МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

типов микроскопов: 1. биологический, 2. люминисцентный, 3. электронный.
С помощью этих

исследований определяют: подвижность (метод «висячей капли»), морфологию, наличие капсул и спор (приготовление фиксированных мазков с последующей окраской: по Граму, Цилю-Нильсену, Бурри-Гинсу и др.)

1

2

3

стеклах. С помощью световой микроскопии можно исследовать подвижность микроорганизмов. Для

этого применяют метод висячей капли. Небольшую каплю микробной взвеси наносят на середину покровного стекла. Предметное стекло с углублением ("лункой"), края которого смазаны вазелином, осторожно накладывают на покровное стекло так, чтобы капля исследуемой жидкости оказалась в центре углубления, плотно прижимают к стеклу и быстро переворачивают кверху.
 

по показателю преломления от окружающей среды, выглядят либо как темные

на светлом фоне (позитивный контраст), либо как светлые на темном фоне (негативный контраст). Фазово-контрастная микроскопия применяется для изучения живых микроорганизмов и клеток в культуре ткани.

при темнопольной микроскопии выглядят ярко светящимися на темном фоне. Применяется

темнопольная микроскопия преимущественно для изучения спирохет и обнаружения (но не изучения морфологии) крупных вирусов.

способности некоторых веществ светиться при облучении их коротковолновой (сине-фиолетовой) частью

видимого света либо ультрафиолетовыми лучами с длиной волны, близкой к видимому свету. Люминесцентная микроскопия используется в диагностических целях для наблюдения живых или фиксированных микроорганизмов, окрашенных люминесцирующими красителями (флюорохромами) в очень больших разведениях, а также при выявлении различных антигенов и антител с помощью иммунофлюоресцентного метода

для выявления объектов, вращающих плоскость поляризации. Применяется в основном для

изучения митоза.

РНК) поглощать ультрафиолетовые лучи. Она дает возможность наблюдать и количественно

устанавливать распределение этих веществ в клетке без специальных методов окраски. В ультрафиолетовых микроскопах используется кварцевая оптика, пропускающая ультрафиолетовые лучи.

микроскопа, так и его возможностями. Изображение в электронном микроскопе наблюдают

на флюоресцирующем экране и фотографируют. Высокая разрешающая способность современных электронных микроскопов позволяет получить полезное увеличение в миллионы раз. С помощью электронного микроскопа изучают ультратонкое строение микроорганизмов и тканей, а также проводят иммунную электронную микроскопию.

например фуксином водным (1-2 мин) или метиленовым синим (3-5 мин),

промыть водой, высушить и микроскопировать.
Сложные методы. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоты и др. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Окрас методом Грама является сложным методом.

раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин

ее снять, а краситель слить.
Нанести раствор Люголя на 1-2 мин.
Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
Промыть водой.
Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать.
Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный

Пастереллы в крови птиц. 3. Капсулы сибиреязвенных бацилл.

4. Споры сибиреязвенных бацилл. 5. Споры столбнячных бацилл в культуре. 6. зерна волютина в дифтерийных коринебактериях.

эмкара в мазке из некротизированной мышцы. 9.

Бруцеллы в смешанной культуре. 10. Стрептококки в молоке. 11. Кишечная палочка в мазке из агаровой культуры. 12. Азотбактерии.

Рис. Типы колоний
Рост колоний E. coli на среде Эндо

готовят из продуктов животного или рас­тительного происхождения. Состав сред определяется

метаболи­ческими потребностями той или иной группы бактерий. Все пита­тельные среды должны отвечать следующим требованиям:
содержать основные питательные вещества в легкоусвояемой форме;
быть влажными, изотоничными и нетоксичными (для иссле­дуемых микробов);
иметь определенную вязкость;
иметь оптимальный показатель pH и окислительно-восстано­вительный (редокс) потенциал;
обладать буферными свойствами;
быть стерильными;
по возможности быть прозрачными.

растительного происхождения(мясо, костная и рыбная мука, кормовые дрожжи, сгустки крови

и др.)
синтетические среды — готовят из определённых химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворённых в дважды дистиллированной воде.
По консистенции(степени плотности):
жидкие
полужидкие
плотные
Плотные и полужидкие среды готовят из жидких, к которым прибавляют агар-агар или желатин. Кроме того, в качестве плотных сред применяют свёрнутую сыворотку крови, свёрнутые яйца, картофель, среды с силикагелем. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество — при их росте среда разжижается.

прибавляя к простым средам кровь, сыворотку, углеводы и другие вещества.
По

назначению:
основные — служат для культивирования большинства патогенных микробов. МПБ, МПА, бульон и агар Хоттингера, пептонная вода.
специальные — служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах.
селективные(избирательные) — служат для выделения определённого вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Среды становятся селективными при добавлении к ним определённых антибиотиков, солей, изменения pH. Жидкие элективные среды называют средами накопления.
дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности.
консервирующие — предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала.

производят посев материала последовательно на 2-3 чашки с агаром. В

некоторых случаях посев производят на жидкие среды. Посевы помещают в термостат на 18-24 часа. На дне чашки пишут дату посева, фамилию больного, номер анализа

Этапы:

выращенных колоний, их формы, величины и окраски. Из подозрительных колоний

делают мазки и окрашивают их по Граму. Для получения чистой культуры делают петлей пересев подозрительной колонии на косой агар, который ставят в термостат.

морфологических, культуральных, биохимических и антигенных свойств. Для обнаружения этих свойств

делают пересев чистой культуры на соответствующие питательные среды, которые ставят в термостат.

культуры, чувствительность к антибиотикам. Окончательное определение вида чистой культуры производят

при помощи реакции агглютинации на стекле микроба с иммунной сывороткой.

жидкие питательные среды с разными моноуглеводами и индикатором Андреде для

определения ферментативных свойств бактерий. При расщеплении углеводов образуются кислые продукты, изменяется цвет среды (индикатор рН) и выделяется газ.
2. Реакция на аммиак (лакмусовой бумагой под пробкой).
3. Реакция на сероводород (бумага с ацетатом свинца чернеет ).
4. Обнаружение каталазы.

Рис. «Пестрый» ряд: а-ферментация углеводов, б-отсутствие ферментации, в-индолообразование, г-образование сероводорода.

голубей, кроликов, кур и др.) с целью изучения патогенных и

вирулентных свойств бактерий, подтверждения инфекции, испытания лечебного действия лекарственных препаратов.
1. Культуру бактерий в физиологи-ческом растворе вводят животным: подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно или др. способом
2. После гибели животных вскрывают, определяют патологические изменения во внутренних органах и делают: а)мазки из внутренних органов; б)посев на питательные среды.

Рис. Внутрибрюшинное заражение белой мыши.

Силу возбудителя (вирулентность) выражают в летальных дозах, т.е. наименьшее число возбудителя, вызывающего гибель 50% (LD 50 ) лабораторных животных.

на обнаружение специфических антител (реакция преципитации - РП, реакция гемагглютинации

– РГА, РА, РСК, иммунофлюоресцентный метод и др.).

Гемолитическая сыворотка для РСК

Реакция преципи-тации в геле

Реакция гемагглютинации (РГА)

бактерий) у больных возникает повышенная чувствительность (аллергия) на месте введения,

проявляющаяся в виде покраснения, припухлости и болезненности (например, реакция Манту для выявления туберкулеза. Внутрикожно вводят туберкулин, реакцию учитывают через 48 и 72 часа).

Рис. Кожно-аллергическая проба (реакция Манту)