Слайд 1Методы лабораторной диагностики менингококковой инфекции
Преподаватель микробиологии Саенко Т.П.
Слайд 2Историческая справка
1) Описание вспышек менингококковой инфекции: II век до н.э.
– Аретей; I век до н. э. – Цельс; VII
век до н.э. – Павел Эгинский.
2) 1805г. – Эпидемический цереброспинальный менингит – как самостоятельное заболевание после вспышки в Женеве.
3) 1882г. – Вексельбаум обнаружил и подробно описал возбудителя.
4) 1899г. – Ослер выделил возбудителя из крови.
5) Начало XX века – изучена структура менингококков, применен ие специфических сывороток для лечения.
Слайд 3Классификация возбудителя менингококковой инфекции
Семейство: Neisseriaceae
Род: Neisseria
Вид: Meningitidis
Слайд 4Род Neisseria включает два вида микробов, патогенных для человека: N.
meningitidis и N. gonorrhoeae.
Neisseria meningitidis были выделены из цереброспинальной
жидкости больного (1887).
Слайд 5Грам-отрицательные кокки.
Менингококки.
Слайд 6Менингококки - это парные кокки, бобовидной формы, лежащие вогнутыми сторонами
друг к другу, наружные стенки у них выпуклые. Менингококки неподвижны.
Имеют множественные пили (фимбрии).
По капсульным полисахаридным антигенам все менингококки подразделены на 13 серогрупп
(А, В, С, D, Е и т.д.)
Слайд 7 По Граму менингококки окрашиваются отрицательно.
В чистых культурах располагаются тетрадами
и в виде отдельных
кокков без определенного порядка, а в
мазках, приготовленных из спинномозговой жидкости, чаще располагаются попарно. В гнойном материале часто находятся внутри лейкоцита.
Слайд 8Культивирование.
Менингококки - аэробы. Они требовательны к питательным средам, размножаются
только на средах, содержащих нативный белок (сыворотку, кровь). Посев следует
производить на свежеприготовленную среду.
В бульоне с сывороткой менингококки дают легкую муть и небольшой осадок.
Могут образовывать колонии S- и R-форм.
Тест на оксидазу (+). Ферментирует глюкозу и мальтозу до
кислоты и газа. Под действием неблагоприятных факторов среды могут становиться положительными по Граму.
Слайд 10Патогенность менингококков обусловливается наличием капсулы, которая препятствует фагоцитозу,
пилей, способствующих прикреплению
микроба к поверхности эпителиальных клеток, и образованием ферментов: гиалуронидазы и
нейраминидазы (ферменты инвазии).
Токсичные вещества менингококков обладают свойствами экзо- и эндотоксинов.
Сильный термоустойчивый липополисахаридный эндотоксин высвобождается при разрушении бактериальной стенки.
Эндотоксин обнаруживается в крови и в спинномозговой жидкости больных. Тяжесть заболевания часто зависит от количества этого накопившегося токсина.
Слайд 11Заболевание антропонозное.
Источники инфекции: бактерионосители и пациенты с инфекцией. Наиболее восприимчивы
к возбудителю дети младшего возраста, особенно до одного года.
Пути передачи
– преимущественно воздушно-капельный, в меньшей степени контактный и водно-пищевой.
входные ворота – верхние дыхательные пути (носоглотка).
Инкубационный период болезни в зависимости от формы инфекции составляет от нескольких часов до нескольких дней.
Менингококки в начале заболевания адсорбируются на эпителии носоглотки и первоначально вызывают местный процесс в виде воспаления задней стенки глотки.
Слайд 12Заболевания
До 90% инф-ных – бессимптомное бак.носительство
10-15% остр.назофарингит
До1% генирализованная Mn инфекция:
Слайд 13 При снижении активности местного иммунитета, менингококк, преодолевая местные защитные
барьеры, проникает в сосуды подслизистого слоя и затем гематогенно распространяется
в организме.
Гематогенная диссеминация (менингококцемия) сопровождается массивной гибелью возбудителей и токсинемией, обусловливая развитие генерализованных форм инфекции.
Слайд 16Через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) менингококки попадают в ЦНС.
Развивается тёк и
гнойное воспаление мозговых оболочек –
цереброспинальный менингит.
Слайд 18Условия, обеспечивающие успех диагностики менингококквой инфекции
1). Посуда для забора материала
не должна обезвреживаться дезинфектантами
2). Правильность, своевременность забора и доставки материала
в лабораторию
3). Создание оптимальных условий культивирования
4). Как можно быстрее нанести посев на питательные среды
Слайд 19Заболеваемость носит сезонный характер. Протекает в виде эпидемических вспышек.
Материал для
исследования:
- СМЖ – спинномозговая жидкость (основной);
кровь (основной);
носоглоточная слизь;
соскобы из геморрагических
элементов сыпи;
- секционный материал
.
