Разделы презентаций
- Разное
- Английский язык
- Астрономия
- Алгебра
- Биология
- География
- Геометрия
- Детские презентации
- Информатика
- История
- Литература
- Математика
- Медицина
- Менеджмент
- Музыка
- МХК
- Немецкий язык
- ОБЖ
- Обществознание
- Окружающий мир
- Педагогика
- Русский язык
- Технология
- Физика
- Философия
- Химия
- Шаблоны, картинки для презентаций
- Экология
- Экономика
- Юриспруденция
Лекция №4
Содержание
- 1. Лекция №4
- 2. План лекцииСеквенирование первого поколения (Сэнгера, Максама-Гилберта)Секвенирование второго
- 3. Секвенирование первого поколения 1977 гhttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC431765/Декабрьhttps://www.pnas.org/content/pnas/74/2/560.full.pdfФевраль
- 4. Метод Максама-ГилбертаCTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC
- 5. Метод Максама-ГилбертаA+GGT+CCP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC и т.д.
- 6. Метод Максама-Гилберта (1980 г.)Удалить немеченный фосфат с
- 7. Метод Максама-Гилберта (1980 г.)Удалить немеченный фосфат с 5’-конца молекулы с помощью фосфатазы (она же – фосфомоноэстераза)
- 8. Метод Максама-Гилберта (1980 г.)Ввести меченный фосфат на 5’-конец с помощью полинуклеотидкиназы и АТФ с меченным γ-фосфатом
- 9. Метод Максама-Гилберта (1980 г.)В четырех разных реакциях
- 10. Метод Максама-Гилберта (1980 г.)P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC P*O4P*O4CTP*O4CTCAAAAGTP*O4CTCAAAAGTCTAGAGP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCAP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTG и т.д.разрезаем после C
- 11. Метод Максама-Гилберта (1980 г.)Как разрезать фосфодиэфирную связь по гуанозину (G):
- 12. Метод Максама-Гилберта (1980 г.)Как разрезать фосфодиэфирную связь по аденозинам и гуанозинам (A+G):
- 13. Метод Максама-Гилберта (1980 г.)Как разрезать фосфодиэфирную связь
- 14. Метод Максама-Гилберта (1980 г.)В четырех разных реакциях
- 15. Метод Максама-Гилберта
- 16. Метод Максама-Гилберта (1980 г.)P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC P*O4P*O4CTP*O4CTCAAAAGTP*O4CTCAAAAGTCTAGAGP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCAP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCAC и т.д.по
- 17. Метод Максама-ГилбертаP*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC A+GGT+CCи т.д.
- 18. Метод Сэнгера3’-CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC -5’5’-GAGTTTTCAGATCTCGGT-3’-OH ||||||||||||||||||+ фрагмент Клёнова+ dATP
- 19. AGTCGAGTTTTCAGATCTCGGTGGCAGGTCCCTCGTCCATCGACGACCCGAGGCCCCTGTGAAACGCAAGCCCG и т.д.Метод СэнгераМаксама-ГилбертаСэнгерA+GGT+CCи т.д.
- 20. Метод Сэнгера vs Максама-Гилберта- Требует большого количества
- 21. Метод Сэнгера. УсовершенствованияРадиоактивное мечение заменено на флуорофорыКаждый
- 22. Секвенирования второго (следующего) поколения – Next generation
- 23. Отличия NGS от «обычного» секвенированияНе требуется проведение
- 24. Варианты подходов в NGS (второе поколение)СинтезДНК-полимеразаЛигированиеЛигаза(SOLiD)Меченные нуклеотиды(Illumina)Детекция пирофосфата(Roche)Изменение pH(Ion Torrent)
- 25. Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология Illumina (Solexa)
- 26. Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология
- 27. 5’3’5’3’Этап 1 – Добавление меченных дНТФ
- 28. 5’3’5’3’Этап 2 – Образование фосфодиэфирных связей
- 29. Этап 3 – Отмывание от несвязавшихся нуклеотидов и считывание сигнала5’3’5’3’
- 30. Этап 4 – Удаление терминирующей группы5’3’5’3’
- 31. Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология
- 32. Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология
- 33. Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология
- 34. Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология
- 35. Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология
- 36. Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология
- 37. Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология
- 38. Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология
- 39. Варианты подходов в NGS (второе поколение): основная проблема пиросеквенирования и Ion Torrent (ThermoFisher)3’-CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC -5’5’-GAGTTTTCAGATCTCGGT-3’-OH ||||||||||||||||||ДобавляемA
- 40. Варианты подходов в NGS (второе поколение): основная проблема пиросеквенирования и Ion Torrent (ThermoFisher)3’-CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC -5’5’-GAGTTTTCAGATCTCGGT-3’-OH ||||||||||||||||||ДобавляемT
- 41. Варианты подходов в NGS (второе поколение): основная
- 42. Варианты подходов в NGS (второе поколение): основная
- 43. Варианты подходов в NGS (второе поколение): основная
- 44. Варианты подходов в NGS (второе поколение)СинтезДНК-полимеразаЛигированиеЛигаза(SOLiD)Меченные нуклеотиды(Illumina)Детекция
- 45. Варианты подходов в NGS (третье поколение)Не требует
- 46. Варианты подходов в NGS (третье поколение)Oxford NanoporeMinIONPacific
- 47. Варианты подходов в NGS (третье поколение): PacBioВ
- 48. Варианты подходов в NGS (третье поколение): Oxford
- 49. Скачать презентанцию
План лекцииСеквенирование первого поколения (Сэнгера, Максама-Гилберта)Секвенирование второго поколения (Illumina, Roche, Applied Biosystems, Ion Torrent)Секвенирование третьего поколения (Oxford Nanopore, Pacific Biosciences)
Слайды и текст этой презентации
Слайд 1Лекция №4
Установление первичной структуры нуклеиновых кислот (секвенирование)
Кечин Андрей Андреевич, к.б.н.
