 63Определение теофилина в антиастматическом препарате «Solosin»
Сорбент: силикагель NH2
ПФ: этанол
– 5% раствор этиламина в воде (95:5)
1 – о-карбамилфеноксиуксусная кислота;
2 - теофилин
Слайд 64Разделение аминокислот
Пластинки – «Сорбфил» ПТСХ-П-В;
ПФ: пропанол-2 – этилацетат – 25%
аммиак – вода (30:10:3,5:10)
Слайд 66alliin
NH2 —CH2 —CH2 —COOH
аланин
Слайд 67Хроматограммы красящих композиций некоторых популярных тонов коммерческих оттеночных шампуней: a
– «бургунский», b – «серебристый» или «платиновый», c – «вишневый»
или «вишня», d: 1 – «шоколад», 2 – «коньяк», 3 – «красное дерево».
Слайд 68 Хроматограммы коммерческих образцов хны и басмы: a – хна
«иранская», b – хна, басма и индивидуальный лаусон, c –
образцы хны, красящие в разные цвета: 1 – хна «медная», 2 - хна «гранатовая», 3 – хна «фиолетовая», 4 – хна «розовая».