Слайд 3Дифференцировка лейкоцитов на основании метода Культера.
Слайд 4Изменения WBC-гистограмм.
Лимфоцитоз
WBC – 7,9х109/л,
палочкоядерные нейтрофилы – 14%,
сегментоядерные нейтрофилы
– 13%,
моноциты – 7%,
лимфоциты – 66% (из них
30 – атипичные мононуклеары).
Слайд 5Изменения WBC-гистограмм.
Лимфоцитоз
WBC – 229.0х109/л, сегментоядерные нейтрофилы – 2%,
лимфоциты –
98%.
Слайд 6Изменения WBC-гистограмм.
Лимфоцитоз
WBC – 35,0х109/л,
бласты - 66%,
миелоциты – 7%,
палочкоядерные нейтрофилы – 4%, сегментоядерные нейтрофилы – 13%, моноциты –
2%,
лимфоциты – 8%.
Слайд 7Изменения WBC-гистограмм.
Нейтрофилез
Лейкоцитарная гистограмма периферической крови больного с лейкоцитозом (13,1х109/л) и
палочкоядерным сдвигом (11%).
Слайд 8Изменения WBC-гистограмм.
Нейтрофилез
WBC – 34,5х109/л,
бласты – 7%,
миелоциты – 18%,
метамиелоциты – 2%,
палочкоядерные нейтрофилы – 16%, сегментоядерные нейтрофилы –
39%, базофилы – 6%,
моноциты – 6%,
лимфоциты – 6%.
Слайд 9Изменения WBC-гистограмм.
Нейтрофилез
WBC – 117,2х109/л,
бласты – 8%,
миелоциты – 22%,
метамиелоциты – 4%,
палочкоядерные нейтрофилы – 15%, сегментоядерные нейтрофилы –
16%, эозинофилы – 15%,
базофилы –14%,
моноциты – 3%,
лимфоциты – 3%.
Слайд 10Изменения WBC-гистограмм.
Эозинофилия
. WBC– 12,1х109/л,
палочкоядерные нейтрофилы – 2%, сегментоядерные нейтрофилы
– 22%, эозинофилы –53%,
моноциты – 3%,
базофилы – 1%,
лимфоциты
– 19%.
Слайд 11Изменения WBC-гистограмм.
Моноцитоз.
WBC – 9,5х109/л,
палочкоядерные нейтрофилы – 4%,
сегментоядерные
нейтрофилы – 59%,
эозинофилы – 1%,
моноциты – 14%,
лимфоциты
– 22%.
Слайд 13Приготовление, фиксация и окраска гематологических мазков.
Слайд 15Высохший мазок должен быть
равномерно тонким;
желтоватого цвета;
занимать не более
¾ и не менее ½ длины предметного стела;
мазок заканчивается
«метелочкой».
Толстые (густо-розового цвета) мазки использовать не следует, так как в них морфология клеток трудноразличима.
Сухие мазки могут храниться в течение 2 дней в сухом, теплом месте.
Слайд 16Фиксаторы:
Фиксатор – краска Май – Грюнвальда – З мин;
Этанол 96%, 15-25 минут;
Смесь Никифорова (этанол 96% + эфир)
(в настоящее время практически не используется из-за наличия в составе эфира).
Слайд 17Зачем фиксируем?
Фиксация предохраняет эритроциты от гемолиза (под действием воды при
смывании лишней краски) и закрепляет мазок на стекле
Слайд 18Окраска мазков крови
Мазки крови окрашивают краской Романовского.
Титр краски (разведение) и
время окраски определяют экспериментальным путем.
Обычно используют соотношение краска:дистиллированная вода как
1 к 4
Время колеблется от 5 минут (свежая краска) до 40 минут и более
Слайд 19Окраска по Романовскому
Д.Л. Романовский — русский ученый-маляриолог, предложивший в 1891г.
состав нового красителя — азура.
Азур состоит из смеси двух красителей:
метиленового синего (имеющего щелочную реакцию) и эозина (имеющего кислую реакцию).
При окраске различные компоненты клетки воспринимают краситель противоположный по реакции (например, цитоплазма лимфоцита имеет кислую реакцию, значит окрасится метиленовым синим в голубой цвет).
Слайд 20NB!
В хорошо окрашенных мазках эритроциты должны иметь розовый цвет, ядра
лейкоцитов — фиолетового цвета различной интенсивности, нейтрофилы, эозинофилы и базофилы
должны иметь характерную для них окраску зернистости.
Слайд 21Окраска на ретикулоциты
Метод суправитальной (прижизненной) окраски бриллиантовым крезиловым синим
Зернистая субстанция
ретикулоцитов окрашивается в фиолетово-синий цвет, выделяясь на зеленовато-голубом фоне эритроцитов.
