Слайд 1ОСОБЕННОСТИ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ
М.Р. Карпова
Слайд 2Диагностика вирусных инфекций
Прямые методы:
• непосредственное исследование материала на
наличие вируса (вирусоскопический метод), вирусного АГ или вирусных нуклеиновых кислот;
• вирусологический метод: выделение и идентификация вируса из клинического материала;
Непрямые методы:
• серологический метод: определение специфических противовирусных АТ (в динамике, классы Ig).
Слайд 3Прямые методы диагностики
Вирусоскопический метод: микроскопия вируса в материале от больного.
Электронная микроскопия.
Иммуноэлектронная микроскопия.
Цитологические методы.
Слайд 4Прямые методы диагностики
Экспресс-диагностика – обнаружение в материале компонентов
вирусов:
● вирусных АГ – РНГА, РТГА,
РИФ, ИФА;
● вирусных нуклеиновых кислот в ПЦР. Количественная ПЦР – «вирусная нагрузка».
Слайд 5Прямые методы диагностики
Вирусологический метод – выделение вируса
из клинического материала, его культивирование, определение количественного содержания и идентификация.
Клинический материал отбирают как можно раньше, с учетом циркуляции возбудителя. «Холодовая цепь». Безопасность.
Культивирование: ● куриный эмбрион;
● организм животного;
● клеточные культуры.
Количественное определение вирусов:
● инфекционность (реакция бляшкообразования, определение инфекционной или летальной дозы);
● выявлением вирусных АГ;
● выявление вирусной нуклеиновой кислоты (ПЦР);
● количественная электронная микроскопия.
Слайд 6Непрямые методы
Серологический метод:
определение класса специфических иммуноглобулинов (IgA, IgM, IgG);
определение
титра специфических АТ в парных сыворотках от больного;
ИФА, РТГА, НРИФ,
РН, иммуноблотинг.
Слайд 7ОРТОМИКСОВИРУСЫ И ПАРАМИКСОВИРУСЫ
М.Р. Карпова
Слайд 8ОРТОМИКСОВИРУСЫ
Царство – Vira;
Подцарство – РНК-вирусы;
Семейство – Orthomyxoviridae;
Роды – Influenzavirus А,
Influenzavirus В и Influenzavirus С.
myxo – родство к муцину.
Слайд 9Вирус гриппа
«Грипп» – 1743 г. Соваж (от фр. agripper –
«схватывать»);
«инфлюэнция» (от “influentia” – эманация энергии звезд).
Слайд 10Вирус гриппа А
Вирус выделен в 1930 году Shop от свиней.
В
1933 году Смит, Эндрюс и Лейдлоу
изолировали вирус на
сирийских хомячках путем их заражения смывом со слизистой носа больного человека.
Слайд 11Морфология
Две формы: нитевидная (70 нм) и сферическая (80-120 нм).
Нуклеокапсид,
суперкапсид с шипиками (Н и N).
Геном – 8 фрагментов
однонитчатой линейной «минус-нитевой» РНК.
Слайд 12Культивирование вируса гриппа
Куриный эмбрион – в аллантоисной и амниотической жидкостях.
Клеточные культуры – ЦПД.
Организм животных: в легочной ткани белых
мышей, сирийских хомячков, хорьков, морских свинок, обезьян.
Вирус гриппа А циркулирует не только среди людей, но и среди некоторых видов животных и птиц.
Слайд 13Антигены вируса гриппа А
Вирус имеет 10 АГ: 7 структурных и
3 неструктурных (клеточных).
Структурные АГ:
● H и
N (Н1-Н16 и N1-N9), у человека – А(Н1N1), А(Н2N2), A(H3N2).
● P1, P2 и P3 – ферменты полимеразного комплекса;
● NP – внутренний АГ, формирующий капсомеры;
● M – внутренний матриксный белок, медиатор сборки вирусной частицы (М1 и М2).
Неструктурные белки: NS1, NS2, NS3.
H
N
Слайд 14Роль вирусного гемагглютинина
B. Проникновение вируса
C. «Раздевание» и
репликация вируса
А.Связывание с
сиаловой
кислотой
Слайд 15Изменчивость вируса гриппа А
«Антигенный дрейф» (от англ. – медленное движение).
