лекцияиммун реакции

диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей.
С

этой целью применяют серологические методы (от лат. serum — сыворотка и logos — учение), т.е. методы изучения антител и антигенов с помощью реакций антиген — антитело, определяемых в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма. Обнаружение в сыворотке крови больного антител против антигенов возбудителя позволяет поставить диагноз болезни. Серологические исследования применяют также для идентификации антигенов микробов, различных биологически активных веществ, групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, иммунных комплексов, рецепторов клеток и др. При выделении микроба от больного проводят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т.е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические антитела. Это, так называемая, серологическая идентификация микроорганизмов.
 

(РПГА)]; реакция коагглютинации (РКА); реакция Кумбса (РК); реакция торможения гемагглютинации

(РТГА); реакция преципитации (РП); реакция нейтрализации (РН); реакция связывания комплемента (РСК); реакция радиального гемолиза (РРГ); реакция иммуноприлипания (РИП); реакция иммунофлюоресценции (РИФ); иммуноферментный анализ (ИФА); радиоиммунный анализ (РИА); иммуноблоттинг (ИБ); иммунная электронная микроскопия (ИЭМ).
 

(бактерий, эритроцитов и др.) антителами в присутствии электролитов – натрия

хлорида.

крови с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума, который представляет собой эритроциты

с адсорбированными на них антигенами.Антигенный эритроцитарный диагностикум
Эритроциты (или частицы латекса) с адсорбированными на них антигенами взаимодействуют с соответствующими антителами сыворотки крови, что вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. При отрицательной реакции эритроциты оседают

антитела. Например, можно обнаружить ботулинический токсин, добавляя к нему эритроцитарный

антительный ботулинический диагностикум (такую реакцию называют реакцией обратной непрямой гемагглютинации – РОНГА).

в реакции гемагглютинации для индикации и титрования вирусов, что необходимо

для последующей постановки РТГА.

блокаде, подавлении антигенов (гемагглютининов) вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате

чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты. РТГА применяют для диагностики многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.

непрямой, с комплементом. Реакция Кунса является методом экспресс-диагностики для выявления

антигенов микробов или определения антител. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета

тракта больного. Окраска флюоресцирующими моноклональными антителами (прямой метод РИФ). Контрастирование

- синька Эванса.

с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого

мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом

(ЦПЭ) в результате размножения вирусов; Б - ЦПЭ отсутствует в

результате нейтрализации вирусов антителами

или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано

с блокадой микробных антигенов антителами, т.е. их нейтрализацией.

Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген — антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о специфичности взаимодействия комплекса антиген — антитело

— это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена c

антителами в виде помутнения, называемого преципитатом.
Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах; избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса. Реакцию преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др.
Широкое распространение получили разновидности реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы: двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др.

сыворотку наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител

на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата. 

экзотоксина зависит от наличия в бактериях профага, несущего tox-ген, кодирующий

образование экзотоксина.  При заболевании все изоляты тестируются на токсигенность - продукцию дифтерийного экзотоксина.

другу антигенов и антител они образуют иммунный комплекс, к которому

через Fс-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), т.е. происходит связывание комплемента комплексом антиген — антитело. Если же комплекс антиген — антитело не образуется, то комплемент остается свободным.

РСК проводят в две фазы: 1-я фаза — инкубация смеси, содержащей антиген + антитело + комплемент;
2-я фаза (индикаторная) — выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним.
В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген — антитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет (реакция положительная).

образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во

2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит — антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз (реакция отрицательная). РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней, в частности сифилиса (реакция Вассермана).

анализ, или метод (ИФА) — выявление антигенов с помощью соответствующих

им антител, конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой или щелочной фосфатазой).
После соединения антигена с меченой ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат/хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяется цвет продукта реакции — интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.

частности для диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др., а также

определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях — 1010 — 1012 г/л.

реакции (антиген или антитело) сорбирован на твердом носителе, напр., в

лунках планшеток из полистирола. Компоненты выявляют добавлением меченых антител или антигенов. При положительном результате изменяется цвет хромогена. Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путем   промывания. I.

добавляют сыворотку крови больного, антиглобулиновую сыворотку, меченную ферментом, и субстрат/хромоген

для фермента. .

антиген (напр., сыворотку крови с искомым антигеном), добавляют диагностическую сыворотку

против него и вторичные антитела (против диагностической сыворотки), меченные ферментом, а затем субстрат/хромоген для фермента

переносят их (блоттинг - от англ. blot, пятно) из геля

на активированную бумагу(1) или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с “блотами” антигенов*. На эти полоски наносят сыворотку больного(2). Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом(3). Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата(4), изменяющего окраску под действием фермента.

сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Иммуноблоттинг используют как диагностический

метод при ВИЧ-инфекции и др.

т.е. увеличении количества копий специфического (маркерного) гена возбудителя. Для этого

двунитевую ДНК, выделенную из исследуемого материала, денатурируют (“расплетают” при нагревании) и достраивают, при охлаждении, к расплетенным нитям ДНК новые комплементарные нити, в результате чего из одного гена образуются два. Этот процесс копирования генов многократно повторяется при заданных температурных режимах. Достраивание новых комплиментарных нитей ДНК происходит при добавлении к искомым генам праймеров (затравки из коротких однонитевых ДНК, комплементарных 3’-концам ДНК искомого гена), ДНК-полимеразы и нуклеотидов.