ДНК с помощью пары коротких одноцепочечных молекул ДНК - синтетических праймеров.
ПЦР была
изобретена в 1983 году американским биохимиком Кери Муллисом.
Разделы презентаций
- Разное
- Английский язык
- Астрономия
- Алгебра
- Биология
- География
- Геометрия
- Детские презентации
- Информатика
- История
- Литература
- Математика
- Медицина
- Менеджмент
- Музыка
- МХК
- Немецкий язык
- ОБЖ
- Обществознание
- Окружающий мир
- Педагогика
- Русский язык
- Технология
- Физика
- Философия
- Химия
- Шаблоны, картинки для презентаций
- Экология
- Экономика
- Юриспруденция
Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
Содержание
- 1. Полимеразная цепная реакция Polymerase Chain Reaction
- 2. История метода В 1971 г. норвежский учёный Хьелль Клеппе
- 3. История методаScience. 1985. V. 230. P. 1350-1354 Нобелевская премия1993
- 4. Использование ПЦР
- 5. Применение ПЦРКлонирование геновГенотипирование организмовДиагностика наследственных, инфекционных и
- 6. Основные этапы ПЦРДЕНАТУРАЦИЯОТЖИГ ПРАЙМЕРАЭЛОНГАЦИЯ
- 7. 1) Денатурация ДНК 95°С
- 8. 2) Отжиг (гибридизация) праймеров Температура отжига
- 9. 3) Элонгация 72°СДезоксирибонуклеозидтрифосфоты(dATP, dGTP, dCTP, dTTP)
- 10. Слайд 10
- 11. Увеличение ампликона происходит в геометрической прогрессии
- 12. ДНК-полимеразы, используемые при проведении ПЦРTermus aquaticus –
- 13. ДНК-полимеразы, используемые при проведении ПЦР
- 14. Подбор праймеровДлина праймеров – 18-30 нуклеотидовСодержание GC
- 15. Основные компоненты для проведения ПЦРДНК-матрицаДНК-полимеразаБуфер: - 10
- 16. Дополнительные компоненты для проведения ПЦРДМСО (5%) –
- 17. Ингибиторы ПЦР
- 18. 95˚C- 2 мин (горячий старт - денатурация)
- 19. Эффект «выхода на плато» Истощение субстратов (dNTP
- 20. Скачать презентанцию
История метода В 1971 г. норвежский учёный Хьелль Клеппе предложил способ амплификации ДНК с помощью пары коротких одноцепочечных молекул ДНК - синтетических праймеров.ПЦР была изобретена в 1983 году американским биохимиком Кери Муллисом.
Слайды и текст этой презентации
Слайд 2История метода
В 1971 г. норвежский учёный Хьелль Клеппе предложил способ амплификации
ДНК с помощью пары коротких одноцепочечных молекул ДНК - синтетических праймеров.
изобретена в 1983 году американским биохимикомКери Муллисом.
Слайд 5Применение ПЦР
Клонирование генов
Генотипирование организмов
Диагностика наследственных, инфекционных и онкологических заболеваний
Идентификация личности
и установление родства; криминалистика
Анализ древних останков, эволюционная биология
Детекция ГМО
Слайд 82) Отжиг (гибридизация) праймеров Температура отжига зависит от длины и состава
праймеров (50 – 70°С)
Слайд 12ДНК-полимеразы, используемые при проведении ПЦР
Termus aquaticus – бактерия, живущая в
горячих источниках Йеллоустонского национального парка США при температуре, близкой 85
°С
Слайд 14Подбор праймеров
Длина праймеров – 18-30 нуклеотидов
Содержание GC должно составлять 45-55%
Разница
в температурах отжига между прямым и обратным праймером не более
5оСНе должны формировать димеры на 3-концах
Не должны формировать шпилек на 3-конце
Слайд 15Основные компоненты для проведения ПЦР
ДНК-матрица
ДНК-полимераза
Буфер:
- 10 mM Tris-HCl,
pH = 8,0-8,8;
- 50 mM KCl;- 1,5-2.5 mM MgCl2
Праймеры
dNTP
Слайд 16Дополнительные компоненты для проведения ПЦР
ДМСО (5%) – улучшает амплификацию GC-богатых
матриц и отжиг праймеров
Формамид (1-5%) – улучшение специфичности реакции
Глицерин
(1-10%), БСА (0,01-0,1%), Triton X100 (0.05-0.1) – стабилизаторы фермента(NH4)2SO4 (1-10%) – улучшение отжига праймеров
Слайд 1895˚C- 2 мин (горячий старт - денатурация)
2) 94˚С -30
сек (денатурация)
3) 62˚С -45 сек (отжиг)
25-40циклов4) 72˚С -40 сек (элонгация)
72˚С -3-5 мин (конечная элонгация)
Программа для проведения ПЦР
Слайд 19Эффект
«выхода на плато»
Истощение субстратов (dNTP и праймеров)
Падение активности
dNTP и фермента
Накопление ингибиторов, например, пирофосфатов и ДНК-дуплексов
Конкуренция за реагентов
неспецифическими продуктами или праймер-димерамиКонцентрация специфического продукта и неполная денатурация при высокой концентрации продуктов амплификации.
