Слайд 2Клинико-иммунологические исследования делят:
Методы оценки клеточного иммунитета
Методы оценки гуморального иммунитета
Основные объекты
анализа: кровь или сыворотка.
Слайд 3Принцип выделения мононуклеарных клеток
Слайд 8Реакция агглютинации
Реакция агглютинации (от лат. agglutinatio - склеивание) - склеивание
корпускул (бактерий, эритроцитов и др.) антителами в присутствии электролитов -
натрия хлорида.
Прямая
Непрямая
Слайд 9Реакция агглютинации проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящих из
корпускул (например, бактерий), "склеенных" антителами.
РА используют для:
Определения возбудителя, выделенного от
больного животного
Определения антител в сыворотке крови больного животного
Слайд 11Реакция непрямой агглютинации
Эритроциты (или частицы латекса) с адсорбированными на них
антигенами взаимодействуют с соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание
и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка.
При отрицательной реакции эритроциты оседают в виде пуговки.
Слайд 12Термостабильный АГ (мелкозернистая агглютинация)
Термолабильный АГ
(крупнохлопчатая агглютинация, протекает быстрее)
Слайд 13Реакция преципитации (РП)
это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена
с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при
смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах, избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.
Слайд 14Иммуноэлектрофорез
- сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации: смесь антигенов вносится в
лунки геля и разделяется в геле с помощью электрофореза, затем
в канавку параллельно зонам электрофореза вносят иммунную сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте "встречи" с антигеном линии преципитата
Слайд 15Реакция связывания комплемента (РСК)
АГ+АТ комплекс
К Fc-фрагментам антител присоединяется комплемент (С),
2 фазы:
1-я фаза - инкубация смеси, содержащей антиген + антитело
+ комплемент,
2-я фаза (индикаторная) - выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы.
Слайд 16Реакция связывания комплемента (РСК)
Схема РСК с сывороткой больного
Схема РСК с
сывороткой здорового
Слайд 17Цитотоксический тест
метод оценки повреждающего действия на культивируемые клетки каких-либо факторов
(физических, химических, биологических), заключающийся в подсчете доли погибших клеток после
дозированного воздействия повреждающего фактора.(используется для количественного определения субпопупяции Т-лимфоцитов)
Слайд 18Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)
Различают три разновидности метода прямой, непрямой, с комплементом.
Слайд 19Прямой метод РИФ
основан на том, что антигены тканей или
микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться
в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.
Слайд 20Непрямой метод РИФ
заключается в выявлении комплекса антиген - антитело
с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом.
В результате
образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.
Слайд 21Радиоиммунный метод, или анализ (РИА)
высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген
- антитело с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом (125J,
14C, 3Н, 51Сr и др.). После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный иммунный комплекс и определяют его радиоактивность в соответствующем счетчике (бета- или гамма-излучение). Интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.
Слайд 22Иммунофериентный анализ (ИФА)
выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных
с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазной и или щелочной фосфатазой). После
соединения антигена с меченой ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции - интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител
Конкурентный ИФА для определения антигенов: искомый антиген(1) и меченый ферментом антиген(2) конкурируют друг с другом за антитела (3), сорбированные на твердой фазе.
Слайд 23Определение антител в сыворотке больного (в лунках планшеток с сорбированным
антигеном)
Слайд 24Определение антигена в сыворотке больного (в лунках планшеток с сорбированными
диагностическими антителами)
Слайд 25Иммунная электронная микроскопия (ИЭМ)
- электронная микроскопия микробов, чаще вирусов, обработанных
соответствующими антителами. Вирусы, обработанные иммунной сывороткой, образуют иммунные агрегаты (микропреципитаты).
Вокруг вирионов образуется "венчик" из антител, контрастированный фосфорно-вольфрамовой кислотой или другими электроннооптически плотными препаратами.
Слайд 27Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА)
Антигенный эритроцитарный диагностикум
Реакция непрямой (пассивной)
агглютинации
Слайд 28Реакция обратной непрямой гемагглютинации
Слайд 29Реакция нейтрализации (РН)
Реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток:
А - цитопатогенный
эффект (ЦПЭ) в результате размножения вирусов;
Б - ЦПЭ отсутствует в
результате нейтрализации вирусов антителами.