КУРСОВАЯ РАБОТА ЛФ состава: Рибофлавина Тиамина бромида по 0,002 Кислоты

0,08 Воды очищенной до 10 мл Цель работы заключается в изучении методик

анализа компонентов сложной ЛФ при совместном присутствии

Выполнила студентка АГМУ 053 группы
Кузнецова Юлия Владиславовна

– желтый цвет и зеленое свечение в ультрафиолетовом свете. Флуоресценция

связана с наличием свободной имидной группы в 3 – ем положении кольца пиримидина.
2.Аскорбиновая кислота + бромид – ион + хлорид – ион
Общий реактив – серебра нитрат. Обнаруживают последовательно: сначала тиамина бромид и натрия хлорид осаждением бромид – ионов и хлорид – ионов в виде желтоватого осадка:

аскорбиновую кислоту обнаруживают по серому осадку восстановленного серебра:





Методика. К 2

– 3 каплям ЛФ прибавляем 3 – 5 капель воды и 2 – 3 капли раствора серебра нитрата. Образуется желтоватый осадок (бромид – ион и хлорид – ион), а затем осадок темнеет (металлическое серебро в виде серого осадка).
3.Тиамина бромид.
Образование тиохрома – специфическая реакция! При действии на тиамин раствором натрия гидроксида (при рН более 12,0), происходит раскрытие тиазолового цикла, образуется тиольная форма тиамина. Тиольная форма тиамина содержит альдегидную и тиольную (сульфгидрильную) функциональные группы, поэтому эта форма очень легко окисляется даже слабыми окислителями. При действии гексацианоферрата (III) калия в щелочной среде образуется тиохром:

ЛФ прибавляем по 2 – 3 капли раствора натрия гидроксида

и калия феррицианида, 0,5 мл хлороформа и взбалтываем. Наблюдается сине – фиолетовое свечение хлороформного слоя в ультрафиолетовом свете.
4.Кислота аскорбиновая.
Окисление раствором йода по ендиольной группировки (другие компоненты ЛФ невступают в данную реакцию):




Методика. К 3 – 5 каплям ЛФ прибавляем 0,5 мл йодкрахмального реактива. Синяя окраска реактива исчезает (приготовление йодкрахмального реактива: 10 мл воды + 1 мл раствора крахмала + 1 каплю 0,1М раствора йода).

кислоты аскорбиновой по ендиольной группировки железа (III) хлоридом (другие компоненты

смеси данной реакции не дают):






Методика. К 5 каплям раствора прибавляем по 2 капли растворов ферроцианида калия и железа (III) хлорида. Появляется синее окрашивание.

5.Ион натрия.
Окрашивание пламени. Часть раствора на графитовой палочке вносят в бесцветное пламя. Пламя окрашивается в желтый цвет.

– измерение оптического поглощения раствора в видимой области спектра по

собственной желтой окраски, т.е предварительные реакции окрашивания не проводим!
Методика. К 0,5 мл ЛФ прибавляем 9,5 мл воды и измеряем оптическую плотность (А1) полученного раствора при длине волны около 445 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.
Раствор сравнения: вода.
Параллельно измеряем оптическую плотность раствора (А2), содержащего 2,5 мл 0,004% стандартного раствора рибофлавина (0,0001 г) и 7,5 мл воды.
Содержание рибофлавина (X) в граммах вычисляем по формуле стандартного раствора:
Х = А1 • 0,0001 • 10
А2• 0,5
Где 0,5 – навеска, взятая на анализ, гр; 10 – объем ЛФ, мл

окисляется по ендиольной группировке стандартным раствором йода в нейтральной, слабокислой

или слабощелочной среде до кислоты дегидроаскорбиновой (индикатор — раствор крахмала)






Методика. К 1 мл ЛФ прибавляем 1 мл воды и титруют 0,02 М раствором йода (А мл) до буро – синего окрашивания (индикатор — крахмал).
Содержание кислоты аскорбиновой (X) в граммах вычисляем по формуле:
Хг = 0,00176 ∙ Амл ∙ K ∙ 10
1,0
10 – объем ЛФ по прописи, мл; 1,0 – объем ЛФ, взятый на анализ, мл; А – объем 0,02М раствора йода, пошедшего на титрование, мл.

Сумму тиамина бромида и кислоты аскорбиновой оттитровывают алкалиметрически (кислотные свойства

кислоты аскорбиновой и бромоводородной кислоты, связанной с тиамином), и объем натрия гидроксида, прореагировавшего с тиамина бромидом определяют по разности, с учетом изменения фактора эквивалентности кислоты аскорбиновой при алкалиметрическом и йодиметрическом определении.

ЛФ сумму тиамина бромида и кислоты аскорбиновой 0,02 М раствором

натрия гидроксида (Б мл) до появления розового окрашивания (индикатор – фенолфталеин).