«Антигенный шифт» (от англ. – сдвиг).
Шифт – стратегия, дрейф
– тактика антигенной изменчивости.
Реассортация.
Слайд 16Схема происхождения пандемического вируса гриппа А H1N1v
Слайд 18История эпидемий гриппа
Средневековые английские хроники – «лондонская потница».
1918-1919 гг. –
«испанка» (вирус гриппа А H1N1), погибло свыше 20 млн. человек;
1957 г. – «азиатский грипп» (вирус гриппа А H2N2);
1968 г. – «гонконгский грипп» (вирус гриппа А H3N2);
1977–1978 гг. – «русский грипп» (вирус гриппа А H1N1).
2010 – ?
В настоящее время циркулируют три штамма вируса гриппа: А H1N1, А H3N2 и В.
Слайд 19«Свиной» грипп
Трахея свиней содержит рецепторы как птичьих, так и человеческих
вирусов → реассортация.
К человеку от больной свиньи вирус-реассортант вероятно попал
воздушно-капельным путем, либо при прямом контакте человека и пятачковой слизи свиньи.
Март-апрель 2009 г. – начало эпидемии.
11 ИЮНЯ 2009г. ВОЗ объявил пандемию гриппа А (H1N1).
Слайд 20Патогенез гриппа
Источник инфекции –
больной человек.
Пути заражения:
воздушно-капельный (кашель, чихание, разговор) и воздушно-пылевой.
Входные ворота –
слизистая ВДП.
Из 1-ой вирусной частицы через 24 ч образуется 1027 частиц → короткий ИП гриппа – 1-2 дня.
Слайд 21Патогенез гриппа
Вирус → бокаловидные и реснитчатые клетки → набухают →
слизь. Клетки разрушаются → интоксикация. Клетки слущиваются и заполняют просветы
бронхов.
Иммунный ответ → БАВ → цитотоксический эффект.
Повреждение мембран → генерация инфекции.
Повышение проницаемости стенок сосудов → периваскулярный отек, нарушение гемостаза → отек и полнокровие легких, мозга и других органов.
Наиболее поражаемые
органы – легкие, ЦНС.
Инфекционно-токси-
ческий шок.
Иммунодефицит →
вторичные бактери-
альные инфекции
(чаще стафилококковые).
Слайд 22Иммунитет при гриппе
Пассивный иммунитет – у детей до 8-11 месяцев.
Активный иммунитет:
● АТ – к концу 1-й недели
заболевания, максимум – к 3-й неделе;
● факторы резистентности: интерферон, термостабильные и термолабильные сывороточные ингибиторы, факторы местного иммунитета: на слизистых ВДП – sIgA.
К вирусу гриппа вырабатывается стойкий иммунитет
Слайд 23Микробиологическая диагностика гриппа
Вирусологический метод:
Материал: кровь, смывы со слизистой носа,
в летальных случаях – кусочки ткани легкого, соскобы со слизистой
бронхов, трахеи.
Материал → куриные эмбрионы (аллантоисная полость), культура ткани, белые мыши → идентификация в РТГА, РН, РИФ, ИФА и ПЦР.
Серологический метод:
Парные сыворотки → ИФА, РТГА, РН.
Экспресс-диагностика:
Вирусный АГ в эпителии слизистой оболочки ВДП → РИФ, ИФА; вирусная РНК → ПЦР.
Слайд 24Лечение гриппа
Специфическое лечение: противогриппозный Ig.
Интерферон и его индукторы (циклоферон, арбидол,
амиксин)
Противовирусные химиопрепараты:
∙ ингибитор гемаглютинина (арбидол)
∙ блокаторы
М2-каналов (амантадин, ремантадин);
∙ ингибиторы нейроминидазы – занамивир (реленц), озельтамивир (тамифлю);
∙ подавление транспорта РНП – ингавирин.
Слайд 25Вакцины против гриппа
Цельновирионные (живая и убитые);
Сплит-вакцины (расщепленные), содержат все
внутренние и поверхностные АГ, в них нет реактогенных липидов. Ваксигрип,
Флюарикс, Бегривак.
