Определение естественных регуляторных Т-клеток

выполняющие функции регулировщиков, или супрессоров, по отношению к другим клетками

иммунной системы. Treg контролируют иммунный ответ на чужеродные и аутоантигены и предотвращают развитие аутоиммунных процессов.
Известны по крайней мере два варианта регуляторных Т- клеток:
-Естественные (природные- natural), спонтанно развивающиеся в тимусе клетки (Тreg).
-Адаптивные, формирующиеся на периферии (индуцированные) (Th3- и Tr1-клетки).
Все эти клетки происходят из СD4+ T-лимфоцитов.

выявление экспрессии мембранных антигенов (CD4, CD25, CTLA-4)
Оценка экспрессии гена FOXP3.
Оценка

функциональной активности Тreg.

Только комбинация всех трех подходов дает реальную информацию о состоянии субпопуляции Тreg.

Тreg, методом проточной цитометрии с помощью моноклональных антител, меченых флуорохромами.
Выявляют

CD4, CD25, CTLA-4 (CD152)
Причем учитываются только клетки с высоким уровнем экспрессии CD25
Иногда в тест систему включается определение CD127 (не экспрессируется на Treg)

составляет 2-3,5% от числа мононуклеаров, или 35- 100 клеток в

1 мкл.

селекция CD4+
Положительная селекция СD25+

Тест с подавлением пролиферативного ответа на стимуляцию

клеток CD4+CD25-

на пластинке)
Культивирование 12ч при +4
+ смесь растворимых антител к CD28

и IL-2(рекомбинантный)
+ сингенные мононуклеары (АГ предст. Клетки)
Культивирование 60 часов при 37
Добавление 40кБк Тиминина
Культивирование 12 часов
Сбор данных

гибель клетки, обусловленную нарушением условий существования или прямым повреждающим действием

внешних факторов, является активной формой гибели клетки, обусловлена включением через сигнальные пути механизмов, приводящих к деградации генетического материала и истощении энергетических ресурсов.
Различают: внутренний (митохондриальный ) и рецепторный.

клонального состава популяций лимфоцитов, а так же в повышении сродства

В- лимфоцитов, а следовательно, и антител к антигену и в ограничении продолжительности иммунного ответа.
Формирования разрывов ДНК
Деградация и потеря клеткой части ДНК
Асимметрия мембраны с экспрессией на поверхности необычных молекул
Изменения морфологии клетки

йодидом
Регистрация потери ДНК в тесте с применением пропидия йодида

йодидом
Принцип: определение экспрессии фосфатидилсерина, появляющегося на поверхности клетки вследствие нарушения

асимметрии мембраны в процессе апоптоза, с помощью аннексина V (обладающего сродством к фосфатидилсерину), меченного флуорохромом.
Параллельно определяют некроз клеток, регистрируя появление проницаемости для пропидия йодида, связывающегося с ДНК клетки.
Нередко комбинируют с определением субпопуляционной принадлежности.