Новосибирск
- 2020
Слайд 2План лекции
Секвенирование первого поколения (Сэнгера, Максама-Гилберта)
Секвенирование второго поколения (Illumina, Roche,
Applied Biosystems, Ion Torrent)
Секвенирование третьего поколения (Oxford Nanopore, Pacific Biosciences)
Слайд 3Секвенирование первого поколения
1977 г
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC431765/
Декабрь
https://www.pnas.org/content/pnas/74/2/560.full.pdf
Февраль
Слайд 4Метод Максама-Гилберта
CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC
Слайд 5Метод Максама-Гилберта
A+G
G
T+C
C
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC
и т.д.
Слайд 6Метод Максама-Гилберта (1980 г.)
Удалить немеченный фосфат с 5’-конца молекулы с
помощью фосфатазы (она же – фосфомоноэстераза)
Ввести меченный фосфат на 5’-конец
с помощью полинуклеотидкиназы и АТФ с меченным γ-фосфатомВ четырех разных реакциях (для G, для A+G, для T+C и для C) провести расщепление одной фосфодиэфирной связи на каждую молекулу по одному случайному соответствующему нуклеотиду
С помощью электрофореза в полиакриламидном геле разделить получившиеся фрагменты
Слайд 7Метод Максама-Гилберта (1980 г.)
Удалить немеченный фосфат с 5’-конца молекулы с
помощью фосфатазы (она же – фосфомоноэстераза)
Слайд 8Метод Максама-Гилберта (1980 г.)
Ввести меченный фосфат на 5’-конец с помощью
полинуклеотидкиназы и АТФ с меченным γ-фосфатом
Слайд 9Метод Максама-Гилберта (1980 г.)
В четырех разных реакциях (для G, для
A+G, для T+C и для C) провести расщепление одной фосфодиэфирной
связи на каждую молекулу по одному случайному соответствующему нуклеотидуРазрезаем после:
G
A и G
T и C
C
Слайд 10Метод Максама-Гилберта (1980 г.)
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC
P*O4
P*O4CT
P*O4CTCAAAAGT
P*O4CTCAAAAGTCTAGAG
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGC
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCA
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCAC
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGT
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTC
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAG
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCA
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAG
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTG и т.д.
разрезаем после C
Слайд 12Метод Максама-Гилберта (1980 г.)
Как разрезать фосфодиэфирную связь по аденозинам и
гуанозинам (A+G):
Слайд 13Метод Максама-Гилберта (1980 г.)
Как разрезать фосфодиэфирную связь по цитидинам и
тимидинам (C+T):
В щелочных условиях (0,1 М KOH) или при высокой
соли (1 М NaCl) реакция проходит только для дезоксицитидинов 
Слайд 14Метод Максама-Гилберта (1980 г.)
В четырех разных реакциях (для G, для
A+G, для T+C и для C) провести расщепление одной фосфодиэфирной
связи на каждую молекулу по одному случайному соответствующему нуклеотидуРазрезаем после:
G (ДМС)
A и G (HCOOH)
T и C (NH2NH2)
C (NH2NH2 1M NaCl
Слайд 16Метод Максама-Гилберта (1980 г.)
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC
P*O4
P*O4CT
P*O4CTCAAAAGT
P*O4CTCAAAAGTCTAGAG
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGC
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCA
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCAC и т.д.
по C
P*O4CTCAAAA
P*O4CTCAAAAGTCTA
P*O4CTCAAAAGTCTAGA
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACC
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCA
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAG
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGA и т.д.