Субъединичные вакцины проходят еще один этап обработки, удаляются внутренние АГ, остаются только НА и NA. Гриппол, Инфлювак.
Поливалентные вакцины:
А (H3N2), А (H1N1) и В.
Прививки рекомендуется
проводить ежегодно
в осенне-зимний период.
Слайд 26Вирус гриппа В
По морфологическим и биологическим свойствам не отличается от
вируса гриппа А.
Отличия:
∙ антигенная структура;
∙
циркулирует только среди людей;
∙ вызывает локальные и спорадические случаи, вспышки среди школьников;
∙ менее изменчив, вирулентен и контагиозен.
Против вируса гриппа В существует вакцина.
Слайд 27Вирус гриппа С
По основным свойствам не отличается
от вирусов
гриппа А и В.
Отличия:
∙ по антигенному составу;
∙ не содержит нейроминидазу, ее заменяет ацетилэстераза;
∙ имеет 7 сегментов РНК;
∙ постоянство антигенной структуры → спорадические случаи, особенно у детей первого года жизни, как правило, к 10 годам у большинства людей имеются АТ к этому вирусу.
Вакцины против вируса гриппа С нет.
Слайд 28Парамиксовирусы (Paramyxoviridae)
Крупные (150 – 300 нм), суперкапсидные вирусы со спиральным
типом симметрии.
Форма вириона сферическая.
Геном – однонитевая нефрагментированная «–» РНК.
Парамиксовирусы
чаще вызывают инфекции у детей.
Слайд 29Таксономическое положение
Царство – Vira;
Подцарство – РНК-вирусы;
Семейство – Paramyxoviridae;
Роды – Respirovirus
(вирус парагриппа), Rubulavirus (вирус эпидемического паротита), Morbillivirus (вирус кори), Pneumovirus
(РС-вирус).
Слайд 30Вирус кори
Measles virus.
Корь – острое инфекционное заболевание с высокой
температурой, интоксикацией, катаральными явлениями на слизистых ВДП, глаз, появлением сыпи
(крупная, пятнисто-папулезная).
Слайд 31Культивирование
Культура клеток:
∙ образование многоядерных клеток – симпластов
→ синцитий;
∙ эозинофильные включения в ядре и
около ядерной зоне и интенсивная дегенерация.
Животные и птицы к вирусу не чувствительны, кроме приматов (корь). Белые мыши-сосунки – энцефалит с летальным исходом.
Слайд 32Образование симпластов
ЦПД вируса кори на клетки Vero:
образование гигантских многоядерных клеток – симпластов, включающих до 100 ядер,
с последующей деструкцией и формированием крупных полостей типа "мыльных пузырей".
Интактные
клетки линии
Vero
ЦПД
вируса
кори в
культуре
клеток
Vero
Слайд 33Антигенные свойства вируса кори
два гликозилированных белка, входящих в состав суперкапсида
— Н (гемагглютинин) и F (белок слияния, гемолизин);
М-белок (матриксный);
белки
нуклеокапсида NP, Р и L (белки полимеразного комплекса, содержащего транскриптазу).
Слайд 34Патогенез
Источник инфекции – больной человек.
Механизм заражения – аспирационный.
Путь
заражения: воздушно-капельный.
Входные ворота – эпителиальные клетки слизистой оболочки носоглотки,
трахеи и бронхов, конъюнктивы глаз.
Слайд 35
вирус
Верхние дыхательные пути, конъюнктива глаз
Ретикулоэндотелиальная ситема, Т-лимфоциты
Первичная виремия
Вторичная виремия
3
д
н я
Начало клинических проявлений болезни
Инкубационный период
Формирование специфического иммунитета
Период реконвалесценции
Патогенез кори
Слайд 36Патогенез
Эпителиотропность → катаральное воспаление ротоглотки, носоглотки, гортани, трахеи, бронхов, бронхиол.
Сыпь,
пятна Бельского-Филатова-Коплика.
Поражение внутренних органов (пневмонии, менингиты, энцефалиты).
Подострый склерозирующий панэнцефалит,
нома.
Стойкий иммунитет.