Слайд 221) Бактериоскопия
Мазок ликвора (СМЖ – спинно-мозговой жидкости)
На предметное стекло
наносят каплю ликвора из осажденного после центрифугирования слоя и высушивают
при комнатной температуре.
Далее на препарат наносят краситель (водно-спиртовой раствор метиленовой сини) и после 2-минутной экспозиции проводят
тщательное, но осторожное промывание водой.
Препарат подсушивают и микроскопируют под иммерсией,
просматривая не менее 20 полей зрения или до обнаружения морфологически четких микробных клеток.
Слайд 23
Мазок чистой культуры (окраска по Граму в модификации Калины)
На
обезжиренное стекло наносят каплю стерильного физиологического раствора. В нем суспензируют
культуру и туда же петлей вносят каплю спиртового раствора бриллиантовой зелени.
После подсыхания препарат фиксируют над пламенем. Затем на препарат наливают основной краситель(0,5% спиртовый р-р йодистого калия). Время экспозиции 1,5 - 2,0 мин. После этого краску сливают и стекло промывают водой. Далее препарат в наклонном положении отмывают спиртом до отхождения краски и немедленно промывают водой. Затем производят докрашивание препарата водным раствором фуксина в течение 2 мин, после этого окончательно промывают водой и просушивают. Мазок просматривают под иммерсией при большом увеличении: грамотрицательные бактерии выглядят ярко-розовыми, грамположительные - сине-черными.
Слайд 24Мазок препарата «толстая капля» крови
На середину предметного стекла наносят каплю
крови и распределяют с помощью чистого стерильного аппликатора так, чтобы
диаметр мазка соответствовал величине пятикопеечной монеты. Стекло оставляют в горизонтальном положении до подсыхания крови. Данный фрагмент исследования выполняют непосредственно у постели больного при его поступлении в стационар. Далее препарат доставляют в бактериологическую лабораторию.
Окраску мазка производят водно-спиртовым раствором метиленовой сини в течение 2 - 3 мин, без предварительной фиксации. После окрашивания препарат осторожно промывают водой и подсушивают на воздухе. Препарат смотрят под иммерсией, просматривая не менее 20 полей зрения или до обнаружения морфологически четких микробных клеток.
Слайд 28На основе приказа МЗ для определения этиологии менингита (6 возбудителей)
проводятся след. тесты :
Посев на СА и ША (оценивается интенсивность
роста и изменение цв.среды)
Тинкториальные св-ва – окраска по Граму
Тест с КОН
Ферментатив.активность:
Оксидаза , каталаза расщепляют перекиси
Уреаза расщепляет мочевину
Слайд 29Исследуемый материал
Менингит – ликвор (мутный) центрифугирование – осадок
на исслед.
Менингококкцемия – кровь ср.обогащения 1:10
Бактерионосительство
мазки с
задней
Остр.назофарингит стенки глотки
Тампон на металл.стержне – угол 135 –
тампон вводят под мягкое небо –
слизь с зад.стенки глотки –
не касаться языка и щек!
Слайд 30Бактериологический метод
Схема:
1эт. 1. // посев на свежие,прогретые среды :
С.обогащения –
сыв.бульон.ППС – методом механического разобщения на КА, СА и ША
(37 , 24Ч, СО2)
2эт. 1. Оценка роста на ППС : СА- п/прозрач. колонии Sтип ; КА и ША –измен.цв.среды или нет
2. Мазки по Грамму- Гр- полиморфные
3. Оксидазный тест на колонию кап.индикатор
Изменение цвета = оксидаза+
4.Посев на скош.СА (37 , 24Ч, СО2)
Слайд 313эт. 1. Оценка роста на скош.агаре – сплош, п/прозрач.вязкий рост
2.
Гр- полиморфные клетки
3. Тест с КОН – ослизнение
4. Проба на
каталазу – Н2О2 + культура = пузырьки
5. Оксидаза+
6. Проба на уреазу- (Среда с мочевиной и индикатором - Закса)
7. ОРА с вид. и тип. диагностическими сыв-ми для определения серогруппы и серовара
8. Подтверждение вирулентности штамма :
Посев на 4 скош.агара : 2 МПА (1 -37 ; 2- 22) +
2 СА (1 -37 ; 2- 22) РОСТ ТОЛЬКО НА СА 37
ЕСЛИ ПАТОГЕН
Слайд 33Экспресс-диагностика
Для обнаружения АГ в СМЖ и/или сыворотке крови используют реакцию
латекс- агглютинации. Исследование нативного ликвора (экспресс-метод) проводится при наличии в
нем признаков гнойного воспаления и/или при микроскопическом обнаружении возбуд. Р-ция позволяет в кратчайшие сроки (15–20 мин) выявить специфические АГ самых распространенных серогрупп Mn (А, В, С, У, W-135). Рекомендуется проводить исследование в активной фазе заболевания (первые два дня после поступления в стационар)