по
G
P*O4CTC
P*O4CTCA
P*O4CTCAA
P*O4CTCAAA
P*O4CTCAAAAGTCT
P*O4CTCAAAAGTCTAG
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCC и т.д.
по A+G
P*O4C
P*O4CTCAAAAG
P*O4CTCAAAAGTC
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCG и т.д.
по T+C
Электрофорез в ПААГ
Слайд 17Метод Максама-Гилберта
P*O4CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC
A+G
G
T+C
C
и т.д.
Слайд 18Метод Сэнгера
3’-CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC -5’
5’-GAGTTTTCAGATCTCGGT-3’-OH
||||||||||||||||||
+ фрагмент Клёнова
+ dATP + dTTP +
dCTP + dGTP
+ddATP*
+ddTTP*
+ddCTP*
+ddGTP*
GAGTTTTCAGATCTCGGTGGCA-H
GAGTTTTCAGATCTCGGTGGCAGGTCCCTCGTCCA-H
GAGTTTTCAGATCTCGGTGGCAGGTCCCTCGTCCATCGA-H
и т.д.
GAGTTTTCAGATCTCGGTGGCAGGT-H
GAGTTTTCAGATCTCGGTGGCAGGTCCCT-H
и т.д.
GAGTTTTCAGATCTCGGTGGC-H
GAGTTTTCAGATCTCGGTGGCAGGTC-H
и т.д.
GAGTTTTCAGATCTCGGTG-H
GAGTTTTCAGATCTCGGTGG-H
GAGTTTTCAGATCTCGGTGGCAG-H
и т.д.
Электрофорез в ПААГ
Слайд 19A
G
T
C
GAGTTTTCAGATCTCGGTGGCAGGTCCCTCGTCCATCGACGACCCGAGGCCCCTGTGAAACGCAAGCCCG
и т.д.
Метод Сэнгера
Максама-Гилберта
Сэнгер
A+G
G
T+C
C
и т.д.
Слайд 20Метод Сэнгера vs Максама-Гилберта
- Требует большого количества исходного материала
- Требует
знания о районе для праймера
+ Нет высокотоксичных соединений
+ Возможность автоматизации
+
Возможно секвенирование сразу после выделения ДНК+ Можно секвенировать любую последовательность
- ДМС и гидразин – сильные канцерогены
- Трудно автоматизировать
Слайд 21Метод Сэнгера. Усовершенствования
Радиоактивное мечение заменено на флуорофоры
Каждый из типов нуклеотидов
мечен отдельным флуорофором
Разделение фрагментов и обработка результатов электрофореза проводятся автоматически
на приборе
Слайд 22Секвенирования второго (следующего) поколения – Next generation sequencing
Появление ПЦР в
1985 году
Появление термостабильной ДНК-полимеразы в 1986 году
Развитие микрочиповых исследований с
1995 годаКрупные вложения в технологии секвенирования в процессе секвенирования генома человека в начале 2000-х
Слайд 23Отличия NGS от «обычного» секвенирования
Не требуется проведение электрофореза
Чтение нуклеотидов осуществляется
в процессе секвенирования
Секвенируются одновременно сотни тысяч, миллионы или миллиарды последовательностей
(против 8–96 в реакции Сэнгера)Реакции секвенирования проходят на поверхности или в лунках
Слайд 24Варианты подходов в NGS (второе поколение)
Синтез
ДНК-полимераза
Лигирование
Лигаза
(SOLiD)
Меченные нуклеотиды
(Illumina)
Детекция пирофосфата
(Roche)
Изменение pH
(Ion Torrent)
Слайд 26Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология Illumina (Solexa)
Красным –
терминирующая группа. Могут быть 3’-блокирующие (слева) и 3’-неблокирующие (справа)
Синее –
неудаляемый заместитель
Слайд 31Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология 454 (Roche)
Каждый нуклеотид
добавляется поочередно, и в каждой точке проверяется, выделился ли пирофосфат
?
Слайд 32Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология 454 (Roche)
Каждый нуклеотид
добавляется поочередно, и в каждой точке проверяется, выделился ли пирофосфат
?
Слайд 33Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология 454 (Roche)
Каждый нуклеотид
добавляется поочередно, и в каждой точке проверяется, выделился ли пирофосфат
?
Слайд 34Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология 454 (Roche)
Каждый нуклеотид
добавляется поочередно, и в каждой точке проверяется, выделился ли пирофосфат
?
Слайд 35Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология Ion Torrent (ThermoFisher)
Каждый
нуклеотид добавляется поочередно, и в каждой точке проверяется, изменился ли
pH?
Слайд 36Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология Ion Torrent (ThermoFisher)
?