Слайд 37Микробиологическая диагностика
Материал – кровь (в первые дни заболевания, 3-5 день
от момента появления сыпи), носоглоточные смывы, соскобы с элементов сыпи,
секрет конъюнктивы, моча, материал биопсии при летальных исходах.
Экспресс – диагностика: специфический вирусный АГ в пораженных клетках (соскобы с элементов сыпи) в РИФ.
Вирусологический метод: культивирование на культуре клеток, идентификация в РИФ, РН, РТГА, ИФА, ПЦР.
Серологический метод: С парными сыворотками больного ставят ИФА с определением Ig M и Ig G, РНГА, реже РТГА и РН в культуре клеток.
Слайд 38Профилактика и лечение
Живая культуральная коревая вакцина. Плановые прививки – двукратно
в возрасте 12-15 мес. и 6 лет детям не болевшим
корью. Взрослых 18-35 лет.
Экстренную профилактику проводят детям с 12 месяцев, подросткам и взрослым, не болевшим корью и ранее не привитым, имевшим контакт с больным корью не позднее, чем через 72 ч после
контакта. Иммунитет – 10 лет.
Рувакс, MMR
Нормальный донорский иммуноглобулин применяется для контактировавших детей.
Слайд 39Вирус эпидемического паротита
Эпидемический паротит (от греч. рara – около, otos
– ухо), синоним – «свинка» – острое инфекционное заболевание, возникающее
в основном у детей и характеризующееся преимущественным поражением околоушных слюнных желез.
В 30% случаев протекает бессимптомно.
Слайд 40Культивирование
Куриный эмбрион.
Первичные и перевиваемые клетки (амниотические клетки человека, клетки HeLa
или почечные клетки обезьян). ЦПД в виде синцития или дегенерации.
Заражение обезьян в слюной проток. У взрослых мышей при интраназальном введении развивается бессимптомная инфекция, мыши-сосунки, белые крысы и хомяки погибают от энцефалита.
Слайд 41Антигенные свойства
Два оболочечных гликопротеида HN (гемагглютинирующая и нейраминидазная активность) и
F (от англ. fusion - слияние);
белок М, формирующий внутренний слой
вирусной оболочки;
нуклеокапсидный белок NP.
Слайд 42Патогенез
Источник инфекции – больной человек. Больной заразен в последние дни
инкубационного периода (за одни – двое суток до припухания околоушных
желез) и в первые три – пять дней от начала заболевания.
Механизм заражения – аспирационный, пути передачи возбудителя – воздушно-капельный и контактно-бытовой через игрушки, посуду и другие предметы, загрязненные слюной больного.
Входные ворота – слизистые оболочки ВДП, миндалины.
Слайд 43Патогенез
Первичное размножение вируса в эпителиальных клетках ВДП и в шейных
лимфоузлах → кровь (первичная вирусемия) → слюнные железы (околоушные, подъязычную,
подчелюстную), активно размножается → кровь (вторичная вирусемия) → железистые и другие органы (яички, яичники, поджелудочная и щитовидная железы, мозг) → орхит, менингит, менингоэнцефалит, реже тиреоидит, полиартрит, нефрит, панкреатит.
Наиболее поражаемые органы: слюнные железы, половые железы, поджелудочная железа, щитовидная железа, ЦНС, суставы.
В 20-30% случаев паротит осложняется орхитом, возможна атрофия яичек.
Возбудитель выделяется из организма со слюной и мочой.
Формируется стойкий иммунитет.
Слайд 44Микробиологическая диагностика
Материал: слюна, СМЖ, моча, кровь.
Вирусологический метод: заражают 7-9
дневных куриных эмбрионов, амниотическую жидкость исследуют в РГА и РТГА.
Серологический метод: РСК, РТГА, ИФА.
Аллергический метод: внутрикожная проба к вирусному аллергену (инактивированная вытяжка куриного эмбриона, зараженного вирусом паротита).
Слайд 45Профилактика
Живая культуральная паротитная вакцина. Плановые прививки проводят двукратно в 12-15
мес. и 6 лет детям, не болевшим паротитом. Экстренную профилактику
проводят детям с 12 мес., подросткам и взрослым, не болевшим паротитом и ранее не привитым против этой инфекции, а также имевшим контакт с больным паротитом не позднее
72 ч после контакта.