В пробирке смешивают кровь с 1%-ным бриллиантовым крезилововым в физиологическом растворе в соотношении 1 к 4.
Пробирку оставляют на 30 минут, затем из капли смеси делают тонкий мазок на предметном стекле, фиксируют и считают ретикулоциты на 1000 эритроцитов.
Слайд 23ПОДСЧЕТ ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ ФОРМУЛЫ
Просматривают мазок крови под малым увеличением (объектив -
90х, окуляр - 7х или 10х).
Подсчет лейкоцитов и оценка
морфологии эритроцитов допустимы только в тонкой части мазка, где эритроциты лежат одиночно, а не сложены в «монетные столбики».
Лучше считать в тонком месте («метелка»), где хорошо видна структура клеток.
Слайд 24Подсчет лейкоцитов ведут, отступая 2-3 поля зрения от края мазка,
по зигзагу (по линии «Меандра»);
3-5 полей зрения вдоль края
мазка, затем 3-5 полей зрения под прямым углом к середине мазка, потом 3-5 полей зрения параллельно краю мазка и вновь под прямым углом возвратиться к краю мазка.
Такое движение продолжают до тех пор, пока не будет сосчитана половина клеток.
Затем переходят на противоположную сторону мазка и считают вторую половину клеток.
ПОДСЧЕТ ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ ФОРМУЛЫ
Слайд 26СТВОЛОВАЯ КЛЕТКА КРОВИ
КЛЕТКА-ПРЕДШЕСТВЕННИЦА МИЕЛОПОЭЗА
КЛЕТКА-ПРЕДШЕСТВЕННИЦА ЛИМФОПОЭЗА
Мегакариобласт
Промегакариоцит
Мегакариоцит
Тромбоцит
Эритробласт
Пронормоцит
Нормоциты
Ретикулоциты
Эритроциты
Монобласт
Промоноцит
Моноцит
Миелобласт
Промиелоцит
Миелоцит
Метамиелоцит
Палочкоядерный
Сегментоядерный
Гранулоциты зрелые
Лимфобласт
Пролимфоцит
Лимфоцит
Слайд 272.1. Морфология клеток гранулоцитарного ряда
1. Миелобласт
2. Промиелоцит
3. Миелоцит (нейтрофильный, базофильный,
эозинофильный)
4. Метамиелоцит (юный нейтрофил, эозинофил или базофил)
5. Палочкоядерные нейтрофилы
6. Сегментоядерные
нейтрофилы
Слайд 28Миелобласт
Крупное ядро
Нежная структура ядра
Наличие ядрышек (нуклеол)
Малый объем цитоплазмы
Цвет цитоплазмы чаще
всего базофильный (синий)
Слайд 29Промиелоцит - «перченая клетка»
Ядро меньших размеров, чем у бласта
Имеются остатки
ядрышек (неполноценные ядрышки)
Появляются участки более грубого хроматина
В цитоплазме – большое
количество НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЗЕРНИСТОСТИ
Слайд 30Миелоцит – «чесаная клетка»
Ядро грубой структуры с участками грубого (зрелого)
хроматина, который чередуется с участками более нежного хроматина - «чесаная»
клетка
В цитоплазме появляется СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ЗЕРНИСТОСТЬ
Выделяют миелоциты нейтрофильные, базофильные и эозинофильные
Слайд 31Метамиелоцит
Ядро становится более компактным и принимает бобовидную или почкообразную форму
Наличие
специфической зернистости
Слайд 33Палочкоядерный нейтрофил
Ядро палочковидной формы
Наличие специфической зернистости
Слайд 34Сегментоядерный нейтрофил
Ядро сегментировано
Наличие специфической зернистости
Слайд 35Дифференцировка палочкоядерных нейтрофилов от сегментоядерных
Слайд 36Ядро может быть сегментировано, но может быть и палочковидной формы
Специфическая
зернистость рыжего цвета
Эозинофилы
Слайд 38Базофилы
Ядро может быть сегментировано, но может быть и палочковидной формы
Специфическая
зернистость темно-фиолетового цвета
Слайд 412.2. Морфология клеток моноцитопоэза
На данный момент регистрируется много лейкозов моноцитарного
происхождения, как острых, так и хронических
Важно дифференцировать клетки данного ряда
Монобласт
Промоноцит
Моноцит
На
данный момент гематологи рекомендуют при микроскопии промоноциты отностить к монобластам
Слайд 42Моноциты
В процессе дифференциации промоноцита в моноцит у ядра появляется бухтообразное
вдавление, которое в дальнейшем углубляется.
Ядро моноцита может приобретать самые
причудливые формы, иногда оно становится сегментированным, подобно сегментоядерным нейтрофильным гранулоцитам.
