Слайд 1Лекция
Основы лабораторной диагностики заболеваний бронхо-легочной системы
Мусатова Ольга Валерьевна
канд. мед. наук
ассистент кафедры биохимии и молекулярной биологии с курсом клинической лабораторной
диагностики
Слайд 2Дыхательная система
Дыхательная система (синоним система внешнего дыхания) — совокупность органов и
анатомических образований, обеспечивающих движение воздуха из атмосферы к легочным альвеолам
и обратно (дыхательные циклы вдох — выдох) и газообмен между поступающим в легкие воздухом и кровью.
Слайд 3Дыхательная система человека
Дыхательная система человека (вверху — сагиттальный
разрез полости
носа, рта и гортани):
1 — носовая полость;
2 — ротовая полость;
3 — гортань;
4 — трахея;
5 — левый главный бронх;
6 — левое легкое;
7 — правое легкое;
8 — сегментарные бронхи;
9 — правые легочные артерии;
10 — правые легочные вены;
11 — правый главный бронх;
12 — глотка;
13 — носоглоточный ход.
Слайд 4Функция дыхательной системы
Основная функция — обеспечение газообмена между кровью и
внешней средой в соответствии с потребностями организма, которые определяются интенсивностью
обмена веществ и значительно различаются в состояниях покоя и физической работы. В условиях основного обмена у здоровых взрослых людей частота дыхания составляет 12—16 в 1 мин диафрагма устанавливается высоко, вытесняя воздух из альвеол.
Слайд 5Алгоритм обследования больного с неспецифическими заболеваниями легких (НЗЛ)
Диагностика НЗЛ
Клиническое обследование
Рентгенологической Исследование фукций
Лабораторное
больного обследование внешнего дыхания исследования
Оценка степени тяжести НЗЛ
Оценка эффективности лечения
Прогноз течения НЗЛ
Слайд 6ИЗМЕНЕНИЯ В МОКРОТЕ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ
Мокрота – патологический продукт,
выделяемый больными при различных заболеваниях дыхательной системы. Анализы мокроты в
качестве диагностического теста могут быть использованы при различных заболеваниях легких – туберкулезе, актиномикозе, эхинококкозе, раке и др. Исследование мокроты позволяет определить степень выраженности патологического процесса и его остроту.
Слайд 7Состав мокроты
Состав мокроты может в себя включать:
слизь,
серозная жидкость,
клетки крови,
другие клетки
дыхательных путей,
элементы распада тканей,
кристаллы,
микроорганизмы,
простейшие,
гельминты, их яйца.
Слайд 8Исследование мокроты позволяет установить характер патологического процесса в органах дыхания,
определить его этиологию. Как и при исследовании других биологических жидкостей
организма, исследование мокроты разделяется на преаналитический, аналитический и постаналитический этапы. Преаналитический этап заключается в правильном сборе мокроты, ее хранение и доставка в лабораторию.
Слайд 9Условия сбора и хранения:
Производится забор утренней порции мокроты до приема
пищи, в некоторых случаях производится суточный сбор – например, при
туберкулезе.
Перед забором необходимо почистить зубы, прополоскать рот.
Забор мокроты осуществляется в специальные контейнеры с закручивающейся крышкой, объем контейнера 3-5 мл. На контейнере обязательно указывается: Ф.И.О. пациента, возраст, характер исследования, время забора, либо суточный объем мокроты.
Слайд 10Условия сбора и хранения:
Можно использовать применение ингалятора, что способствует глубокому
вдоху, покашливанию. Часто используют ингалятор, в состав которого входит: 10,5
мл трипсина, 0,5 мл эурана и 5 мл 10% NaCl.
Мокрота должна доставляться в лабораторию свежей, не позднее 2-3 часов после забора, поскольку в несвежей мокроте могут размножаться микроорганизмы и разрушаются элементы.
Слайд 11Исследование мокроты условно делится на:
макроскопический этап,
микроскопический этап.
Слайд 12Макроскопический этап исследования мокроты
Количество мокроты
разовое выделение,
выделение в течение суток.
Примеры количества
мокроты при различных заболеваний органов дыхания:
до 20-25 мл/сут.: - при
пневмонии, бронхиальной астме;
до 25-100 мл/сут.: - при хроническом бронхите, туберкулезе;
до 500 мл за 1 раз – при бронхоэктазах, образование бронхиальных свищей при эмпиеме плевры.
