Разделы презентаций
- Разное
- Английский язык
- Астрономия
- Алгебра
- Биология
- География
- Геометрия
- Детские презентации
- Информатика
- История
- Литература
- Математика
- Медицина
- Менеджмент
- Музыка
- МХК
- Немецкий язык
- ОБЖ
- Обществознание
- Окружающий мир
- Педагогика
- Русский язык
- Технология
- Физика
- Философия
- Химия
- Шаблоны, картинки для презентаций
- Экология
- Экономика
- Юриспруденция
Лекция 4
Содержание
- 1. Лекция 4
- 2. Экспрессия трансгенов
- 3. Структура домена хроматина, содержащего ген овальбумина (ОА)
- 4. Искусственная хромосома дрожжей
- 5. о 6 12 18 24
- 6. Schematic of genomic structural organization of the
- 7. Schematic of hemoglobin switching model based on
- 8. Вариант метода вычитающей гибридизацииКлонирование и анализ (трансгеноз)Злокачественные клеткиНормальные клеткимРНКВ избытке
- 9. Array CGH (Comparative Genomic Hybridization technology). ДелецияДупликацияКонтрольная ДНКИсследуемая ДНК
- 10. От хромосомных перестроек -
- 11. Влияние экспрессии онкогенов на канцерогенез у трансгенных мышей
- 12. Клеточные гены, ускоряющие развитие лимфомы у трансгенных мышей
- 13. Синергизм трансгенов в лимфомогенезе у двойных трансгенных мышей
- 14. Детектирование синергичных в лимфомогенезе генов с помощью инсерций провирусов у трансгенных мышей
- 15. 1. Моделирование серповидноклеточной анемии у трансгенных
- 16. Некоторые другие проблемы, решаемые с помощью трансгеноза.Токсикогенетика
- 17. Структура генома ВИЧ-1
- 18. Взаимодействие регуляторных белков с LTR ВИЧ-1Tat
- 19. ГЕННАЯ ТЕРАПИЯ
- 20. Генная терапия in
- 21. Что надо для успеха?Выбор потенциально терапевтического гена
- 22. Клинические испытания по генной терапии (2010 г.)
- 23. Генная терапия
- 24. Типы генов, используемых при генной терапии
- 25. Слайд 25
- 26. Генная терапия опухолей с использованием клеток иммунной
- 27. Принцип использования для терапии рака гена-убийцы
- 28. Направленное подавление работы гена в клетках достигается
- 29. SELEX (англ. systematic evolution of ligands by
- 30. Слайд 30
- 31. белки семейства Aргонавт Основные механизмы РНК-интерференцииРазрезание мРНКБлокировка трансляции мРНКПодавление транскрипции за счет изменения структуры хроматина
- 32. 1990 г. – ген аденозиндезаминазы в аденовирусе
- 33. Перспективы генно-клеточной терапииСтволовые нейрональные клетки, экспрессирующие VEGF,
- 34. Реальные успехиОтбор зародыша при ЭКО, лишенного известных генетических заболеваний.Секвенирование индивидуальных геномов и предсказание возможных заболеваний.
- 35. Таргетинг генов
- 36. Структура Холидея: двойной разрыв в гомологичных хромосомах
- 37. Потомство, произошедшее из таргетированных ЭСКПотомство, произошедшее из
- 38. Два типа векторов используемых для гомологичной рекомбинации
- 39. Нокаут селектируемого гена гипоксантинфосфорибозилтрансферазы (hprt) Ген
- 40. Позитивно-негативная селекция таргетированного неселектируемого генаneotk
- 41. Генный нокаут с использование для негативной селекции гена дефтерийного токсинаПромоторСайт полиаденилирования
- 42. Кондиционный нокаут
- 43. Вектор 1Вектор 2Нокин гена (knock-in) Мутация++
- 44. Функции генов, установленные с помощью их нокаута
- 45. Выявление генов, препятствующих развитию лимфомогенеза, с помощью генного нокаута
- 46. Синергизм между «классическими» трансгенами и нокаутированными генами в усилении развития лимфом
- 47. Синергизм между действием генов в лимфомогенезе, установленный на основе анализа дважды и трижды нокаутированных мышей
- 48. Обнаружение генов, участвующих в раннем развитии, с
- 49. Примеры изучения вирусного патогенеза с помощью нокаута
- 50. Скачать презентанцию
Экспрессия трансгенов
Слайды и текст этой презентации
Слайд 3Структура домена хроматина, содержащего ген овальбумина (ОА) и координированно экспрессирующиеся
с ним гены (Х и Y)
y ОА
Слайд 6Schematic of genomic structural organization of the human α-globin and
β-globin loci and temporal expression of the various hemoglobin types.