Цитоплазма моноцита чаще всего светло-голубых тонов, содержит пылевидную азурофильную зернистость (цвет Питерского неба, цвет табачного дыма).
Слайд 482.3. Морфология клеток лимфоцитарного ряда
Лимфобласт
Пролимфоцит
Лимфоцит
Слайд 50Лимфоциты
Ядро округлое, занимает большую часть цитоплазмы, расположено в центре или
эксцентрично.
Цитоплазма голубого или синеватого цвета, иногда в ней можно
рассмотреть неспецифическую азурофильную зернистость
Структура ядра – глыбчатая (напоминает рисунок колеса велосипеда).
Лимфоциты могут быть малые – до 8 мкм, средние – до 12 мкм, большие – более 12 мкм.
Слайд 51Иногда ядро может быть некруглым (форма Ридера)
Такие лимфоциты полноценны
в функциональном отношении.
В норме могут встречаться в небольшом количестве:
их не отмечаем отдельно.
Но если их много – обязательно отмечаем.
Причины: инфекционный мононуклеоз, хронический лимфолейкоз.
Слайд 52Морфология плазматических клеток
Слайд 532.4 ЭРИТРОПОЭЗ
Эритробласт
Пронормоцит
Нормоцит базофильный
Нормоцит полихроматофильный
Нормоцит оксифильный
Ретикулоцит
эритроцит
Слайд 541
2
ПРОНОРМОЦИТ
3
4
5
6
7
МИЕЛОИДНАЯ КЛЕТКА-ПРЕДШЕСТВЕННИЦА
СТВОЛОВАЯ КЛЕТКА КРОВИ
Слайд 55Морфология нормоцитов
Базофильный нормоцит – базофильная цитоплазма (синяя), большое ядро грубой
структуры, сравнивают с вишневой косточкой
Полихроматофильный нормоцит – цитоплазма серовато-розового цвета,
ядро несколько меньше, но той же грубой структуры
Оксифильный нормоцит – цитоплазма розового цвета, маленькое ядро грубой структуры.
ОСНОВНАЯ ФУНКЦИЯ – НАКОПЛЕНИЕ ГЕМОГЛОБИНА
ПОЯВЛЯЮТСЯ В КРОВИ ПРИ УСИЛЕННОМ КРОВЕОБРАЗОВАНИИ ПРИ ЛЕЙКОЗАХ И ВЫРАЖЕННЫХ АНЕМИЯХ
Слайд 56Ретикулоциты
Это безъядерные клетки розоватого цвета с синеватым отливом (прижизненная окраска
бриллиант-крезиловым).
При микроскопическом исследовании в них видны внутриклеточные структуры, которых
нет у эритроцитов, так называемая сетчатая субстанция.
Активность этих клеток показывает, с какой скоростью в костном мозге идет образование эритроцитов.
Ретикулоциты выполняют те же функции, что и эритроциты, то есть переносят кислород, но менее эффективно.
Слайд 602.5 Тромбоцитопоэз
Мегакариобласт
Промегакариоцит
Мегакариоцит
Тромбоциты
Слайд 61
НАЗОВИТЕ КЛЕТКИ
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАДАНИЕ
ЗАКРЕПЛЕНИЕ ПРОЙДЕННОГО МАТЕРИАЛА
Слайд 81Значение системы гемостаза
1. Сохранение крови в жидком состоянии (адекватное соотношение
активности свертывающей и противосвертывающей систем)
2. Предупреждение и остановка кровотечения (поддержание
постоянного объема циркулирующей крови)
Слайд 82ГЕМОСТАЗ ОБЕСПЕЧИВАЕТСЯ СИСТЕМАМИ:
СОСУДИСТОЙ
СВЕРТЫВАЮЩЕЙ
ПРОТИВОСВЕРТЫВАЮЩЕЙ (ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ И АНТИКОАГУЛЯНТНОЙ)
ТРИ ЗВЕНА
ГЕМОСТАЗА
КЛЕТКИ И КОМПОНЕНТЫ СТЕНКИ СОСУДА ( ЭНДОТЕЛИЯ ,ГЛАДКОМЫШЕЧНЫЕ , ТУЧНЫЕ, ФИБРОБЛАСТЫ, адгезивные молекулы, рецепторы и др. )
КЛЕТКИ КРОВИ ( ТРОМБОЦИТЫ, МОНОЦИТЫ И ДР, агонисты и рецепторы)
БЕЛКИ ПЛАЗМЫ КРОВИ ( 13 ФАКТОРОВ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ,АКТИВАТОРЫ И ИНГИБИТОРЫ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ФИБРИНОЛИЗА, БЕЛКИ СИСТЕМЫ ПРОТЕИНА С )
Слайд 83Терминология
Адгезия – прилипание тромбоцитов к участку повреждения сосудистой стенки
Агрегация –
склеивание тромбоцитов друг с другом
Слайд 84Механизмы гемостаза. Основные события.