Слайд 13Макроскопический этап исследования мокроты
Осмотр мокроты
Осмотр производится в чашке Петри на
темном фоне, учитывается:
форма,
характер мокроты,
рассматривают различимые компоненты.
Слайд 14Макроскопический этап исследования мокроты
Форма:
комковатая,
клочковатая,
зернистая.
Слайд 15Макроскопический этап исследования мокроты
Компоненты:
спирали Куршмана (белые извитые нити
– слепки мелких бронхов);
сгустки фибрина (белые или красные, древовидно разветвленные
образования). Могут встречаться при бронхите, пневмонии;
чечевицы (зелено-желтые комочки из обызвествленных эластических волокон, кристаллов холестерина, жирных кислот, микобактерий туберкулеза);
пробы Дитриха - сходны с чечевицами по морфологии и составу, но не содержат микобактерии туберкулеза. При раздавливании отмечается зловонный запах. Отмечаются при гнойном расплавлении легочной ткани – гангрена, абсцесс, гнилостный бронхит;
Слайд 16Макроскопический этап исследования мокроты
зерна извести обнаруживаются при распаде старых туберкулезных
очагов;
друзы актиномицетов (желтые, зелено-серые зерна, мелкие, похожи на манную крупу
и окутаны гнойной массой);
некротические кусочки ткани – темные эластичные кусочки ткани или опухолевой ткани;
остатки пищи;
инородные тела;
бронхолиты (легочные камни) – обызвествленные камни крупных бронхов и полостей.
Слайд 17Макроскопический этап исследования мокроты
Консистенция:
жидкая (не образует нитей);
густая;
вязкая (толстая нить).
Слайд 18Макроскопический этап исследования мокроты
Отхождение мокроты:
Может быть легкое отхождение, отхаркивание с
трудом, либо при помощи препаровальной иглы (мокроту приподнимают над чашкой
Петри).
Слайд 19Макроскопический этап исследования мокроты
Цвет (определяется слизь, серозная жидкость, гной, кровь)
Слизистая
мокрота – бесцветная, слегка беловатая; умеренно вязкая, вязкая. Чаще отмечается
при остром бронхите;
Серозная мокрота – бесцветная, жидкая, пенистая. При отеке легкого;
Слизисто - гнойная – желто-зеленый оттенок, вязкая. Мокрота такого характера встречается при хроническом бронхите, деструктивном бронхите, туберкулезе;
Гнойная – однородная, полужидкая, желто-зеленая. При абсцессе легкого;
Кровянистая – может быть с примесью серозной и мокротой другого характера, кровь. При легочных кровотечениях;
Слайд 20Макроскопический этап исследования мокроты
Слизисто-гнойная с прожилками крови. При бронхоэктазах;
Пенистая, серозно-кровянистая
мокрота отмечается при отеке легкого;
Слизисто - кровянистая мокрота чаще отмечается
при инфаркте легкого, также при застое в малом круге кровообращения;
Гнойно-кровянистая, полужидкая мокрота, шоколадного цвета чаще всего говорит об абсцессе, гангрене легкого;
Ржавая мокрота, за счет гемосидерина, при крупозной пневмонии.
Слайд 21Макроскопический этап исследования мокроты
При хронических нагноительных процессах мокрота 3-хслойная:
пенистая бесцветная
слизь,
слизисто-серозная жидкость,
гной.
Нагноительный, гнилостный процесс (абсцесс):
серозный слой,
нижний гнойный.
Слайд 22Макроскопический этап исследования мокроты
Запах
У негнойной мокроты нет запаха, запах
наблюдается у гнойной мокроты в процессе распада, при бронхоэктазах, распадах
опухоли.
Слайд 23Макроскопический этап исследования мокроты
Реакция - щелочная!
Дифференциальный признак между кровохарканьем
и кровавой рвотой (при которой реакция кислая).
Слайд 24Микроскопический этап исследования мокроты
Из мокроты отбирают плотные компоненты, комочки (гнойные,
кровянистые), белые кровяные нити, наносят на предметное стекло, покрывают покровным
стеклом. Должен получиться тонкий полупрозрачный препарат. Смотрят на малом и большом увеличении.