Количество 0,02М раствора натрия гидроксида, израсходованного на титрование тиамина бромида (Х мл) рассчитываем по разности:
Х = Б – А /2
где А/2 – учет изменения эквивалентов кислоты аскорбиновой при алкалиметрическом титровании и йодометрическом.

Содержание тиамина бромида (X) в граммах вычисляем по формуле:
Хг = 0,00871 ∙ Хмл ∙ 10
1,0
10 – объем ЛФ по прописи, мл; 1,0 – объем ЛФ, взятый на анализ, мл; Х – объем 0,02М раствора натрия гидроксида, пошедшего на титрование только тиамина бромида, мл.
 

(видоизмененный метод Фольгарда). Метод заключается во введении в анализируемый раствор

0,1 мл 0,1М раствора NH4SCN и железоаммониевых квасцов для получения роданида железа, имеющего кроваво – красную окраску и последующим прямым титрованием серебра нитратом.








После осаждения бромидов серебра нитрат будет взаимодействовать с роданидом железа.

В точке эквивалентности красная окраска исчезает, но расход титранта будет завышен на 0,1 мл, то есть, на объем раствора аммония роданида, который был введен для образования индикатора. Поэтому в расчетах из объема серебра нитрата, израсходованного на титрование, вычитают 0,1 мл 0,1М раствора NH4SCN.

прибавляем по 1 мл разведенной кислоты азотной и железо –

аммониевых квасцов, 0,1 мл 0,1М раствора роданида аммония и титруем сумму галогенидов (хлорид – ион + бромид – ион) раствором серебра нитрата (В мл) до исчезновения красной окраски.
Количество 0,1М раствора серебра нитрата, израсходованного на титрование только натрия хлорида (Х1) рассчитываем по разности:
Х1 = В – 0,1 – Х / 5

где В – объем раствора серебра нитрата, пошедший на титрование суммы галогенидов, мл; 0,1 – объем взятого на анализ 0,1М раствора роданида аммония, мл; Х – количество 0,02М раствора натрия гидроксида, израсходованного на титрование тиамина бромида, мл; 5 – учет разности молярности титрантов (0,1М / 0,02 М = 5 раз)
Содержание натрия хлорида (X) в граммах вычисляем по формуле:
Хг = 0,005844 ∙ Х1 ∙ 10
1,0
10 – объем ЛФ по прописи, мл; 1,0 – объем ЛФ, взятый на анализ, мл; Х1 – количество 0,1М раствора серебра нитрата, израсходованного на титрование только натрия хлорида, мл

продвигающейся по слою сорбента (силикагель), перемещать компоненты разделяемой смеси с

разными скоростями. Положение пятен разделяемых витаминов на хроматограмме характеризуют значением Rf.
Ход опыта. В угол силуфоловой пластинки на расстоянии 2 см от каждой стороны наносят раствор ЛФ и стандартные образцы (растворов тиамина, аскорбиновой кислоты и рибофлавина). Используют подвижную фазу (бензол – этанол – уксусная кислота – ацетон; 70:20:5:5), затем подсушивают и выявляют пятна отдельных витаминов в ультрафиолетовом свете, используя значения Rf

цвет и зеленое свечение в ультрафиолетовом свете (рибофлавин)
2. К 1

– 2 каплям ЛФ прибавляем по 2 – 3 капли раствора натрия гидроксида и калия феррицианида, 0,5 мл хлороформа и взбалтываем. Наблюдается сине – фиолетовое свечение хлороформного слоя в ультрафиолетовом свете (тиамин)
3.К 3 – 5 каплям ЛФ прибавляем 0,5 мл йодкрахмального реактива. Синяя окраска реактива исчезает (кислота аскорбиновая)
5.Часть раствора на графитовой палочке вносят в бесцветное пламя. Пламя окрашивается в желтый цвет (ион натрия)
Подлинность и количественное содержание (ВЭЖХ).
Высокоэффективная жидкостная хроматография является удобным, быстрым способом разделения, и проведения качественного и количественного анализа.
Исследуемый образец вводят в колонку хроматографа. Анализируя полученную хроматограмму, идентифицируют вещества и рассчитывают их количество.
Идентификацию проводят по параметрам удерживания, сравнивая их с параметрами удерживания стандартов. Определяют время от момента ввода пробы до появления максимума пика на хроматограмме

параметрами удерживания стандартных образцов.









Количественное содержание ингредиентов лекарственного препарата прямо пропорционально

высоте или площади пиков. Количество действующих веществ определяем по площади пиков, используя расчетную формулу:

Х = S∙ aст ∙ в
Sст ∙ а

где S – площадь пика определяемого компонента на хроматограмме испытуемого раствора; Sст – площадь пика определяемого компонента на хроматограмме раствора РСО; a ст – навеска РСО (г); a – навеска порошка (г); в – средняя масса ЛФ.