Слайд 85Сосудисто – тромбоцитарный (первичный) гемостаз
Ведущая роль в предупреждении и
остановке кровотечений из наиболее ранимых сосудов малого калибра (до 100
мкм)
Слайд 86Секреция мощного активатора адгезии тромбоцитов к субэндотелию(коллагену) – фактора Виллебранда;
-
продукция стимулятора агрегации тромбоцитов – циклического простагландина - тромбоксана А2
-
продукция и высвобождение тканевого тромбопластина или тканевого фактора – главного активатора основного механизма свертывания крови
- продукция ингибитора тканевого активатора плазминогена – РАI-1 и PAI-2
Эндотелий сосудов
Слайд 87В крови количество тромбоцитов в норме – 180 (150) –
400 х 109/л
Уменьшение создает угрозу кровотечений (20 - 30
х 109/л), однако критическим является лишь снижение числа тромбоцитов в крови ниже 10 х 109/л.
Гипертромбоцитозы в пределах от 600 – 1200 х 109/л (при мегакариоцитарных миелолейкозах, эритремии) создается высокий риск развития тромбозов сосудов и инфарктов органов.
ТРОМБОЦИТЫ
Слайд 88Оценка тромбоцитопоэза
Увеличение MPV
(высок риск тромбоза)
при атеросклерозе,
сахарном диабете,
у
курильщиков
лиц, страдающих алкоголизмом.
Крупные тромбоциты с аномальной морфологией появляются
при миелопролиферативных заболеваниях.
Уменьшение MPV
после спленэктомии
PLT (platelet) кол-во тромбоцитов 180 (150) -400 х 109/л
MPV (mean platelet volume) средний объем тромбоцитов 8,1 ±1,9fl
PDW (platelet distribution width) показатель анизоцитоза тромбоцитов 16,3 ± 1,0
Слайд 90Тромбоцитарная гистограмма не начинается на базисной линии.
Возможные причины:
Высокое фоновое значение
(загрязнение реагентов)
Фрагменты клеток (эритроцитов, лейкоцитов)
Высокое количество бактерий в крови
Изменения
тромбоцитарных гистограмм
Слайд 91Тромбоцитарная гистограмма имеет несколько пиков.
Возможные причины:
Анизоцитоз тромбоцитов
Восстановление тромбоцитарного звена
после химиотерапии
Агрегация тромбоцитов
Изменения тромбоцитарных гистограмм
Слайд 92Лабораторное исследование системы первичного гемостаза
1. Определение количества тромбоцитов
2. Изучение мазка
периферической крови дает дополнительную информацию о причине аномального количества тромбоцитов.
3. Время кровотечения (ВСК, ДК) (позволяет определить состояние сосудов после взаимодействия между тромбоцитами и сосудистой стенкой.)
4. Исследование агрегации тромбоцитов – позволяют дифференцировать качественные нарушения тромбоцитов с помощью специального устройства – агрегометра, с использованием различных индукторов (АДФ, ристомицин, адреналин, коллаген)
Слайд 94ТРОМБОЦИТОПЕНИЯ
Патологическое состояние которое характеризуется понижением содержания тромбоцитов в крови (меньше
150·109 /л)
Слайд 95Аутоиммунная тромбоцитопения
БОЛЕЗНЬ ВЕРЛЬГОФА
(аутоиммунная
хроническая тромбоцитопеническая пурпура)
Синтезируются антитела (иммуноглобулины) против собственных тромбоцитов и тромбоциты
разрушаются
* Основным местом синтеза Ig G является селезенка
* Принцип лечения:
- спленэктомия
- кортикостероиды
- иммунодепресанты
* Полного излечения не бывает
Слайд 96С НАРУШЕНИЕМ АДГЕЗИИ И АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ
Синдром Виллебранда-Юргенса (АР)
Причина – дефицит
фактора Виллебранда
Патогенез – нарушена адгезия тромбоцитов вследствие дефицита фактора 8
Наследственная
тромбоцитопатия
Слайд 97Тромбоцитопатии в сочетании сдругими наследственными аномалиями
Синдром Вискотта-Олдриджа
- Причина – в
тромбоцитах мало плотных гранул (АДФ, серотонин, адреналин, Са2+), альфа-гранул (бета-тромбоглобулин,
фибриноген, фибронектин, ростовой фактор)
- Патогенез –сниженная адгезия и агрегация тромбо-цитов, нарушено освобождение гранул
- Признаки: геморрагический синдром появляєтся рано, могут быть смертельные кровотечения
Наследственная тромбоцитопатия