Слайд 25Компоненты мокроты и расшифровка анализа
Слайд 26Компоненты мокроты и расшифровка анализа
Слайд 27 Стрептококки (1), стафилококки (2), диплобактерии Фридлендера (3), пневмококки (4);
окраска по Граму.
Слайд 28Микропрепарат мокроты.
Альвеолярные макрофаги, содержащие в цитоплазме включения гемосидерина темно-синего
цвета; реакция Перльса.
Слайд 29Атипичные клетки
Мокрота может содержать клетки злокачественных опухолей, особенно если опухоль
растёт эндоброхиально или распадается. Определять клетки как опухолевые можно только
в случае нахождения комплекса атипичных полиморфных клеток, особенно если они располагаются вместе с эластическими волокнами.
Слайд 30Микропрепарат мокроты. Опухолевые клетки — клетки аденокарциномы (указаны стрелками), окраска
гематоксилином и эозином.
Слайд 31Микропрепарат мокроты. Опухолевые клетки — полиморфные клетки плоскоклеточного рака (указаны
стрелками), окраска гематоксилином и эозином.
Слайд 32Микропрепарат мокроты. Эластические волокна в виде тонких розовых нитей; окраска
эозином.
Слайд 33Микроскопический этап исследования мокроты
Спирали Куршмана
Тяжи слизи – центральная плотная осевая
нить и спиралеобразно скручивающие ее «мантии», в которую могут быть
вкраплены лейкоциты, кристаллы Шарко-Лейдена. Появляются при спазме бронхов : бронхиальная астма, пневмония, рак легкого.
Слайд 34Микропрепарат мокроты. Спирали Куршманна (1), кристаллы Шарко — Лейдена (2)
в неокрашенном препарате мокроты больного бронхиальной астмой.
Слайд 35Микропрепарат мокроты. Клетка Пирогова — Лангханса в мокроте больного туберкулезом
легких; окраска гематоксилином и эозином.
Слайд 36Микроскопический этап исследования мокроты
Клеточные
нейтрофильные лейкоциты – при воспалительных, нагноительных
процессах;
эозинофилы, с крупной блестящей зернистостью;
эритроциты – при разрушении ткани легкого,
пневмонии, застое в малом круге кровообращения, инфаркте легкого;
Слайд 37Микроскопический этап исследования мокроты
клетки плоского эпителия – из полости рта,
диагностически не важны;
клетки цилиндрического мерцательного эпителия – при бронхитах, бронхиальной
астме;
альвеолярные моноциты, макрофаги – в их цитоплазме есть включения: пылевые клетки (частицы угля) шахтера; клетки сидерофаги (гемосидерин) – при сердечном пороке, в связи с застоем в малом круге кровообращения, макрофаг поглощает гемоглобин; липофаги – при обструкции бронхов (реакция с суданом-3).
Слайд 38Микроскопический этап исследования мокроты
Реакция на берлинскую лазурь
Мокрота + 1-2 капли
2% HCl + через 2-3 мин 1-2 капли 5 %
желтой кровяной соли
Гранулы гемосидерина окрашиваются в синий цвет
Слайд 39Микроскопический этап исследования мокроты
клетки злокачественных опухолей – при эндобронхиальном росте
опухоли; распад опухоли;
Необходима дифференциальная диагностика с деструктивными бронхитами (не расположены
на волокнистой основе, не расположены группами).
эластичные волокна – при раке, абсцессе, туберкулезе При гангрене нет, т.к. расплавляются ферментами анаэробной флоры! Эластические волокна одинаковой толщины, тонкие, двухконтурные, альвеолярного расположения.
Слайд 40Микроскопический этап исследования мокроты
Метод концентрации мокроты
К мокроте добавляют двойное количество
10% раствора едкого Na, нагревают ( для растворения форменных элементов),
после чего охлаждают, центрифугируют, окрашивают 1% спиртовым раствором эозина (несколько капель) и микроскопируют.
Слайд 41Микроскопический этап исследования мокроты
актиномицеты – просмотр ведут в капле нитроглицерина:
центральная часть - сплетение мицелия и зона лучисто расположенных колбочек.