Wilber A et al. Blood 2011;117:3945-3953
Структура кластеров глобиновых генов человека
Слайд 7Schematic of hemoglobin switching model based on looping and interaction
of the LCR with the individual β-globin gene promoters.
Wilber
A et al. Blood 2011;117:3945-3953
Слайд 8Вариант метода вычитающей гибридизации
Клонирование и анализ (трансгеноз)
Злокачественные клетки
Нормальные клетки
мРНК
В избытке
Слайд 9Array CGH (Comparative Genomic Hybridization technology).
Делеция
Дупликация
Контрольная ДНК
Исследуемая ДНК
Слайд 10От хромосомных перестроек -
к механизмам злокачественного перерождения через
трансгеноз-Транслокация хромосом t(9;22) у человека при лимфобластической лейкемии –
- обнаружение слитых генов Bcr/Abl –
- получение трансгенных мышей с такой конструкцией под контролем МТ-промотора –
- возникновение у них лимфобластической лейкемии
Слайд 14Детектирование синергичных в лимфомогенезе генов с помощью инсерций провирусов у
трансгенных мышей
Слайд 15
1. Моделирование серповидноклеточной анемии у трансгенных мышей
альфа1
альфа2
Бета S
Локус-контролирующая область (LCR)
Глобиновые гены человека
2. Моделирование болезни Альцгеймера у трансгенных мышей
Тройная
трансгенная мышь, содержащая мутантные гены пресенилина, аполипопротеина и белка tau. Протективный эффект гуманина.Замена глутаминовой кислоты на валин
Слайд 16Некоторые другие проблемы, решаемые с помощью трансгеноза.
Токсикогенетика развития.
Генетическая замена микрохирургии
– ген дифтерийного токсина А с промотором гена эластина –
уничтожение поджелудочной железы.2. Трансген – хромосомный маркер.
Ген трансферрина кур в инактивированной Х-хромосоме работает.
3. Исследование вирусного патогенеза – функциональная анатомия.
Трансгенные мыши с генами tat и nef ВИЧ.
Слайд 20Генная терапия in vivo
Генная терапия
ex vivo
Размножение клеток in vitro
Терапевтический ген
Терапевтический ген
Генная терапия
Слайд 21Что надо для успеха?
Выбор потенциально терапевтического гена (моногенные заболевания, вирусные
и бактериальные инфекции)
Выбор вектора (адено-ассоциированные вирусы, аденовирусы, ретровирусы, включая лентивирусы)
Разработка
средств доставки гена (нетравматические, адресные, предотвращение попадания в системный кровоток)
Слайд 23Генная терапия
некоторых заболеваний человека
Заболевание Вектор Ген
Болезнь Паркинсона RV декарбоксилаза глутаминовой ы кислоты
Гемофилия AAV фактор IX
Грануломатоз RV GP91
Острый иммунодефицит RV рецептор интерлейкина 2
Дефицит орнитинтранскарбамилазы Ad cDNA OTC
Врождённый амавроз Лебера RV RPE65
Ишемия нижних конечностей Ad ангиогенин, VEGF
Слайд 26Генная терапия опухолей с использованием клеток иммунной системы, нагруженных рекомбинантными
онколитическими вирусами
Вирусы
Клетки с вирусами
Опухоль
Опухоль
Вирус болезни Ньюкасла, рекомбинантные аденовирусы, реовирусы, вирус
простого герпеса 
Слайд 27Принцип использования для терапии рака гена-убийцы
(фермент тимидинкиназа вируса простого герпеса, HSV-tk)
Слайд 28Направленное подавление работы гена в клетках достигается с помощью:
1) Антисмысловых РНК
2) Рибозимов
3) РНК- и ДНК-аптамеров4) Белковых аптамеров
5) РНК-интерференции
6) Нокаута гена
Слайд 29SELEX (англ. systematic evolution of ligands by exponential enrichment –
систематическая эволюция лигандов при экспоненциальном обогащении)
Комбинаторная библиотека олигонуклеотидов
(1015)
Обогащенная фракция
Связывание
Несвязавшиеся молекулы
(отбрасываются)Связавшиеся молекулы
Элюция
ПЦР
Колонка с «пришитым» белком-мишенью
Несколько
циклов
Схема получения ДНК-аптамеров
Слайд 31белки семейства Aргонавт
Основные механизмы РНК-интерференции
Разрезание мРНК
Блокировка трансляции мРНК
Подавление
транскрипции за счет изменения структуры хроматина
Слайд 321990 г. – ген аденозиндезаминазы в аденовирусе (наследственный иммунодефицит) (Андерсон,
США).