Каждый
нуклеотид добавляется поочередно, и в каждой точке проверяется, изменился ли
pH
Слайд 37Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология Ion Torrent (ThermoFisher)
?
Каждый
нуклеотид добавляется поочередно, и в каждой точке проверяется, изменился ли
pH
Слайд 38Варианты подходов в NGS (второе поколение): технология Ion Torrent (ThermoFisher)
Каждый
нуклеотид добавляется поочередно, и в каждой точке проверяется, изменился ли
pHhttps://www.pnas.org/content/103/17/6466.abstract?ck=nck
Слайд 39Варианты подходов в NGS (второе поколение): основная проблема пиросеквенирования и
Ion Torrent (ThermoFisher)
3’-CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC -5’
5’-GAGTTTTCAGATCTCGGT-3’-OH
||||||||||||||||||
Добавляем
A
Слайд 40Варианты подходов в NGS (второе поколение): основная проблема пиросеквенирования и
Ion Torrent (ThermoFisher)
3’-CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC -5’
5’-GAGTTTTCAGATCTCGGT-3’-OH
||||||||||||||||||
Добавляем
T
Слайд 41Варианты подходов в NGS (второе поколение): основная проблема пиросеквенирования и
Ion Torrent (ThermoFisher)
3’-CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC -5’
5’-GAGTTTTCAGATCTCGGT-3’-OH
||||||||||||||||||
Добавляем
G
3’-CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC -5’
5’-GAGTTTTCAGATCTCGGTGG-3’
||||||||||||||||||||
0
1
2
Слайд 42Варианты подходов в NGS (второе поколение): основная проблема пиросеквенирования и
Ion Torrent (ThermoFisher)
3’-CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC -5’
5’-GAGTTTTCAGATCTCGGTGG-3’-OH
||||||||||||||||||||
Добавляем
C
3’-CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC -5’
5’-GAGTTTTCAGATCTCGGTGGC-3’
|||||||||||||||||||||
0
1
2
Слайд 43Варианты подходов в NGS (второе поколение): основная проблема пиросеквенирования и
Ion Torrent (ThermoFisher)
3’-CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC -5’
5’-GAGTTTTCAGATCTCGGTGGC-3’-OH
|||||||||||||||||||||
Добавляем
A
3’-CTCAAAAGTCTAGAGCCACCGTCCAGGGAGCAGGTAGCTGCTGGGCTCCGGGGACACTTTGCGTTCGGGC -5’
5’-GAGTTTTCAGATCTCGGTGGCA-3’
||||||||||||||||||||||
0
1
2
Слайд 44Варианты подходов в NGS (второе поколение)
Синтез
ДНК-полимераза
Лигирование
Лигаза
(SOLiD)
Меченные нуклеотиды
(Illumina)
Детекция пирофосфата
(Roche)
Изменение pH
(Ion Torrent)
Высокая
точность (>99,99%)
~10 ч
7–542 $/Gb
Низкая точность (~99,5%)
~10 ч
~ 12560 $/Gb
Низкая точность
(~99,5%)~2,5 ч
4,3–50 $/Gb
Слайд 45Варианты подходов в NGS (третье поколение)
Не требует фрагментации исследуемой молекулы,
то есть выделенная ДНК (или даже РНК!) почти сразу загружается
в приборНу очень длинные прочтения (до 1 миллиона п.о.)
Проходит в режиме реального времени (нет остановки на добавление новых нуклеотидов)
Множество ошибок в определенных нуклеотидах (точность 85–95 %)
Слайд 46Варианты подходов в NGS (третье поколение)
Oxford Nanopore
MinION
Pacific Biosciences
Sequel
Прибор – 1000
$
Запуск 500–900 $
Основан на поре с геликазой
Прибор – 350’000 $
Запуск
– 850 $Основан на ДНК-полимеразе и конфокальной микроскопии
Слайд 47Варианты подходов в NGS (третье поколение): PacBio
В каждой лунке закреплена
молекула ДНК-полимеразы
Снизу в лунку поступает свет
Считывание сигнала происходит только около
полимеразыК γ-фосфату каждого нуклеотида пришит свой флуорофор
Время присоединения нуклеотида – мс, время диффузии остальных нуклеотидов - мкс
Слайд 48Варианты подходов в NGS (третье поколение): Oxford Nanopore
На мембране закреплено
множество пор, с которыми связана геликаза, разворачивающая ДНК
Из-за разного размера
азотистых оснований разные нуклеотиды по-разному «затыкают» пору, не давая проходить через нее ионам, что меняет силу тока ионовЧерез пору может протягиваться не только ДНК, но и РНК, что позволяет использовать ее напрямую, без этапа обратной транскрипции
Могут быть различены модифицированные и немодифицированные нуклеотиды