По Граму колбочки окрашиваются в розовый цвет, а центральная часть в фиолетовый;
кандида (С. albicans) – встречается при пневмонии, на фоне длительного лечения антибиотиками; в виде ветвистого мицелия, почкующихся клеткок;
Слайд 42Микроскопический этап исследования мокроты
кристаллы:
Шарко-Лейдена – октаидер, основной компонент - эозинофилы,
белок. Встречаются при бронхиальной астме,
кристаллы гематоидина – продукт превращения гемоглобина
(кровяная мокрота),
кристаллы холестерина –крупные кристаллы в форме табличек,
кристаллы жирных кислот – тонкие, длинные иглы или капельки жира. Отмечаются при туберкулезе, абсцессе, раке легкого.
Слайд 43Другие исследования мокроты
Бактериовыделение
Бактериоскопический анализ – бактериоскопия мазков из осадка мокроты,
окраска по Романовскому - Гимзе, Цилю – Нильсону.
Бактериологический анализ –
посев на питательные среды.
Биологический анализ – заражение животных.
Слайд 44Окраска материала по Цилю-Нильсену
На фиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной
бумаги, размерами не превышающий размер покровного стекла; наливают на бумагу
фуксин Циля и осторожно нагревают его на горелке до появления пара, после чего оставляют препарат, чтобы он немного остыл.
Затем снимают бумагу с фуксином, ополаскивают препарат водой, опускают в стаканчик с 5% р-ром серной кислоты или смесью 10 частей спирта с 1 частью соляной кислоты, прополаскивают до обесцвечивания. Тщательно промывают водой.
Слайд 45Окраска материала по Цилю-Нильсену
Докрашивают любым раствором метиленового синего в течение
3-5 мин. Мазок, окрашенный по Цилю-Нильсену, вместо докрашивания метиленовым синим
можно протравить насыщенным раствором пикриновой кислоты (по Шпенглеру). Палочки, устойчивые к кислоте и спирту, окрашиваются в красный цвет, все остальные микроорганизмы — в синий. Окрашенные по Цилю-Нильсену мазки микроскопируют с иммерсионной системой не менее 10 мин. Если в окрашенном мазке содержится не менее 5 микобактерий в одном поле зрения (принято смотреть 100 полей), вероятность высева очень высока.
Слайд 46Посев материала на среду Лёвенштайна-Йенсена
Проводят в бактериологической лаборатории. Рост
первых колоний на классических средах отмечают через 4-8 нед.
Современные
методы с использованием высокоселективных сред позволяют выращивать культуры за 1-2 недели, но идентификация микроорганизма требует дополнительного времени.
Современную технику посева считают очень информативной и в развитых странах в настоящее время не проводят биологические пробы с заражением морских свинок.
М. tuberculosis обладает свойством вырабатывать ниацин, что отличает её от других микобактерий. Для более быстрой идентификации микобактерий разработаны методы гибридизации нуклеиновых кислот.
Слайд 47Другие исследования мокроты
Диагностика паразитов
Мокрота в норме не содержит паразитов и
яйца гельминтов. Выявление паразитов позволяет установить природу легочной инвазии, а
также диагностировать кишечную инвазию и её стадию:
Трофозоиты E.histolytica — легочный амёбиаз.
Личинки и взрослые особи Ascaris lumbricoides — пневмонит.
Кисты и личинки E.granulosus — гидатидный эхинококкоз.
Яйца P.westermani — парагонимоз.
Личинки Strongyloides stercoralis — стронгилоидоз.
Личинки N.americanus — анкилостомидоз.
Слайд 48Другие исследования мокроты
К мокроте добавляется 0,5% едкого Na. Полученный материал
помещают на 1,5 часа в термостате при 37о С, затем
центрифугируют при 1,5 тыс. оборотов в минуту, из осадка готовят мазок.
Слайд 49Другие исследования мокроты
Определение белка
К 10 мл мокроты добавляют 20 мл
3% уксусной кислоты, взбалтывают, фильтруют. После чего добавляют 2-3 капли
3% уксусной кислоты (наблюдается исчезновение мути). Белок определяют биуретовым методом, методом Лоури. При туберкулезе – 0,2%, пневмонии – 1-2%, отеке легкого – более 3%.