2003 г. – в Китае впервые разрешили применение препарата генной
терапии (гендицин) для лечения эпидермоидного рака ( Гендицин - аденовирус содержащий ген p53 ).2012 г. - Европейское медицинское агентство (ЕМА) впервые разрешило регистрацию на территории Евросоюза препарата, предназначенного для генной терапии моногенного заболевания - дефицита липопротеинлипазы (ААV и ген липопротеинлипазы).
Первые успехи генной терапии
Слайд 33Перспективы генно-клеточной терапии
Стволовые нейрональные клетки, экспрессирующие VEGF, - при инсульте
Эмбриональные стволовые клетки, экспрессиирующие VEGF и L1CAM, – при боковом
амиотрофическом склерозеМезенхимные стволовые клетки, экспрессирующие сурвивин, - при инсульте
Гематопоэтические стволовые клетки, экспрессирующие аденозиндеаминазу, - при остром комбинированном иммунодефиците
Слайд 34Реальные успехи
Отбор зародыша при ЭКО, лишенного известных генетических заболеваний.
Секвенирование индивидуальных
геномов и предсказание возможных заболеваний.
Слайд 37Потомство, произошедшее из таргетированных ЭСК
Потомство,
произошедшее из клеток хозяйского эмбриона
Химера
Таргетинг
гена и селекция
Инъекция таргетированных ЭСК в хозяйский эмбрион
Перенос бластоцисты приемной
материПолучение бластоцисты
Выделение клеток внутренней клеточной массы
Х
Культивирование ЭСК
Схема получения трансгенных мышей с таргетированным геном
Химера
Слайд 39Нокаут селектируемого гена гипоксантинфосфорибозилтрансферазы (hprt)
Ген hprt
neo
Таргетирующий
вектор
3 4 5
6 7 8 9 neo
Селекция: Hprt- - резистентность к 6-тиогуанину, Neo+ - резистентность к G418
Нокаут гена
Слайд 41Генный нокаут с использование для негативной селекции гена дефтерийного токсина
Промотор
Сайт
полиаденилирования
Слайд 42Кондиционный нокаут (система Cre-loxP
бактериофага Р1)
Сайты loxP
Мышь №1
Мышь №2 с рекомбиназой Cre
Таргетируемый ген
Геномная ДНК
Вектор
Слайд 46Синергизм между «классическими» трансгенами и нокаутированными генами в усилении развития
лимфом
Слайд 47Синергизм между действием генов в лимфомогенезе, установленный на основе анализа
дважды и трижды нокаутированных мышей
Слайд 48
Обнаружение генов, участвующих в раннем развитии, с помощью нокаута генов
Нокаутированный
ген
Аномалии развитияГамма-субъединица ламинина Остановка развития на стадии формирования экстраэмбриональной энтодермы из-за дефекта миграции клеток
Brachyury Ранняя гибель зародышей из-за блока развития мезодермы
GATA-4 Остановка развитие эндодермы
GATA-3 Гибель на 11-12 день гестации от блока гемапоэза в фетальной печени
SCL Гибель на 9.5 день из-за блока желточного кроветворения
Flt Блокирование развития желточного мешка
FGF-4 Остановка в развитии и гибель сразу после имплантации из-за блока развития клеток трофэктодермы
Слайд 49Примеры изучения вирусного патогенеза с помощью нокаута генов
Вирус лейкоза мышей
Мыши
дикого типа – синдром иммунодефицита
Нокаут-мыши по гену интерлейкина 4 –
синдрома нет.Вывод: интерлейкин 4 способствует развитию иммунодефицита, вызываемого вирусом.
Вирус LDV
Мыши дикого типа – вирус-специфический иммунный ответ
Нокаут-мыши по гену гамма-интерферона 4 – сохранение вирус-специфического иммунного ответа.
Вывод: гамма-интерферон не участвует в формировании иммунного отввета.
